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禽流感、新城疫可目视化诊断蛋白芯片的制备及初步应用被引量：14: 2009年; 本研究制备了可以同时鉴别诊断禽流感(AI)、新城疫(ND)2种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。以超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了2种病毒蛋白抗原,用点样缓冲液稀释后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;将芯片与待检血清杂交后,再与胶体金标记的二抗杂交,银染显色后根据灰度值判定结果,从而建立了2种禽病的可视化蛋白芯片鉴别诊断方法。采用该方法对18份现地血清样品进行初步检测,结果显示该芯片可特异性的与相应的抗体杂交,无交叉反应,而且呈现较强的杂交信号,其信号灰度值在阳性血清浓度为50μg/mL～300μg/mL范围内成线性关系(Y=0.426X+4.225)。用该芯片方法和琼扩(AGP)抗体检测方法对18份现地样品进行符合率检测,结果表明该可视化蛋白芯片具有很好的特异性,并且检测灵敏度为是AGP方法的400倍以上。研究表明该方法可用于同步鉴别2种禽病,是一种有效的抗体检测新方法。; 石霖王秀荣杨忠苹陶启蒙王煜武嘉男蔡冬冬包红梅陈化兰; 关键词：禽流感新城疫可视化蛋白芯片

4种禽病毒抗体可视化蛋白芯片的制备及应用被引量：8: 2009年; 【目的】研制可同时鉴别检测AI、ND、IB、IBD等4种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。【方法】用超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了4种病毒蛋白抗原,调整到合适浓度后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;分别用4种禽病阳性血清杂交,再与金标二抗杂交,银染显色后读取结果,建立4种禽病的可视化蛋白芯片工作平台;进一步对此芯片的特异性以及灰度值与抗体浓度的相关性进行了研究;最后对18个现地血清样品进行了初步应用检测。【结果】结果显示经过条件优化后,芯片检测探针可特异性的相应的抗体进行杂交,呈现较强的杂交信号,且无交叉杂交。信号灰度值在抗体浓度为50～300μg·ml-1范围内成线性关系。用芯片和其它传统抗体检测方法同时检测18份现地样品,结果发现可视化蛋白芯片具有很好的特异性,并且灵敏性明显高于传统检测手段。【结论】研究表明该方法可用于同步鉴别4种禽病抗体,是一种有效的抗体检测新方法。; 石霖王秀荣杨忠苹陶启蒙蔡冬冬武嘉男王馥梅田国彬陈化兰; 关键词：可视化蛋白芯片禽病

禽流感病毒等RNA病毒鉴别基因芯片的制备被引量：6: 2008年; 将克隆和鉴定的AIV的HA、NA、M、NS、NP基因以及NDV、IBDV、IBV的保守基因片段作为探针，同时以克隆的GAPDH基因作为阳性对照，利用芯片点样系统spotArray TM24将探针与阳性对照、阴性对照和空白对照按照设计好的阵列点在基片上，制备了AIV等RNA病毒诊断芯片，并从点样条件和杂交条件两个方面进行了优化。结果显示，探针浓度在300～1200μg／mL时点样，Cy3-dUTP终浓度为0．05μmol／mL，杂交温度在42℃，杂交时间在8～12h时，杂交信号比较理想。该方法对20份已鉴定的H5N1亚型禽流感病毒的检出率为100％（20／20）；10份现地送检的疑似AIV样品的检出率为70％（7／10），检测结果与RT—PCR和鸡胚传代分离鉴定的符合率为100％。结果表明，制备的DNA芯片可有效诊断上述病毒。; 田丽娜王秀荣杨忠苹石霖陶启蒙包红梅李雁冰陈化兰; 关键词：禽流感病毒基因芯片

