谢柳
- 作品数：13 被引量：39H指数：5
- 供职机构：海南海德热带农业资源研究所有限公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 广西大王岭和大明山保护区苏云金芽孢杆菌的收鉴及新杀虫基因cry40Da1的克隆
- 本课题系统收集了从广西大王岭和大明山两个自然保护区共采集到土样264份，共分离出597株芽孢杆菌，通过光学和电子显微镜检观察，16株分离株观察到伴胞晶体蛋白，初步确定为苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringie...
- 谢柳
- 关键词：苏云金芽孢杆菌杀虫基因基因克隆
- 文献传递
- 黑龙江凉水自然保护区苏云金芽孢杆菌的收集与鉴定被引量：2
- 2009年
- 黑龙江凉水自然保护区是我国现有保存下来的较大片原始红松林基地之一，总面积6394hm^2，森林覆盖率95％以上。本研究从小兴安岭凉水自然保护区采集土样782份，采用醋酸钠培养基结合高温方法筛选土壤中的芽孢杆菌，通过光学显微镜观察鉴定产生伴胞晶体的苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis．Bt）。总计分离得到芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌分别为1735株和33株，Bt菌株的分离率和出菌率分别为1．90％和4．22％。利用SDS-PAGE和PCR—RFLP方法对筛选获得的成分离株进行了杀虫晶体蛋白和基因型分析，结果表明14株产菱形伴胞的＆菌株，SDS-PAGE电泳分析芽孢后期产生分子量大小130kD蛋白带，PCR-RFLP分析初步鉴定为crylAc基因，其它产圆形或其它不定形晶体蛋白的＆分离菌中，芽孢后期主要蛋白大小为20～150kD不等，PCR—RFLP方法鉴定结合PCR片段测序分析这些菌株含有新型cry4、cry39和cry40基因等。本研究是“中国助资源收鉴与利用”项目组成部分之一，凉水自然保护区苏云金芽孢杆菌的收集与鉴定目的是要对整个东北地区成资源分布和多样性作一个初步评估，实验结果表明东北森林地区具有丰富多样的威菌株和杀虫基因资源。
- 张文飞谢柳赵立仕方宣钧柳参奎
- 关键词：苏云金芽孢杆菌SDS-PAGEPCR-RFLP
- 海南岛热带雨林区芽孢杆菌收集及Bt菌鉴定被引量：14
- 2009年
- 本研究系统地对海南岛热带雨林自然保护区进行了土壤样品的采集、芽孢杆菌的分离收集和Bt菌株的鉴定。从尖峰岭热带雨林区、五指山热带雨林区、吊罗山热带雨林区、霸王岭热带雨林区总共采集了土壤样品1882份,采用醋酸钠培养基结合高温方法分离出芽孢杆菌3924份,鉴定出Bt分离株158份,Bt菌株的分离率和出菌率分别为4.03%和8.40%。结果分析表明,海南岛热带雨林区芽孢杆菌及Bt菌株分布对环境和生态表现出一定的规律性,一般海拔900m至1400m的Bt菌株含量高、植被覆盖率高,土壤腐殖质含量高的热带沟谷雨林带Bt菌株含量最高。显微观察发现,获得的Bt菌株其伴胞晶体有菱形、球形、方形、椭球形、不定性等多种形状。利用SDS-PAGE方法对获得的Bt分离株进行了伴胞晶体进行分析,发现伴胞晶体的分子量有20kD到150kD不等。进一步利用PCR-RFLP技术对Bt分离株进行了cry基因型的分析,初步发现这些Bt菌株含有cry1、cry3、cry4、cry6、cry30、cry40等基因型。我们还利用鳞翅目昆虫小菜蛾和鞘翅目昆虫椰心叶甲进行部分Bt分离株的生物测定,初步结果显示本研究鉴定出的Bt分离株具有不同的抗虫靶标,对同一靶标昆虫也表现出不同的杀虫活性。整体而言,本研究结果显示出海南岛热带热带雨林自然保护区因其独特的热带地理生境、自然的生物演化系统,使得热带雨林区蕴藏了Bt菌株资源多样化,值得期待挖掘出一些新的菌株和新的基因资源。
- 张文飞全嘉新谢柳王茜易艳桃丰玫玫朱麟王锐萍方宣钧
- 关键词：芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌
- 苏云金芽孢杆菌S1478-1分离株的特性鉴定及cry1Ac同源基因克隆被引量：6
- 2009年
- 本研究对从海南岛尖峰岭热带雨林自然保护区的土壤样品中分离出的Bt菌株S1478-1进行了特性鉴定,研究表明S1478-1分离株菌落形态和生长特征和Bt参照菌株HD73极其相似。16SrDNA序列分析表明,S1478-1分离株与其它B.thuringiensis、B.cereus和B.anthracis的16SrDNA序列相似性达到99%。分离株能产菱形伴胞晶体,SDS-PAGE蛋白电泳分析表明,菌株在生长后期,形成芽孢同时分泌130kD大小的晶体蛋白。生物测定表明S1478-1分离株对小菜蛾具有很高的毒杀活性,LC50值高达5.159×108cfu/mL。初步显示S1478-1分离株可作为防治鳞翅目害虫的生物农药菌株。利用PCR-RFLP方法鉴定S1478-1分离株含有cry1Ac同源基因,以PCR粘性端克隆方法扩增全长基因,序列测定表明该基因ORF为3537bp,编码1178个氨基酸,推定的编码蛋白分子量为133.3kD,与其它cry1Ac基因序列最高达到99%同源,因此,该基因可作为杀虫工程菌及培育转基因抗虫作物的候选基因。
- 张文飞姚淑霞谢柳杨明坤王锐萍叶大维方宣钧
- 关键词：苏云金芽孢杆菌生物测定
- 苏云金芽孢杆菌资源收集及其应用
- 苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt）是全世界应用最为广泛的微生物杀虫剂,占整个生物农药的90％,已商业化生产,应用前景广阔。由于苏云金芽孢杆菌有安全、对环境友好、不易产生抗性等诸多优点...
