艾阳
- 作品数：9 被引量：16H指数：3
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- 一例Morquio A综合征高危胎儿的快速产前基因诊断被引量：2
- 2012年
- 目的快速、准确地对MorquioA综合征[又称黏多糖贮积症ⅣA型（mucopolysaccharidosis type ⅣA，MPSⅣA）]高危胎儿做出产前基因诊断，从而及时而高效地防止患儿的出生，以最大程度减少流产对母体的伤害。同时，为今后的植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis，PGD）创造必要的前提条件。方法在明确先证者病因及其父母基因型的基础上，应用已建立的突变特异性扩增系统（amplification refractor ymutation system，ARMS）直接鉴定法、变性高效液相色谱（denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC）快速筛检法，结合DNA序列分析法，对1例已孕10周的MPSIVA高危胎儿的GALNS基因相应突变位点进行快速检测和鉴定。结果胎儿的DHPLC筛检结果显示第1外显子和第10外显子的PCR产物都有异常双峰，而相应正常对照均只有正常单峰；用GALNS基因ARMS特异引物扩增的结果显示：胎儿有相应的特异扩增产物，而正常对照无；普通引物扩增产物的测序结果显示：胎儿GALNS基因的第1外显子和第10外显子分别获得了父源性的c．106—111del（p．L36-L37del）杂合缺失突变和母源性的c．1097T〉C（P．L366P）杂合错义突变，为两种突变的复合杂合子。结论该高危胎儿是一带有与先证者完全相同基因型的MorquioA综合征病胎，应尽早终止妊娠；ARMS法、DHPLC法结合DNA序列分析法是快速、准确产前基因诊断MPSⅣA高危胎儿的有效方法，特别适用于已明确病因的高危胎儿的早期诊断；其中，ARMS法和DHPLC法还特别适用于大批量正常对照组的快速鉴别，对于新突变的致病性鉴定起着重要的作用。
- 郭奕斌艾阳赵燕唐佳蒋玮莹杜敏联马华梅钟燕芳
- 关键词：产前基因诊断DNA序列分析
- 中国人黏多糖贮积症ⅣA型家系GALNS基因新突变的鉴定被引量：5
- 2011年
- 目的研究黏多糖贮积症ⅣA型（mucopolysaccharidosis type ⅣA，MPSⅣA）患者发病的分子遗传学机制，揭示其基因型与表现型的相互关系，为产前基因诊断等创造必要的前提条件。方法采用尿糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAGs）定性检测法对疑似MPSIVA型的先证者进行初诊，然后采用PCR及扩增产物直接测序法对先证者及其家庭成员进行突变检测。在检出GALNS基因c．1567T〉G新突变后，先后建立XspI酶切鉴定法和扩增阻碍突变系统（amplification refractory mutation system，ARMS）快速特异鉴定法，对随机采集的110名正常对照与先证者及其家庭成员的GALNS基因第14外显子进行序列分析，同时采用生物信息学方法对蛋白质二级、三级结构进行预测，以及直接测定患儿GALNS酶活性的方法，对该新突变进行致病性鉴定。结果先证者尿检呈弱阳性GAGs（±），其GALNS基因第14外显子内存在杂合的c．1567T〉G终止密码突变，第4外显子存在杂合的c．374C〉T错义突变，为两种突变的复合杂合子。其妹突变类型与先证者完全相同，其母仅在第14外显子存在杂合的终止密码突变，为该病的携带者，其父仅在第4外显子存在杂合的错义突变，也为杂合子；第14外显子的PCR产物经XspI酶切后，正常对照组切出28bp、120bp、399bp3条带，而患者和携带者的母亲均切出28bp、120bp、148bp和399bp4条带；用ARMS特异引物扩增后，正常对照组均扩增阴性，而患者及携带者均扩增阳性；蛋白质二级、三级结构预测结果显示：c ．1567T〉G变异导致终止密码（TAG）突变为谷氨酸（GAG），使多肽链延长了92个氨基酸残基，导致蛋白质二、三级结构发生明显改变，而正常对照无此变化。酶活性测定的结果显示：患者的GALNS酶活性仅为8．3nmol／17h／mgpr，明显低于正常值（正常参考值为41．9～92．1nmol／17h，／mgpr）。结论c．1567T�
- 赵燕孟亚仙郭奕斌杜敏联艾阳
