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湛秀萍: 作品数：36 被引量：103H指数：6; 供职机构：北京市结核病胸部肿瘤研究所更多>>; 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市青年科技骨干培养基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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CYP2A6基因多态性与肺癌易感性关系的研究: 2004年; 目的探讨代谢活化酶细胞色素P4502A6(CYP2A6)与肺癌易感性的关系。旨在为确定肺癌易感性遗传标记提供依据。方法采用病例一对照研究方法及巢式PCR技术检测原发性肺癌组(180例)及对照组(224例)的CYP2A6代谢酶基因型。Epi Info 2000统计软件进行统计分析。结果本研究未能发现CYP2A6基因多态性与肺癌易感性存在相关关系。对照组只检测出1例纯和型CYP2A6缺失，CYP2A6杂和缺失型所占比例为13．8％。在肺癌组中CYP2A6杂和缺失型所占比例为12．8％，未能检测出纯和型CYP2A6缺失，两组比较无统计学差异(p>0．05)。结论CYP2A6在尼古丁、亚硝胺等致癌物的代谢中发挥着重要的作用。但CYPs各亚家族之间的协同关系起着非常重要的作用，单一代谢酶基因型不能决定致癌物在体内的转归。; 顾艳斐张树才赖百塘湛秀萍; 关键词：CYP 肺癌易感性基因多态性代谢酶基因致癌物

外源p53对人肺癌细胞生长的抑制被引量：2: 1998年; 目的　观察外源性野生型p53对有p53基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法　用PCR SSCP及DNA测序 ,选择p53突变的人肺巨细胞癌系 80 1 D。构建野生型p53表达质粒PZiP p53。用基因枪介导外源基因。经G41 8筛选得到转染细胞系 80 1 D p53。用PCR检测外源基因 ,观察转染细胞恶性生长的变化。结果　转染细胞系 80 1 D p53体外长期传代有外源性p53基因存在 ,转染细胞生长明显受到抑制 ,集落形成抑制率达 96% ,裸鼠异种移植致瘤性降低 ,肿瘤生长明显缓慢。结论　外源性野生型p53经基因枪导入有p53基因突变的人肺癌细胞后可长期存在于转染细胞中 ,且明显抑制所转染的癌细胞的恶性生长。; 汪蕙赖百塘李金照蔡国平杨学惠张春燕刘桂芝韩岩湛秀萍刘晖; 关键词：细胞系 P53基因基因疗法

p53C末端356～393氨基酸对人肺癌细胞恶性表型的影响被引量：8: 2003年; 目的　研究去除C末端 3 56～ 3 93氨基酸p53对人肺癌细胞恶性增殖抑制的影响。方法利用DNA重组技术 ,构建去掉C末端 3 56～ 3 93区 3 7个氨基酸残基p53和全长p53真核细胞表达质粒[pEGFP p53 (del) ,pEGFP p53 ]。p53缺失和突变的人肺癌细胞系 80 1D为受体细胞 ,lipofectin介导质粒转染细胞。G418筛选 ,建立转染克隆细胞系。以PCR、荧光显微镜检查外源基因的表达 ;以集落形成和裸鼠移植瘤试验检测细胞体内外恶性增殖能力 ;以移植瘤或接种部位细胞团印片检查荧光蛋白表达。结果　建立了转染克隆细胞系pEGFP p53 80 1D、pEGFP p53 (del) 80 1D和pEGFP 80 1D ,证明有外源p53基因存在和外源绿色荧光蛋白基因表达。pEGFP p53 (del) 80 1D体外集落形成抑制率为 99.6% ,pEGFP p53 80 1D为 81.1% ,pEGFP p53 (del) 80 1D细胞恶性增殖能力明显低于pEGFP p53 80 1D (P <0 .0 1)。pEGFP p53 (del) 80 1D形成的少数集落也有外源p53基因和绿色荧光蛋白表达。裸鼠移植瘤试验显示 ,对照组 80 1D和pEGFP 80 1D移植瘤为阳性 (4/ 4,4/ 4) ,pEGFP p53 (del) 80 1D和pEGFP p53 80 1D移植瘤为阴性 ,接种细胞部位仍有残留细胞团存在 ,有少数表达荧光蛋白的活细胞。结论去除C末端 3 56～ 3 93氨基酸的p53 。; 汪蕙李金照赖百塘杨学惠张春彦岳文涛湛秀萍; 关键词：P53蛋白肿瘤异质性氨基酸