- 张文飞谢柳张雪丽方宣钧
- 关键词：苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白工程菌转基因
- 文献传递
- 槟榔烂果病的病原菌鉴定被引量：2
- 2009年
- 本研究分别从台湾槟榔病果中分离出病原菌Ar8904、Ar8905;从海南槟榔病果中分离出病原菌Ar8801、Ar8802、Ar8904以及从云南槟榔病果中分离出病原菌Ar8901、Ar892。将这些病原菌进行对比实验。研究结果表明,这7株病原菌在菌株形态、培养形状、寄主范围、致病性以及症状特征都十分的相似。因此,根据炭疽菌现代分类标准,我们可以初步确认台湾、海南、云南的槟榔病果均为同一种炭疽菌引起的。
- 黄昭奋谢柳
- 关键词：槟榔分生孢子病原菌炭疽菌
- 新型Bt杀虫蛋白:VIP杀虫的机理与植物转基因应用被引量：10
- 2008年
- 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是目前应用最多的生物杀虫剂。它能够产生多种杀虫因子,其中最主要是杀虫晶体蛋白(insecticidal crystal proteins,ICP)和营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal protein,VIP)。VIP在Bt营养期生长阶段开始分泌,它们不形成蛋白晶体,和ICP在进化上没有同源性。VIP的杀虫活性很高,达到了纳克级水平,为一类新型杀虫蛋白,被认为是第二代生物杀虫剂。VIP根据蛋白质序列同源性主要分为三类:VIP1、VIP2和VIP3。VIP1和VIP2共同构成二元毒素对鞘翅目萤叶甲科昆虫具有特异性毒杀作用,VIP3对鳞翅目害虫具有很高的杀虫活性。由于VIP对一些可能对ICP产生抗性的害虫具有高效的毒杀作用,而且害虫对ICP和VIP产生交互抗性的几率也很小,因此转VIP植物研究受到了科学家的青睐,并已有不少成功的报道和专利。目前为止,已经利用VIP3构建了转基因水稻、转基因玉米、转基因棉花等多种转基因作物。
- 刘辰谢柳张文飞
- 关键词：苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白杀虫机理转基因植物
- 对鳞翅目昆虫有杀虫活性的Bt crylAc22基因及其应用
- 本发明涉及一种从苏云金杆芽孢杆菌(Bt)野生菌株W015－1中分离克隆的杀虫晶体蛋白基因cry1Ac22及其对鳞翅目昆虫具有高效杀虫活性和应用。本发明采用反向PCR克隆法从Bt菌株w015－1中克隆了Cry1Ac全长基因...
- 方宣钧张文飞谢柳刘卓明
- 文献传递
- 来自海南等地的17个Bt分离株质粒多样性分析
- 2009年
- 本研究采用琼脂糖凝胶电泳对分离自海南岛的12个Bt菌株与分离自广西、黑龙江的5株Bt菌株及2株Bt模式菌株进行质粒数量、大小等特征分析。19个供试菌株可区分为16种独特的质粒电泳图谱,充分显示出不同来源Bt菌株的质粒多样性。进一步选择了其中的10个菌株,利用包埋法制备琼脂块进行脉冲场凝胶电泳(PFGE),结果表明苏云金芽孢杆菌大质粒组成特征也具有丰富多样性。但是供试菌株的质粒电泳图谱并未体现与地理和生态特征相关联的特征差异。研究结果初步证实海南分离株S3078-1是一株无内生质粒的Bt菌株,而S3031-1和S3073-1两个分离株仅有一个大质粒存在,这三个分离株将为进一步研究质粒功能提供初始菌株。本研究进一步暗示将琼脂糖凝胶电泳和脉冲场凝胶电泳结合起来研究质粒特征提高了结果的可靠性。
- 韩丽珍王茜谢柳张文飞李有志方宣钧
- 关键词：BT菌株质粒图谱
- 苏云金芽孢杆菌Cry1Ac杀虫晶体蛋白及其分子设计被引量：5
- 2009年
- cry1Ac编码的杀虫晶体蛋白是苏云金芽孢杆菌(Bt)产生的多种杀虫晶体蛋白中对鳞翅目昆虫有很高毒性的蛋白。第一个Cry1Ac杀虫晶体蛋白最早在库斯塔克亚种HD73中以伴胞晶体形式分离获得,其编码区为3534bp,编码蛋白分子量为133kD,含1178个氨基酸,等电点为4.84。自此以来,Cry1Ac杀虫晶体蛋白结构、功能以及应用研究一直是Bt杀虫晶体蛋白研究的重要方向。本文介绍了苏云金芽孢杆菌中应用最广泛的Cry1Ac杀虫晶体蛋白家族的结构、功能及其基因分类,并进一步就基于苏云金芽孢杆菌Cry1Ac杀虫晶体蛋白的基因工程研究做了分析,提出了持续利用BtCry1Ac杀虫晶体蛋白的一些见解。
- 刘卓明谢柳叶大维
- 关键词：苏云金芽孢杆菌分子设计
