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王海震: 作品数：16 被引量：71H指数：3; 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因A/D区的构建及原核表达研究: 利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪瘟病毒石门株(CSFV Shimen strain)囊膜糖蛋白E2全基因,再以E2基因为模板扩增其中适于在E.coli中表达且抗原性较好的基因片段(E2蛋白A/D抗原区基因序列...; 王海震李学仁周斌陈溥言; 关键词：猪瘟病毒 E2基因; 文献传递

猪瘟病毒E2蛋白主要抗原域的高效表达及间接ELISA方法的初步建立被引量：17: 2005年; 重组质粒pET-2e转化宿主菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导表达,比较不同诱导条件下目的蛋白的表达量,确定其最佳表达条件,使外源基因获得了较高水平的表达,可达菌体蛋白总量的36.6％。Western-blot检测表明表达产物具有良好的免疫反应原性。将收集的纯培养物进行超声波裂解后以镍亲和层析柱纯化回收目的蛋白,再以纯化后的目的蛋白作为包被抗原进行方阵滴定试验,确定了目的蛋白作为包被抗原的最佳稀释度,初步建立了检测CSF血清抗体水平的间接ELISA方法。以此方法建立的间接ELISA方法对收集的约120头份血清样品进行检测,结果显示:使用囊素与疫苗共同免疫猪的血清抗体水平明显高于未加囊素组猪的血清抗体水平,与以往的报道一致,为以CSFV重组蛋白作为抗原建立的间接ELISA方法的标准化奠定基础。; 王海震李学仁冯秀丽陈溥言; 关键词：猪瘟病毒 E2蛋白间接ELISA 猪瘟

真核生物mRNA 3′非翻译区的功能被引量：23: 2008年; 真核生物mRNA的3′非翻译区的功能复杂多样,不仅能调控其mRNA的稳定性、控制mRNA的亚细胞定位,而且还在特定氨基酸的编码过程中起着指导作用.一些真核生物mRNA的3′非翻译区内的突变可引起疾病的发生.近几年的研究又发现,一些真核生物mRNA的3′非翻译区还具有抑制肿瘤生长的功能.; 王海震王莹刘定干; 关键词：MRNA

含口蹄疫病毒VP1基因与结核杆菌HSP70基因的重组腺病毒转移载体的构建: 根据GenBank已发表的结核杆菌HSP70的基因序列及O型口蹄疫病毒VP1基因序列,应用Primer5.0软件设计了两对引物,其中一对引物用于扩增结核杆菌基因组中的HSP70完整基因另一对引物用于以pMD-D为模板,扩...; 王海震陈溥言; 关键词：口蹄疫病毒结核杆菌基因重组; 文献传递

含双拷贝CSFV E2基因A和D片段原核表达载体的构建及表达被引量：3: 2004年; Full E2 gene fragment of Classical swine fever virus (CSFV)shimen strain was amplified by RT-PCR method, then a specific fraction -the A, D antigenic domains- , which encodes protein with good antigenicity and suitable for being expressed in E. coli with high level, was amplified respectively by 2 different pair of primers. Then the 2 amplified fragments were tandemly linked and inserted into prokaryotic expressing vector pET-32a to obtain the plasmid pET-2e. The SDS-PAGE assay showed that although the proteins were present in the form of inclusion body, the linked proteins were expressed from plasmid pET-2e as expected, and can be expressed with high level when induced with IPTG.Western-blotting showed good antigenicity of the target protein.; 王海震杨松苏小运曹瑞兵陈溥言; 关键词：猪瘟病毒石门株 E2基因分子生物学免疫学

猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因A/D区的构建及原核表达研究: 利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪瘟病毒石门株(CSFV Shimen strain)囊膜糖蛋白E2全基因,再以E2基因为模板扩增其中适于在E.coli中表达且抗原性较好的基因片段(E2蛋白A/D抗原区基因序列...; 王海震李学仁周斌陈溥言; 关键词：猪瘟病毒 E2基因囊膜糖蛋白疫病诊断; 文献传递

含口蹄疫病毒VP1基因与结核杆菌HSP70基因的重组腺病毒转移载体的构建: 根据GenBank已发表的结核杆菌HSP70的基因序列及O型口蹄疫病毒VP1基因序列,应用Primer5.0软件设计了两对引物,其中一对引物用于扩增结核杆菌基因组中的HSP70完整基因,另一对引物用于以pMD-D为模板,...; 王海震陈溥言; 文献传递

犬α干扰素基因的高效表达及其活性测定被引量：21: 2005年; 以伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导的犬外周血淋巴细胞中提取的总RNA为模板,通过RT PCR的方法克隆扩增出犬α干扰素基因,将所扩增基因克隆于原核表达载体pBV220 并进行测序,结果显示该基因与GenBank上所公布的犬α干扰素基因同源性为100%。将重组表达载体转入宿主菌进行温敏诱导表达,表达产物经SDS PAGE分析,证明目的蛋白以包涵体的形式存在,大小约为19kDa。将表达产物变性、复性、透析、纯化处理后加入犬肾细胞上,用水泡性口炎病毒攻毒,测出重组的CaIFN α具有较高的抗病毒作用,生物活性达到5.11×106 ∪/ ,重组蛋白质的含量约为13 /L。; 王艳王海震曹瑞兵陈溥言; 关键词：原核表达重组干扰素

C／EBPβ mRNA3′非翻译区肿瘤抑制功能的分子机制--同时缺失3段短序列降低其肿瘤抑制活性被引量：2: 2009年; CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)mRNA的3′非翻译区(3′UTR),是先前工作发现的一个具有肿瘤抑制功能的RNA调控元件.应用基因定点突变技术将该3′UTRcDNA上的三段核苷酸同时缺失掉,将缺失突变体稳定转染人肝癌细胞系SMMC-7721,并检测了该缺失突变体对SMMC-7721细胞系表型的影响,包括测定稳转细胞系的生长曲线、软琼脂集落形成能力、细胞集落形成能力及裸小鼠成瘤性.研究发现,C/EBPβ3′UTR中这三段短序列的同时缺失明显降低了3′UTR的肿瘤抑制活性,使受其稳定转染的细胞系恶性显著增强.人全基因组基因芯片分析和实时荧光RT-PCR分析结果表明,与回复对照细胞相比,缺失突变3′UTR稳定转染细胞中,一些癌基因的表达量有所增加,而一些抑癌基因的表达量有所下降,这提示上述三段短序列是C/EBPβ3′UTR的肿瘤抑制功能所同时需要的.; 王海震王莹孙达权刘定干; 关键词：C/EBPΒ 抑癌作用分子机制

含口蹄疫病毒VP1基因与结核杆菌HSP70基因的重组腺病毒转移载体的构建被引量：1: 2005年; 根据GenBank已发表的结核杆菌HSP70的基因序列及O型口蹄疫病毒VP1基因序列,应甩Primer5．0软件设计了2对引物,其中一对引物用于扩增结核杆菌基因组中的HSP70完整基因,另一对引物用于以pMD-D为模板,扩增其中的VP1完整基因序列。将所扩增的2段基因串联插入腺病毒转移载体pAdenovator-CMV5-IRES-GFP的BglⅡ位点,经PCR方法和限制性酶切方法鉴定2基因已成功插入了转移载体并且插入方向正确,获得了重组腺病毒转移载体pAdenovator- CMV5-IRES-GFP-VP1-HSP,此转移载体可与腺病毒骨架载体进行细菌内同源重组,以产生重组腺病毒载体。; 王海震陈溥言