李学仁
- 作品数：11 被引量：33H指数：3
- 供职机构：南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫控制重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 重组奶牛α、γ干扰素的研制及其抗病毒作用
- 近年来，牛干扰素的抗病毒和疫苗佐剂功能也在更多的试验中被发现和证实。本研究的目的就是应用基因工程和蛋白质工程技术研制出具有自主知识产权的重组牛α、γ干扰素并研究其抗病毒作用，为我国重组牛干扰素的工程化生产及其在养牛业中的...
- 李学仁
- 关键词：干扰素抗病毒活性原核表达毕赤酵母奶牛
- 文献传递
- 含CSFV E2基因A/D区原核表达载体的构建、表达及其抗原性研究被引量：2
- 2004年
- 应用RT PCR方法扩增了编码猪瘟病毒石门株 (CSFVshimenstrain)囊膜糖蛋白E2全基因 ,然后将其克隆到pMD 1 8T质粒中 ,获得重组质粒pMD E2。再以pMD E2为模板 ,另行设计两对引物 ,同时扩增其中一段适于在E .coli中表达且抗原反应性较好的基因片段 (E2蛋白A D抗原区基因序列 ) ,将扩增的两片段串联插入原核表达载体pET 32a中构建成重组质粒pET 2e。用酶切和序列分析鉴定插入目的基因的正确性。SDS PAGE和Western blot分析表明 ,经pET 2e转化、IPTG诱导的受体菌可表达目的蛋白 ,克隆在硫氧还蛋白 (thioredoxinprotein ,TrxA)基因下游的E2蛋白基因与TrxA基因获得了高效融合表达 ,并且具有免疫学反应活性 。
- 王海震王秀花李学仁周斌陈溥言
- 关键词：E2基因免疫学反应血清学诊断
- 猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因A/D区的构建及原核表达研究
- 利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪瘟病毒石门株(CSFV Shimen strain)囊膜糖蛋白E2全基因,再以E2基因为模板扩增其中适于在E.coli中表达且抗原性较好的基因片段(E2蛋白A/D抗原区基因序列...
- 王海震李学仁周斌陈溥言
- 关键词：猪瘟病毒E2基因
- 文献传递
- 猪瘟病毒E2蛋白主要抗原域的高效表达及间接ELISA方法的初步建立被引量：17
- 2005年
- 重组质粒pET-2e转化宿主菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导表达,比较不同诱导条件下目的蛋白的表达量,确定其最佳表达条件,使外源基因获得了较高水平的表达,可达菌体蛋白总量的36.6％。Western-blot检测表明表达产物具有良好的免疫反应原性。将收集的纯培养物进行超声波裂解后以镍亲和层析柱纯化回收目的蛋白,再以纯化后的目的蛋白作为包被抗原进行方阵滴定试验,确定了目的蛋白作为包被抗原的最佳稀释度,初步建立了检测CSF血清抗体水平的间接ELISA方法。以此方法建立的间接ELISA方法对收集的约120头份血清样品进行检测,结果显示:使用囊素与疫苗共同免疫猪的血清抗体水平明显高于未加囊素组猪的血清抗体水平,与以往的报道一致,为以CSFV重组蛋白作为抗原建立的间接ELISA方法的标准化奠定基础。
- 王海震李学仁冯秀丽陈溥言
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白间接ELISA猪瘟诊断试剂盒
- 猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因A/D区的构建及原核表达研究
- 利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪瘟病毒石门株(CSFV Shimen strain)囊膜糖蛋白E2全基因,再以E2基因为模板扩增其中适于在E.coli中表达且抗原性较好的基因片段(E2蛋白A/D抗原区基因序列...
- 王海震李学仁周斌陈溥言
- 关键词：猪瘟病毒E2基因囊膜糖蛋白疫病诊断
- 文献传递
- 猪α1-干扰素全基因大肠杆菌偏嗜性密码子改造及高效原核表达
- 干扰素(interferon,IFN)是一类具有抗病毒、抗肿瘤和免疫激活功能的细胞因子。IFN可分为两个型,IFN-α多基因家族属于Ⅰ型干扰素,目前已知人类IFN-α可分为2个亚型,20多种。IFN-α因具有显著的抗病毒...