- Maroteaux-Lamy综合征的ARSB基因分析及新突变的致病性鉴定
- 2018年
- 【目的】对7家拟诊为Maroteaux_Lamy综合征(MPSⅥ)的患儿及其父母进行ARSB基因的突变检测和新突变的致病性鉴定,以揭示其分子发病机制,为将来的产前/植入前基因诊断等创造前提条件。【方法】在临床初诊及GAG尿检和MPS酶检的基础上,抽取患儿及其父母EDTA抗凝血,进行ARSB基因的PCR扩增和Sanger测序。对所发现的新突变,在经HGMD、1000G和ExAC等数据库核实排查后,首先用SWISS-MODEL软件分析、比对突变蛋白和正常蛋白的空间构象,然后用Clustal X软件分析跨物种氨基酸的保守性,用PROVEAN、SIFT、PolyPhen-2软件预测新突变的致病性,最后用ACMG标准对新突变的致病性进行综合分析鉴定。【结果】1)7个家系先证者的基因检测结果分别为:No1:c.574T> C,p.C192R纯合错义突变;No2:c.160G> A/p.D54N(来自其母)和c.1197C> G/p.F399L(来自其父)的复合杂合子;No3:仅检出c.1072G> A/p.V358M和IVS5 as(-27)A>C变异,但酶检和临床表型符合Ⅵ型;No4:为c.281C> T,p.S94L(新突变,来自其母)和IVS5 as(-27)A> C(来自其父)的复合杂合子;No5:为c.1197 C> G,p.F399L纯合错义突变;No6:为c.1197 C> G,p.F399L(来自其母)和c.1379 C> T,p.S460F(新突变,来自其父)的复合杂合子;No7:为c.499 G> A,p.G167R(来自其父)和c.1325C>T,p.T442M(来自其母)的复合杂合子。2)新突变鉴定结果:对正常ARSB酶蛋白和p.S94L突变酶蛋白的空间构象的预测比对结果显示,两者有明显区别;跨物种保守性分析结果显示,p.94突变点所在氨基酸(S)在物种进化过程中具有高度保守性;PROVEAN、SIFT和PolyPhen-2软件对p.S94L预测结果分别为:Deleterious、Damaging和Probably damaging。用上述方法对p.S460F的预测结果及ACMG的综合分析结果也显示该突变可能是致病性的。【结论】1)家系4的p.S94L和家系6的p.S460F新突变可能都是新的致病性突变,有可能都是引起患儿发病的内在原因之一。2)家系1,2,5,6,7可以确诊为MPS Ⅵ型,其基因型和�
- 郭东炜郭东炜潘伟绵唐佳唐佳艾阳李荣杜敏联
- 黏多糖贮积症Ⅵ型表现型和基因型的相关性研究被引量：3
- 2017年
- 目的对3家拟诊为黏多糖贮积症Ⅵ型(MPSⅥ)的患儿及其父母进行芳香基硫酸酯酶B(ARSB)基因的突变检测,以阐明其分子发病机制并揭示MPSⅥ表现型和基因型的相关性。方法尿糖胺聚糖(GAG)定性检测后对患儿及其父母的DNA进行ARSB基因的PCR扩增及Sanger测序。对所发现的新突变,用变性高效液相色谱(DHPLC)法进行快速筛检,用多种生物信息学方法对新突变的致病性进行系列鉴定。结果家系1先证者为c.943C>T和c.1197C>G的复合杂合子;家系2先证者为c.523T>G/p.Y175D(新突变,父源)和c.1197C>G/p.F399L(母源)的复合杂合子;家系3先证者的E2和E3无扩增产物,而其父母均有400 bp和459 bp特异带。DHPLC结果显示,正常对照组和患儿母亲为正常单峰,而患儿及其父为异常双峰。正常和突变的ARSB蛋白的高级结构存在明显差异;突变点所在氨基酸在物种进化过程中具有高度保守性;Poly Phen-2和SIFT软件预测结果:Probably damaging(很可能有害)和Damaging(有害的)。结论家系2的p.Y175D是一新的致病性突变,为患儿发病的内在原因之一。家系1和2可确诊为MPSⅥ型,其表现型和基因型有显著的相关性;家系3虽经酶检确诊,临床症状、尿检结果也均与MPSⅥ型符合,但DNA水平未查到明确突变类型,其表现型与基因型的相关性有待进一步证实。
- 姜煜郭源平艾阳唐佳方子水杜敏联郭奕斌
- 20多种遗传性骨病表现型和基因型的相关性研究及高危胚胎的产前或植入前基因诊断
- 目的:对近些年接诊的、来自国内20多个省份以及港澳地区的疑似Hurler综合征(MPS IH)、Hunter综合征(MPSⅡ)、SanfilippoⅢB综合征(MPSⅢB)、Morquio A综合征(MPS IVA)、M...