p53基因对人肺癌细胞系耐药性的影响: 2008年; 背景与目的肺癌细胞的耐药性是影响化疗疗效的重要因素之一,已有的研究表明p53基因异常与肿瘤细胞耐药性的产生密切相关。本研究的目的是探讨不同状态的p53基因对人肺癌细胞系耐药性的影响,为临床选择有针对性的化疗药物提供依据。方法采用质粒pEGFP,分别构建含正义、反义p53cDNA的真核细胞表达载体,测序法检测外源p53基因。用脂质体介导转染人肺癌细胞系801D,建立含不同p53基因状态的单克隆细胞系,分别为pEGFP-801D、pEGFP-sensep53-801D[含有正义p53,pEGFP-p53(RS)-801D]、pEGFP-antisensep53-801D[含有反义p53,pEGFP-p53(AS)-801D]。荧光显微镜观察细胞绿色荧光,PCR法检测外源基因,MTT法检测耐药性,流式细胞术检测细胞周期与凋亡。结果测序结果显示外源p53基因分别以正向、反向连接于载体,荧光显微镜下转染细胞可见绿色荧光,PCR法检测出外源p53基因和neo基因。pEGFP-p53(AS)-801D细胞系对顺铂(Cisplatin,DDP)的IC50为0.26±0.09μg/mL,显著低于母系(0.55±0.19μg/mL,P<0.05)和空载系(0.77±0.13μg/mL,P<0.05)。pEGFP-p53(RS)-801D细胞系对DDP的IC50为0.43±0.25μg/mL,显著低于空载(P=0.000)但高于pEGFP-p53(AS)-801D(P<0.05)。pEGFP-p53(RS)-801D细胞系对紫杉醇(Paclitaxel,TAX)的IC50为2.34±0.43ng/mL,显著低于母系(8.40±1.50ng/mL,P﹤0.05),低于空载系但无显著差异。pEGFP-p53(RS)-801D细胞系对5氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5FU)的IC50为2.08±0.18μg/mL,显著低于母系(4.90±1.12μg/mL,P<0.05)和空载系(3.41±0.86μg/mL,P<0.05)。DDP能诱导pEGFP-p53(AS)-801D出现G2期阻滞,TAX、5FU诱导pEGFP-p53(RS)-801D细胞系分别出现G2、S期阻滞,DDP、TAX能诱导细胞凋亡和死亡。结论肺癌细胞中不同状态的p53基因对化疗药的耐药性有不同影响。p53突变、缺失与DDP耐受相关,p53缺失与TAX、5FU耐受相关,p53突变或缺失与长春瑞宾(Navelbine,NVB)、吉西他宾(Gemcitabine,GEM)耐药均无关。提示针对患者个体的�; 陶虹朱允中汪惠赖百塘张春彦湛秀萍王玥杨学惠岳文涛张洪涛; 关键词：P53基因耐药细胞周期凋亡

肺癌TIL抗瘤活性、表型分析及临床应用的初步观察被引量：2: 2001年; 目的　从肺癌患者手术切除的肿瘤组织中分离出肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL) ,经rIL 2体外激活培养 ,研究TIL对瘤细胞的杀伤活性及其表型变化 ,并对其回输后的毒副反应及患者免疫功能变化进行了观察。方法　从 5 1例肺癌患者手术切除的实体瘤中分离得到TIL ,并经 10 %人AB血清RPMI 16 40液培养。 12例在培养前、后应用 3H TdR释放实验测定TIL对自体瘤细胞和 80 1 D细胞的杀伤作用 ,13例用间接免疫荧光法测定了淋巴细胞表型CD3+ 、CD4+ 、CD8+ 比例的变化。 15例患者静脉输注了活化的自体TIL。结果　TIL在培养第 2 5天左右对自体瘤细胞和 80 1 D细胞的杀伤力比培养当天有显著性提高 ;淋巴细胞表型分析示CD3+ 、CD8+ 比例在培养过程中有明显提高 ,而CD4+ 比例和CD4+ /CD8+ 比值变化不大 ;自体回输的 15例患者一般状况好 ,无明显毒副反应 ,辅助检查无异常改变 ,免疫功能增强 ,复查血尿常规、生化、心肺功能等均无异常改变 ,远期疗效正在观察中。结论　大部分病例短期即可回输TIL ,且毒副反应小 ,因此肺癌TIIL过继免疫治疗是一种值得在临床进一步研究的免疫治疗方法。; 张毅李世业赖百塘汪蕙湛秀萍刘桂枝王月; 关键词：肿瘤浸润淋巴细胞白细胞介素-2 过继免疫治疗

低能超声波对人肺癌细胞的杀伤作用被引量：1: 1999年; 低能量（０．８ｗ／ｃｍ＾２）连续波超声，在０℃时超声３分钟即可杀死８０％的多种类型人肺癌细胞及人肺纤维母细胞；超声１０分钟即可杀死全部细胞，细胞悬液浓度增加，杀伤力减弱，在０℃，２５℃及３７℃下处理，３７℃时超声杀伤细胞作用最强，每隔１０秒钟的超声场下试管内细胞悬液的温度监测结果表明，低能超声对体外癌细胞的杀伤并不是由于热加升温作用所致。; 赖百塘湛秀萍; 关键词：肺癌细胞系杀伤作用体外研究