区分禽流感病毒亚型诊断基因芯片的构建被引量：7: 2008年; 制备了可同时区分AIVH5、H7、H9血凝素亚型及N1、N2神经氨酸酶亚型的基因诊断芯片。试验以重组质粒为模板,进行PCR扩增,然后用异丙醇沉淀法进行纯化,制备探针及内参基因。将探针及内参基因用点样缓冲液稀释到0.3μg/μL后用芯片点样仪将其点制到醛基化基片上,样点中心间距450μm,样点直径220μm。将点好的基片在室温干燥24h以上,后经65℃再水合10s、80℃干燥、65mj紫外线交联照射25min后,再用封闭液封闭,95℃变性处理,成功构建了能区分禽流感血凝素H5,H7,H9亚型及神经氨酸酶N1,N2亚型的检测基因芯片。在PCR扩增中标记待检样品,对制备的检测芯片进行质量检验,结果表明,制备的区分禽流感病毒亚型基因芯片可区分AIV部分亚型。; 杨忠苹王秀荣石霖田丽娜王煜陶启蒙陈化兰; 关键词：禽流感基因芯片

禽流感基因诊断技术研究进展被引量：2: 2008年; 禽流感是由流感病毒引起的一种人和动物的高度传染性疾病,不但造成养禽业的巨大经济损失,还对人类公共卫生安全存在威胁。因此,快速、准确的基因诊断技术对于禽流感的防控显得非常重要。近年来,主要有RT-PCR技术、荧光定量RT-PCR技术、核酸依赖扩增技术(NASBA)以及基因芯片等基因诊断技术。文章就这些方法的基本原理、检测优点以及应用现状进行综述,以期为有效控制禽流感的发生与流行提供有力技术支撑。; 田丽娜王秀荣杨忠苹石霖陶启蒙陈化兰; 关键词：禽流感反转录-聚合酶链反应基因芯片

利用基因芯片技术区分禽流感病毒主要亚型: 禽流感病毒(AIV)亚型众多,变异频繁,现已发现16种不同的血凝素亚型(HA)和9种不同的神经氨酸酶亚型(NA),一般认为H5、H7亚型具有高致病力,并且发现H5,H7和H9亚型逐渐对人有感染性。因此建立能迅速、有效的鉴...; 杨忠苹王秀荣田丽娜陈化兰王煜; 关键词：疾病诊断基因芯片技术; 文献传递网络资源链接

鉴别禽流感主要亚型诊断芯片的构建及其应用: 禽流感病毒(Avianinfluenzavirus，AIV)亚型众多，变异频繁，现已发现16种不同的血凝素亚型(HA)和9种不同的神经氨酸酶亚型(NA)。根据致病力不同，禽流感可分为高致病性和低致病性，能引起高致病性禽流...; 杨忠苹; 关键词：禽流感; 文献传递

利用基因芯片技术区分禽流感病毒主要亚型被引量：6: 2008年; 【目的】研制可同时区分AIV的H5、H7、H9血凝素亚型及N1、N2神经氨酸酶亚型的基因诊断芯片。【方法】分别克隆了禽流感病毒的M基因,H5、H7、H9亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因以及看家基因GAPDH的重组质粒。以重组质粒为模板,用PCR方法扩增制备探针,纯化后点于氨基修饰的片基上,制备基因芯片。在PCR过程中对待检样品进行标记,然后与芯片杂交,洗涤,扫描并进行结果分析。【结果】结果显示检测探针可特异性的与相应的标记样品进行杂交,呈现较强的杂交信号,且无交叉杂交。同时用RT-PCR、鸡胚接种和基因芯片方法对H1-H15亚型AIV参考毒株、30份人工感染样品、21份现地疑似样品进行检测,结果发现,对人工感染样品芯片检测方法与鸡胚接种和RT-PCR的符合率分别为100%和96%,现地样品符合率为100%。【结论】研究表明该方法可用于同步鉴别部分主要流行的禽流感亚型,是一种有效的新方法。; 杨忠苹王秀荣田丽娜王煜陈化兰; 关键词：基因芯片禽流感

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杨忠苹