胡明
- 作品数：38 被引量：48H指数：4
- 供职机构：青岛大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省科技攻关计划'泰山学者'建设工程专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学艺术经济管理更多>>
- 紫杉醇诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡过程中转录激活因子5和Bax表达水平的变化被引量：3
- 2010年
- 目的转录激活因子5(Activating transcription factor 5,ATF5)是一个新的与肿瘤细胞分化、增殖及凋亡密切相关的因子。文中检测胰腺癌SW1990细胞中ATF5的表达,并进一步研究紫杉醇(Paclitaxel,PTX)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡的水平,及其与ATF5、Bax表达水平的相关性。方法 RT-PCR检测未经药物处理的SW1990细胞中ATF5 mRNA表达水平;以不同浓度的紫杉醇(0、6.25、12.5、25、50、100、200 nmol/L)作用SW1990细胞不同时间(0、6、12、24、48 h),噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;用100 nmol/L紫杉醇作用SW1990细胞不同时间(0、12、24、48 h)后,观察形态学变化并用Annexin V/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测紫杉醇作用不同时间后ATF5、Bax的mRNA表达变化。结果胰腺癌SW1990细胞中表达ATF5。紫杉醇抑制胰腺癌SW1990细胞的增殖,并在一定范围内呈剂量、时间相关性。随着紫杉醇作用时间的增加,流式细胞仪检测凋亡率显著提高。半定量RT-PCR检测结果显示:ATF5、Bax mRNA表达均明显增强,且两者之间存在相关性(r=0.916,P<0.05)。结论 ATF5在胰腺癌SW1990细胞中高表达,并且在紫杉醇诱导的细胞凋亡过程中,表达量进一步上升,其变化趋势与Bax基因相似。提示ATF5参与紫杉醇诱导的细胞凋亡,并可能与Bax的凋亡途径存在相关性。
- 胡明钱冬萌侯云彭凯李玲宋旭霞LIU David X王斌
- 关键词：紫杉醇胰腺癌细胞SW1990凋亡
- HCMV基因在人和小鼠胚胎成纤维细胞中表达的差异性研究
- 2013年
- 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)种属特异性机制尚不清楚。研究通过检测HCMV AD169体外感染人胚胎成纤维细胞(Human embryo fibroblast,HEF)和小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)后病毒基因的表达情况,探讨HCMV种属特异性的可能分子机制。首先用HCMV AD169(MOI=5)分别感染HEF和MEF,相差显微镜逐日观察细胞的形态学变化;RT-PCR检测HCMV即刻早期(IE1、IE2)、早期(UL84)和晚期基因(UL83)的表达情况;Western-blot和免疫荧光检测病毒基因编码蛋白表达的情况。形态学观察发现HEF感染HCMV后逐渐变大变圆并相互融合,第4天可见典型的HCMV特征性病变效应,而MEF则未出现上述的变化;RT-PCR和Western-blot表明HEF组表达即刻早期基因IE1和IE2、早期基因UL84和晚期基因UL83 mRNA以及各基因所编码的蛋白,且相对表达量显著高于模拟感染组(P﹤0.01);而MEF组仅IE1和IE2 mRNA和蛋白相对表达量显著低于HEF组(P﹤0.05),而高于模拟感染组(P﹤0.01)。免疫荧光检测发现HEF感染72 h表达IE和UL83蛋白,而MEF则无明显表达。以上结果表明,HCMV不能在MEF中复制并产生完整子代病毒颗粒,且病毒基因表达阻止在IE2基因表达之后和UL84基因表达之前,其种属特异性可能与即刻早期蛋白低水平的表达量有关。
