杨开祥
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 去分化重编排脂肪干细胞在张应力刺激下成骨分化的研究
- 2013年
- 目的探讨去分化重编排脂肪干细胞在张应力刺激下的成骨分化并探讨其分子机制。方法分离人脂肪干细胞（hASCs），取第3代hASCs进行去分化重编排并标记为去分化重编排脂肪干细胞（De—hASCs）。张应力刺激条件下，将De．hASCs和hASCs在成骨诱导液中培养1周。并于培养4d和7d后检测碱性磷酸酶（ALP）活性，Runx2的mRNA和蛋白表达水平，骨形态发生蛋白（BMP）-2和基质金属蛋白酶（MMP）-3的mRNA表达水平。结果张应力刺激4d后，De—hASCs组的ALP活性高于hASCs组，但差异无统计学意义（P〉0．05）。张应力刺激7d后，De—hASCs组ALP活性高于hASCs组，且差异有统计学意义（P〈0．05）。张应力刺激4d和7d后，De—hASCs组Runx2的mRNA和蛋白表达水平均明显高于hASCs组，且差异有统计学意义（P〈0．05）。张应力刺激4d和7d后，De—hASCs组BMP-2和MMP-3的mRNA表达水平均明显高于hASCs组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论张应力刺激条件下，去分化重编排脂肪干细胞具有更强的成骨分化能力，且与其上调BMP-2和MMP-3基因表达相关。
- 叶亚平胡伟华杜宇吴颖星杨开祥郭风劲
- 关键词：成骨分化脂肪干细胞
- 周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的影响被引量：2
- 2013年
- 目的观察周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞增殖相关基因的影响。方法采用四点弯曲应力仪分别以2 000μstrain和4 000μstrain的牵张力刺激前软骨干细胞1 h,并设空白对照组,荧光定量PCR检测相关增殖基因PCNA和Cyclin D1的表达情况,并用免疫荧光检测力学激前后Ki67阳性细胞的表达情况。结果 2 000μstrain刺激组细胞表达PCNA以及CyclinD1较对照组高(P<0.05),免疫荧光检测提示2 000μstrain刺激组的细胞核内Ki67表达较对照组明显增多;而4 000μstrain刺激组细胞PCNA的表达与对照组相比明显降低(P<0.05),而Cyclin D1降低不明显(P>0.05)。结论适宜的周期性单轴牵张力能引起大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的表达增加。
- 杨开祥吴颖星宋明宇程鹏郭风劲
- 关键词：软骨细胞干细胞
- NF-κBshRNA转染骨髓间充质干细胞对炎症因子的影响被引量：1
- 2014年
- 目的鉴定NF-κB/p65-shRNA质粒并转染入骨髓间充质干细胞,检测靶细胞在NF-κB通路激活时磷酸化NF-κB/p65的表达。方法用双酶电泳鉴定所得质粒。使用HP试剂将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至小鼠BMSCs,在荧光显微镜下观察绿色荧光,并且以流式细胞术检测转染效率,最后以Western Blot检测转染后靶细胞在炎症环境下对磷酸化NF-κB/p65表达的抑制情况。结果 NF-κB/p65-shRNA质粒酶切鉴定结果与预期一致;流式细胞术检测转染效率达到52.76%;Western Blot检测在炎症环境刺激下,转染后靶细胞磷酸化NF-κB/p65表达明显降低。结论成功将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至BMSCs中并有效表达,为进一步实验通过BMSCs修复和重建骨关节炎患者的软骨组织奠定基础。