- 曹瑞兵王旭东王敏秀郑其生李学仁陈德胜陈溥言
- 文献传递
- 猪瘟病毒保护抗原E2和猪IgG重链基因的合成及其表达蛋白被引量：2
- 2004年
- 根据已发表文献及DNAstar软件分析 ,选取双拷贝Shimen株猪瘟病毒E2基因A ,D区和猪IgG重链中可与SPA非特异性结合的区域作为目的基因进行串联表达。根据GenBank发表的序列 ,Primer5 0软件的辅助下分别设计三对引物 ,并在扩增第二条和第三条片段的上游引物 5′端分别设计一个长 5个氨基酸的Linker,将扩增的三片段串联克隆入原核表达载体pET 32a中 ,构建成重组质粒pET 2eh ,对重组质粒诱导表达 ,表达蛋白经纯化后标记于CowanⅠ株金黄色葡萄球菌SPA上 ,与收集的 80份待检血清进行平板凝集试验 ,结果与现有诊断试剂盒检测结果具有较好的符合性。该方法具有简单 ,快速 ,敏感 ,易于操作的特点。
- 王海震李学仁刘文波周斌苏鑫铭冯秀丽王旭东陈溥言
- 关键词：猪瘟病毒IGG
- 猪α<,1>-干扰素全基因大肠杆菌偏嗜性密码子改造及高效原核表达
- 为了比较研究本组已克隆和表达的poIFN-α(另文发表)与poIFN-α1的抗病毒等生物学特性的差异,本研究人工合成了密码子改造的poIFN-α1基因,在大肠杆菌中进行表达,并测定其抗病毒活性.
- 曹瑞兵王旭东王敏秀郑其生李学仁陈德胜陈溥言
- 关键词：干扰素大肠杆菌原核表达
- 文献传递
- 奶牛α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定被引量：8
- 2005年
- 提取经新城疫病毒诱导培养的奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α干扰素成熟蛋白基因,然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,测序结果表明,扩增片段为牛α干扰素成熟蛋白序列,与Genebank上发表的α1干扰素序列同源性为98%。然后将特异性片段连接到含分泌信号肽序列的Pichiapastoris表达载体pPICZαA上,将重组质粒经SacI酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。转化子经PCR分析鉴定后利用甘油增菌和甲醇诱导,实现了BoIFN-α在毕赤酵母系统中的分泌表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为23kDa,比其推导结果(20kDa)略大,推测可能是因为表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制法结果表明,重组牛IFN-α具有较高的干扰素活性,约为4.1×105U/ml,经微量蛋白测量仪测得,其表达量约为80μg/ml,比活为5.1×106U/mg。
- 李学仁曹瑞兵李斐魏建超陈溥言
- 关键词：毕赤酵母分泌表达生物活性测定RT-PCR方法PASTORISSDS-PAGE
- 奶牛γ干扰素基因的高效表达及活性测定被引量：3
- 2004年
- 经刀豆素(conA)刺激诱导奶牛外周血淋巴细胞,应用RT-PCR方法从其总RNA中对奶牛γ干扰素基因cDNA进行扩增,然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,测序结果表明,与已知序列同源性为100%。然后将特异性片段连在pRLC载体上进行表达,经SDS-PAGE分析,原核表达产物为16kDa的重组蛋白,占菌体总蛋白的42%,表达产物以包涵体形式存在。经7mol/L盐酸胍的变性液溶解及0.5mol/L盐酸胍复性液处理,表达产物进行脱盐、凝胶层析纯化,细胞病变抑制法结果表明,重组牛IFN-γ具有较高的干扰素活性,约为6.0×105U/mg。
- 李学仁王海震葛菲菲王旭东曹瑞兵陈溥言
- 关键词：奶牛Γ干扰素基因活性