- 杨瑞王斌钱冬萌李玲周雯王桐梅胡明陈豪宋旭霞
- 关键词：人巨细胞病毒即刻早期基因
- 金标法检测胎膜早破孕妇B族链球菌感染及药敏试验被引量：2
- 2015年
- 目的了解胎膜早破孕妇B族链球菌（GBS）感染和药物敏感（药敏）试验情况,以及金标法用于门诊大规模筛查的可行性。方法因胎膜早破在我院住院治疗的孕妇185例（胎膜早破组）,取孕妇阴道和肛拭子,分别应用金标法和细菌培养法检测GBS,并进行药敏试验。以150例正常孕妇作为对照。结果胎膜早破组有33例GBS阳性,正常对照组有12例阳性,两组比较差异有显著性（χ2=6.89,P〈0.05）。GBS阳性产妇45例发生早产和产褥感染及新生儿肺炎的概率高于GBS阴性的产妇（χ2=5.44~56.94,P〈0.05）。药敏结果显示,确诊的45例GBS对青霉素等抗生素灵敏度为100.00%,对大环内酯类耐药达51.11%。金标法检测GBS与细菌培养法相比具有较高灵敏度（U=2.69,P〈0.01）,而特异度差异无显著性（P〉0.01）。结论 GBS感染可能是产妇胎膜早破和不良妊娠结局的高危因素,金标法可在临床用于初诊筛查。
- 杨丽张宁张娇胡明
- 关键词：B族链球菌胎膜早破金标法
- 沉默ATF5对卵巢癌裸鼠成瘤的影响
- 2014年
- 目的研究沉默人转录激活因子5(ATF5)后对卵巢癌SKOV-3细胞体外增殖、凋亡及体内成瘤的影响,探讨人类卵巢癌基因治疗的新途径。方法将慢病毒携带的小干扰RNA感染卵巢癌SKOV-3细胞(实验组),空载体转染的卵巢癌SKOV-3细胞(空载体对照组)和卵巢癌SKOV-3细胞(空白对照组)进行对照,对比观察细胞的生长状态;MTT法检测细胞的增殖生长情况;罗氏凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况;分别于裸鼠皮下接种3组卵巢癌SKOV-3细胞,观察各组裸鼠的存活状态、种植瘤生长情况;RT-PCR检测瘤组织中ATF5mRNA的表达;Western-Blot方法检测瘤组织中ATF5蛋白的表达;苏木素-伊红染色(HE染色)观察瘤组织生物学形态变化。结果经转染ATF5基因的小干扰RNA后,在相同培养时间内3组细胞的增殖和生物学形态没有明显差异,但实验组细胞凋亡数量较其他两组明显增多。皮下接种成瘤后,3组裸鼠的成瘤率没有明显区别,实验组与空载体对照组和空白对照组相比,肿瘤成瘤时间晚,生长缓慢;移植瘤ATF5mRNA表达及蛋白表达降低;细胞分裂象明显减少,凋亡现象明显。结论沉默ATF5对人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生长有抑制作用,这可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。
- 谷雪丁朝霞胡明王斌陈爱平钱冬萌
- 关键词：卵巢肿瘤RNA干扰
- 中药联合更昔洛韦对HCMV阳性脑肿瘤干细胞移植瘤的作用被引量：4
- 2016年
- 目的了解莪术、冬凌草及白花蛇舌草复方提取物联合更昔洛韦对人巨细胞病毒(HCMV)阳性脑肿瘤干细胞移植瘤的作用。方法用单克隆培养法从U251胶质瘤细胞系中分离出脑胶质瘤干细胞,用流式细胞仪检测其CD133阳性细胞比例;用HCMV AD169感染脑胶质瘤干细胞,接种到40只BALB/c裸鼠脑内。2周后,将荷瘤鼠随机分为空白对照组(C组)、复方中草药组(A组)、更昔洛韦组(B组)及复方中草药联合更昔洛韦组(D组)。其中C组采用生理盐水灌胃,其余各组给予相应药液灌胃,连续给药2周。处死裸鼠,取出瘤组织做病理学检查及IE、CD34免疫组化检查,计算各组移植瘤微血管密度(MVD);采用qRT-PCR技术检测各组移植瘤中Bcl-2mRNA表达情况。结果 U251肿瘤干细胞在无血清培养基中成球生长,第二代肿瘤球中CD133阳性表达细胞比例为99.89%。各组移植瘤与正常组织分界明显,瘤内出血坏死,移植瘤IE、CD34表达阳性。复方中药提取物和更昔洛韦抑制移植瘤微血管生成的主效应差异有显著性(F=8.29、8.05,P<0.05),联合用药抑制移植瘤微血管生成较单独用药组效果明显,二者无交互作用(P>0.05)。qRT-PCR检测结果显示,复方中草药提取物和更昔洛韦抑制胶质瘤Bcl-2mRNA表达的主效应差异有显著性(F=9.43、6.69,P<0.05),二者无交互作用(P>0.05),A组和B组Bcl-2mRNA相对表达量低于C组,D组低于A组、B组和C组(F=9.43、6.69,P<0.05)。结论自拟复方中草药提取物联合更昔洛韦对HCMV阳性恶性胶质瘤生长有抑制作用。