- 郭奕斌潘敬新郭东炜李荣艾阳唐佳吴晓昀赵燕蒋玮莹杜敏联方群沈晓婷王淑静郭源平尹爱华钟燕芳方子水
- 关键词：HUNTER综合征软骨发育不全假性软骨发育不全FGFR3基因DHPLC
- 文献传递
- 致死性侏儒症p.R248C突变热点的快速检测和三例TD-Ⅰ型高危胎儿的快速产前诊断被引量：3
- 2017年
- 目的针对致死性侏儒症I型(thanatophoric dysplasia typeⅠ,TD-Ⅰ)FGFR3基因的突变热点"p.R248C",建立快速特异的酶切鉴定法(restriction endonuelease testing,RE)和扩增受阻突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)/RE法,并应用于后续3例疑似TD-I高危胎儿的快速产前诊断,以及时防止患胎出生,同时为今后的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)打下良好基础。方法首先,针对突变热点p.R248C突变前后的序列特点,选择合适的内切酶"Afe I",建立酶切鉴定法。其次,设计双错配碱基特异引物结合Apa LI酶切,建立ARMS/RE双重特异鉴定法。对阴性和阳性结果均再用普通引物扩、测的结果进行验证。结果用Afe I酶切FGFR3基因exons(6-7)普通引物的PCR产物(535 bp),正常对照及非p.R248C突变的TD病例均能被切成255 bp和280 bp 2个片段,而胎1~胎3均切出255 bp、280 bp和535 bp 3个片段。用特异引物E7(p.R248C)扩增,正常对照和非p.R248C突变的TD病例均扩增阴性,无法进一步做酶切鉴定;而p.R248C突变均扩增阳性,当再用Apa LI酶切PCR产物(365 bp)时,胎1~胎3均切出22 bp和343 bp 2个片段。通过引物扩、测结果显示:胎1~胎3均是p.R248C杂合突变。结论该法快速特异、准确可靠,可用于p.R248C突变热点的快速检测及含该突变高危胎儿的快速产前诊断。该法还可用于含p.R248C突变TD-I型家系的PGD。胎1~胎3都是TD-I患胎,建议尽早终止妊娠。
- 姜煜潘敬新郭东炜艾阳李荣蒋玮莹方群郭奕斌
- 关键词：FGFR3基因
- OⅠ-Ⅳ型的基因诊断和三例OⅠ-Ⅱ型高危胎儿的产前基因诊断
- 郭奕斌李荣艾阳方群蒋玮莹唐佳吴晓昀毕博文
- 关键词：产前基因诊断
- 中国南方三个Hunter综合征家系的病因学研究
- 2023年
- 【目的】揭示中国南方3个Hunter综合征家系的分子发病机制,阐明患者表型和基因型的相关性,为今后的产前或植入前基因诊断奠定基础。【方法】在临床初诊和系谱分析的基础上,首先进行尿糖胺聚糖定性检测,然后抽取患儿及其亲属的抗凝血,提取DNA并通过PCR、Sanger测序对IDS基因进行序列分析。对发现的新变异采用RT-PCR和生物信息分析等多种方法进行致病性鉴定。【结果】3个家系的患者尿检结果均为强阳性(++)。家系1~3先证者为男性,IDS基因均发生半合子突变且突变均来自其母,突变位点分别为:c.615_622delCATACAGT,c.847_848delGT和IVS7 ds+1 G>A。跨物种保守性分析结果显示IDS基因突变部位所在的氨基酸在物种进化过程中具有高度保守性。与正常蛋白相比,突变蛋白的高级结构预测结果存在明显差异。根据ACMG标准,3个家系的变异均为致病性突变。【结论】先证者所患疾病为Hunter综合征,IDS基因的c.615_622del(p.Ile206Valfs*18)、c.847_848del(p.Val283Alafs*57)和IVS7 ds+1 G>A(p.G336Dfs*12)均是新的致病性突变,它们是引起患儿发病的内在原因。本研究进一步丰富了IDS基因的突变谱。
- 郑诗瑶唐佳艾阳艾阳吴晓昀黄颖郭奕斌
- 关键词：HUNTER综合征
- 一罕见成骨不全Ⅳ型的基因诊断被引量：4
- 2013年
- 目的对一疑似成骨不全Ⅳ型或其他类型的患儿实施基因诊断,以揭示患儿发病及频繁骨折的内在原因,为今后实施对症治疗和产前基因诊断创造必要的前提条件。方法对经症状、体征观察和X线检查初诊为成骨不全Ⅳ型或其他类型的患儿,在抽取外周血制备DNA模板后,采用PCR、DNA直接测序法,对患儿的COL1A1基因进行突变检测,然后对所发现的突变进行分析和鉴定。结果在COL1A1基因的编码区内发现一典型的错义突变(c.823G>C1/p.G275R),经查HGMD数据库证实为成骨不全Ⅳ型的致病性突变。结论先证者为一罕见的成骨不全Ⅳ型患儿,所发现的p.G275R突变为中国人群首次报道的病理性突变。
- 郭奕斌艾阳蒋玮莹
- 关键词：基因诊断