- 吴颖星杨卿杨开祥叶亚平向威郭风劲
- 关键词：NF-ΚB间质干细胞骨关节炎
- 稳定表达TSLC1基因骨肉瘤MG63细胞系的建立及鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的建立稳定表达人肺癌抑癌基因-1(TSLC1)骨肉瘤细胞系并对其进行鉴定。方法脂质体转染的方法将真核表达载体pCI-TSLC1稳定转染至MG63细胞系,经克隆化培养以及G418筛选,获得了1株稳定高表达TSLC1蛋白的细胞系。对其表达的蛋白性质进行了鉴定,对其分泌动态、细胞纯度、遗传稳定性、外源基因整合等生物学特性做了鉴定。结果获得高表达TSLC1的稳定细胞系,命名为M8T。生物学性状研究结果表明该转基因细胞系纯度好,遗传性状稳定,抽提细胞RNA进RT-PCR,扩增到与预期结果大小一致的DNA片段,说明TSLC1基因成功整合到细胞基因组中。细胞系无细菌和霉菌污染。结论成功建立了稳定表达TSLC1的骨肉瘤细胞系M8T。该细胞系遗传性质稳定,为进一步研究抑癌基因TSLC1在骨肉瘤中的作用奠定了基础。
- 覃莉林阳杨开祥祝文涛
- 关键词：基因肿瘤抑制骨肉瘤转基因细胞系
- 周期性单轴牵张力对前软骨干细胞增殖影响的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的观察周期性单轴牵张力对前软骨干细胞增殖能力的影响。方法免疫磁珠分选新生大鼠前软骨干细胞(precartilaginous stem cells,PSCs),取生长良好的第三代PSCs,通过四点弯曲细胞加压装置对细胞加载不同的机械牵张力(2 000、4 000μstrain),并在不同时间点(1、2、4和8 h)收集细胞,采用流式细胞仪检测应力刺激后PSCs的细胞周期及增殖指数的变化,揭示不同的牵张力在不同的时间点对PSCs增殖活性的影响。结果周期性单轴牵张力能影响大鼠PSCs的增殖活性。2 000μstrain机械牵张力组与对照组相比,增殖指数升高(P<0.05),促进细胞增殖,并且S期DNA合成率增多(P<0.05);而4 000μstrain机械牵张力组与对照组比较,增殖指数降低,抑制细胞增殖(P<0.05),同时S期细胞DNA合成率减少(P<0.05)。结论适宜的机械牵张力能促进PSCs增殖,过大的机械牵张力反而抑制细胞增殖。
- 杨开祥吴颖星杜宇刘芳娜郭风劲
- 关键词：软骨细胞干细胞
- Hedgehog信号通路抑制剂HPI-4对软骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响被引量：3
- 2014年
- 目的检测Hedgehog(HH)信号通路在人软骨肉瘤中的表达情况,探讨HH信号通路抑制剂HPI-4对于软骨肉瘤细胞SW1353增殖和侵袭能力的影响。方法应用免疫组化技术检测人软骨肉瘤标本中HH信号通路相关蛋白Ihh及增殖相关蛋白Ki67的表达情况,应用CCK-8实验、平板集落形成实验、Transwell肿瘤细胞侵袭实验及免疫印迹法(Western blot)检测HPI-4阻断HH信号通路后SW1353细胞增殖和侵袭能力的变化。结果免疫组化结果证实Ihh蛋白及Ki67蛋白在人软骨肉瘤中存在明显表达。经不同浓度HPI-4干预后,CCK-8实验显示软骨肉瘤细胞SW1353的增殖活性随HPI-4浓度的增高而逐渐降低;平板集落形成实验显示单个肿瘤细胞不断克隆形成集落的能力受到抑制;Transwell实验证实肿瘤细胞侵袭能力随着HPI-4浓度的增高而递减;Western blot结果显示肿瘤细胞内增殖与侵袭相关蛋白的表达明显下降。结论人软骨肉瘤中存在HH信号通路的明显激活,HH信号通路抑制剂HPI-4能够明显抑制软骨肉瘤细胞的增殖和侵袭能力。
- 向威郭风劲蒋婷宫晨杨开祥吴颖星许凯
- 关键词：软骨肉瘤肿瘤浸润细胞增殖