- 吕婷婷高景云鲁晓晴钱冬萌胡明王斌
- 关键词：巨细胞病毒肿瘤干细胞更昔洛韦
- 真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(^(88)Arg,^(125)Ala)的构建表达及对神经胶质瘤细胞U87的影响
- 2014年
- 目的:以pEGFP-N3为载体,构建融合基因M-IL-2(88Arg,125Ala)的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala),检测融合基因在神经胶质瘤细胞U87中的表达以及重组蛋白对U87细胞的影响,为癌症的基因治疗提供实验基础。方法:通过PCR获得实验所需要的M-IL-2(88Arg,125Ala)基因片段,酶切后克隆入载体pEGFP-N3,构建M-IL-2(88Arg,125Ala)融合基因的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)。重组质粒经PCR、限制性内切酶分析及DNA序列测定证实构建成功后,用脂质体LipofectamineTM2000转染神经胶质瘤细胞U87,使用荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR及Western blot检测M-IL-2(88Arg,125Ala)融合蛋白在U87细胞中的表达,CCK-8方法检测融合蛋白对U87细胞的影响并观察细胞形态变化。结果:经PCR、限制性内切酶酶切分析及DNA序列测定证实,重组真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)构建成功,经RT-PCR及Western blot检测证实重组基因可在U87细胞中表达,CCK-8方法检测到融合蛋白对U87细胞增殖有一定的影响。结论:真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)构建成功,融合基因M-IL-2(88Arg,125Ala)可在U87细胞中表达且融合蛋白对肿瘤细胞的增殖有一定影响,为融合毒素M-IL-2(88Arg,125Ala)基因的进一步研究奠定了基础。
- 邵光灿钱冬萌胡明张丽娜宋旭霞付加朕王斌
- 关键词：白细胞介素2蜂毒肽真核表达神经胶质瘤细胞
- HCMV IE86对恶性胶质瘤细胞凋亡及p53表达活性的影响被引量：1
- 2019年
- 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)能诱导肿瘤细胞恶性转化且抑制肿瘤细胞凋亡,但HCMV编码的主要即刻早期调控蛋白IE86在这一过程中是否发挥关键作用仍然未知。为探究IE86对基因修饰荷胶质瘤小鼠p53表达水平及恶性胶质瘤细胞凋亡情况的影响,本研究通过PCR技术鉴定基因修饰小鼠IE86表达情况;实时定量PCR技术检测IE86和p53mRNA表达水平变化;免疫组织化学方法检测p53和p21蛋白的表达水平;TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况。结果显示,成功构建了IE86基因修饰小鼠模型;与IE86阴性组相比IE86阳性组p53表达水平上升(P<0.05),但p21表达水平下降(P<0.05);IE86阳性组细胞抗凋亡能力增强(P<0.05)。以上结果表明,在基因修饰的小鼠中IE86持续表达但p53转录活性的指示标志p21下调,且IE86可提高恶性胶质瘤细胞抗凋亡能力。