肺癌患者血清MMP-9，Endostatin，VEGF水平及临床意义被引量：4: 2005年; 目的测定肺癌患者血清中MMP-9，endostatin，VEGF水平，探讨其在肺癌中的特异性及与化疗的关系。方法应用酶联免疫吸附法（ELISA），测定三种因子在144例肺癌患者血清中的表达。结果肺癌患者血清MMP-9、endostatin、VEGF水平显著高于健康人及肺良性病患者（P〈0．001）；肺癌患者血清MMP-9、endostatin及VEGF水平与肿瘤组织类型、有无远处转移、临床分期及原发肿瘤大小相关（P〈0．05）；化疗后VEGF、endostatin水平变化与疗效相关，有显著性差异（P〈0．001）；肺癌患者血清MMP-9，endostatin水平呈正相关（r=0．260，P=0．012）。结论肺癌患者血清MMP-9，endostatin，VEGF水平明显升高．在肺癌的病理疾病过程中有特殊意义，可作为预测肺癌恶性行为和治疗反应的良好指标。; 李雪冰李宝兰赖百塘朱允中张新勇戈启萍湛秀萍王玥; 关键词：内皮抑素酶联免疫吸附测定血清MMP-9 ENDOSTATIN 肺癌患者

抗肺腺癌单链抗体的克隆、表达及应用的初步研究: 目的:制备抗人肺癌单链抗体(Single Chain Fv ferment antibody,ScFv),并对生物学特性进行初步研究。探讨应用该抗体进行免疫导向治疗的可能性。方法:利用RT-PCR方法从5F-11杂交瘤细...; 岳文涛赖百塘张春燕湛秀萍; 文献传递

p53缺失和突变对人肺癌细胞系恶性表型影响的比较: 2003年; 目的比较研究外源正义和反义p53对所转染细胞系恶性表型的影响。方法构建正义和反义p53C—DNA真核细胞表达载体pEGFP—p53(RS)，pEGFP—p53(AS)，载体有绿荧光蛋白基因监测基因转染和表达。经酶切图证明p53正向或反向联结。Liipofectin介导转染801D细胞(801D细胞有p53缺失和突变，蛋白表达阳性)，G418筛选，建立单克隆细胞系。PCR检测外源p53和neo基因。荧光显微镜检查转染细胞绿荧光蛋白表达。免疫组化染色证明突变蛋白表达。比较了pEGFP—p53(AS)和pEGFP—p53(RS)集落形成试验，裸鼠移植试验。FCM分析细胞周期。结果酶切图证明pEGFP—p53(RS)和pEGFP—p53(AS)的p53c—DNA(RS)分别正向和反向联结质粒pEGFP。Lipofectin介导转染细胞801D细胞，G418筛选，获耐受集落，建立单细胞克隆转染细胞系pEGFP—p53(RS)—801D，pEGFP—p53(AS)801D和pEGFP—801D。PCR检测外源p53和neo基因存在于细胞，细胞可见绿色荧光，证明外源基因存在并稳定表达。免疫组化检测pEGFP—p53(AS)—801D，突变蛋白呈阴性，母系为阳性，显示反义p53封闭突变蛋白表达。pEGFP—p53(RS)—801D和pEGFP—p53(AS)801D细胞集落形成率和裸鼠移植成瘤率均降低，pEGFP—p53(RS)-801D更低。FCM分析细胞周期延滞。结论有p53缺失和突变的人肺癌细胞系801D体内外恶性增殖明显，在同一细胞背景下，p53缺失比p53突变对恶性增殖起更重要作用。外源野生型p53在肿瘤细胞中可重建抑癌功能，外源反义p53可封闭突变蛋白表达，阻止细胞停留于G1期。; 汪惠赖百塘李金照扬学惠张春彦岳文涛张洪涛李曦湛秀萍王玥; 关键词：基因突变人肺癌裸鼠细胞恶性表型

脆性组胺酸三联体基因对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响被引量：1: 2005年; 目的研究外源性脆性组胺酸三联体(FHIT)基因在体内外对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响。方法用脂质体介导外源FHIT基因转染A549细胞,建立单克隆细胞系FHITA-549和PEGFP-A549。逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组化方法检测外源FHIT基因在A549细胞的表达状况。采用细胞生长曲线、集落形成试验、流式细胞仪及裸鼠移植瘤试验研究外源FHIT基因对A549细胞体外增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤性的影响。结果RTPCR试验证实FHIT-A549中有FHITmRNA表达,免疫组织化学染色显示FHIT-A549细胞FHIT蛋白表达强阳性,而A549细胞和转空载体的PEGFPA549细胞FHIT基因和蛋白表达均阴性。FHIT-A549细胞的集落形成率为2.6%,显著低于A549细胞的50.1%和转染空载体PEGFPA549细胞的53.6%,三者相比差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪分析显示FHIT-A549细胞95.8%阻滞在G2期。FHITA549细胞移植瘤的瘤重为(0.04±0.03)g,显著低于A549细胞的(0.24±0.11)g和转染空载体PEGFPA549细胞的(0.25±0.07)g,三者差异有统计学意义(P<0.01)。结论A549细胞内外源FHIT基因的转导并表达能显著抑制其恶性增殖和分裂,诱导其凋亡,调节其细胞周期、抑制成瘤性。; 张立群汪蕙赖百塘岳文涛湛秀萍杨学惠张春燕张同梅; 关键词：细胞恶性表型 FHIT基因流式细胞仪分析免疫组化方法细胞生长曲线细胞体外增殖

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