- 刘婷钱冬萌胡明于淼张现娟秦子英刘小可王斌
- 关键词：人巨细胞病毒P53
- 人参皂苷Rb1抗单纯疱疹病毒1型感染及保护神经的实验研究被引量：6
- 2012年
- 目的通过研究人参皂苷Rb1(GRb1)抑制单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus,HSV-1)感染导致人星形胶质瘤细胞(U251)凋亡异常及神经生长因子(NGF) mRNA的表达变化,探讨GRb1抗HSV-1感染从而保护神经的作用机制。方法 MTT比色法、流式细胞术检测GRb1对HSV-1感染致U251细胞凋亡异常的抑制作用;应用半定量RT-PCR检测不同处理组NGF mRNA的表达变化。结果 (1)MTT法显示400μg/mL GRb1+HSV-1组在感染24、36、48h的MTT值均高于HSV-1组(P<0.05);(2)形态学观察HSV-1组细胞感染36h后出现细胞病变效应(CPE),而400μg/mL GRb1+HSV-1组细胞感染36h后融合增多,但大部分细胞为正常形态;(3)流式细胞术显示:400μg/mLGRb1+HSV-1组凋亡率在感染24、36h均低于HSV-1组(P<0.05);(4)RT-PCR显示:400μg/mL GRb1+HSV-1组GRb1组在加药后早期6～12hNGFmRNA表达降低(P<0.05),但在感染24、36、48h表达增高且明显高于HSV-1组(P<0.05)。结论适当浓度的GRb1能抑制因HSV-1感染所致细胞凋亡的异常及NGFmRNA的表达变化。推测GRb1可能通过上调NGF mRNA的表达并抑制细胞凋亡,从而起到抗病毒、保护神经的作用。
- 梁园园王斌李玲钱冬萌宋旭霞胡明王志浩
- 关键词：人参皂苷RB1单纯疱疹病毒1型胶质瘤细胞U251凋亡神经生长因子
- HCMV感染对胶质瘤细胞U87自噬的影响
- 2015年
- 研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对神经胶质瘤U87细胞自噬的影响。通过观察微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬相关基因Beclin1及其蛋白表达的变化,从而探讨HCMV与神经胶质瘤发生、发展的关系及意义。用HCMV AD169(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞,同时将未感染HCMV的U87细胞作为对照组。分别在6、12、24、48 h用RT-PCR检测Beclin1的表达,Western-blot和免疫荧光检测Beclin1和LC3编码蛋白的表达,最后用CCK-8检测细胞的增殖活性。结果显示,HCMV感染的U87细胞LC3-II蛋白表达水平逐渐下降(P<0.05);同时,HCMV感染的U87细胞Beclin1基因及蛋白的表达水平也逐渐下降(P<0.01),且HCMV感染U87细胞增殖显著(P<0.01)。以上结果表明,HCMV感染抑制胶质瘤U87细胞自噬,并会引起Beclin1表达水平下调,进而导致胶质瘤细胞增殖。
- 宋静宜钱冬萌王斌黄睿胡明华晓敏朱秀丽陈豪宋旭霞
- 关键词：人巨细胞病毒自噬
- 转IE2基因荷瘤小鼠中ATF5功能影响的研究
- 2019年
- 利用转IE2基因小鼠荷瘤的方法,对肿瘤组织中ATF5转录激活因子进行定性和定量的检测,从而探究巨细胞病毒(HCMV)即刻早期蛋白IE86对ATF5功能的影响。通过鼠胶质瘤细胞GL261对转基因鼠进行荷瘤,采用RT-PCR和Western blot的方法,对荷瘤鼠的肿瘤组织中转录因子ATF5的表达量进行检测。采用RT-PCR和Western blot的方法检测荷瘤鼠肿瘤组织中转录因子ATF5的表达,结果显示,转IE2基因小鼠体内ATF5表达量较正常小鼠ATF5表达量高。ATF5在转IE2基因荷瘤鼠中呈现高表达状态,ATF5是一个与凋亡密切相关的转录因子,在凋亡、分化及发育等生理过程中发挥着重要作用。
- 于淼刘婷胡明王斌钱冬萌
- 关键词：人巨细胞病毒动物模型
