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邢润苗

作品数：4 被引量：5H指数：2
供职机构：西南大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域：生物学农业科学更多>>

合作作者

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 3篇生物学
  • 2篇农业科学

主题

  • 3篇家蚕
  • 2篇卵黄
  • 2篇卵黄原蛋白
  • 2篇基因
  • 1篇性激素
  • 1篇原核表达
  • 1篇生理作用
  • 1篇生物合成
  • 1篇体外
  • 1篇体外表达
  • 1篇蜕皮激素
  • 1篇启动子
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞表达
  • 1篇克隆
  • 1篇昆虫
  • 1篇活性鉴定
  • 1篇基因表达
  • 1篇基因启动子
  • 1篇激素

机构

  • 4篇西南大学

作者

  • 4篇邢润苗
  • 4篇沈关望
  • 4篇林英
  • 3篇夏庆友
  • 3篇张海燕
  • 3篇杨从文
  • 2篇刘红玲
  • 2篇陈恩祥
  • 2篇彭芷昕
  • 1篇罗娟
  • 1篇吕毅华

传媒

  • 1篇中国农业科学
  • 1篇昆虫学报
  • 1篇蚕业科学
  • 1篇中国生物化学...

年份

  • 4篇2014
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
家蚕卵黄原蛋白受体BmVgR的体外表达被引量：1
2014年
【目的】克隆家蚕卵黄原蛋白受体(vitellogenin receptor,VgR),分析其在昆虫细胞中的表达特征,了解正常VgR和突变VgR的表达模式,为阐明其生物学功能提供参考依据。【方法】基于家蚕VgR的基因编码序列设计特异引物,扩增的目的片段连接到载体pET28a上,构建原核表达载体,转化E.coil BL21(DE3)表达菌株,IPTG诱导获得目的蛋白;用镍柱亲和层析方法纯化诱导表达的家蚕VgR肽蛋白;将纯化后的肽蛋白制备BmVgR的兔源多克隆抗体;PCR扩增获得大造和突变型白妙卵(scanty vitellin,vit)的LBD1+EGF1结构域(C11D和C11V)片段,连接到细胞表达载体上,通过细胞转染表达目的蛋白,采用细胞免疫组化检测大造和突变型vit的VgR在细胞里的表达情况;通过Western blot检测细胞培养液中大造和突变型vit VgR的表达量。【结果】原核表达获得了一个大小约为22 kD的融合蛋白,以包涵体形式表达;镍柱亲和层析初纯化得到BmVgR的肽蛋白,进一步切胶纯化后,以此为抗原制备BmVgR的兔源多克隆抗体,其抗体效价>1﹕512 000,纯度为95%以上。转录水平检测表明Sf9和Spli221昆虫细胞中没有BmVgR和BmVg内源基因的表达;在Sf9昆虫细胞中成功表达了家蚕野生型和突变型vit BmVgR的结构域SP+LBD1+EGF1肽段,家蚕突变型vit在BmVgR第1个表皮生长因子同源区域的第3个ClassB区域有编码50个氨基酸残基的核酸序列缺失;细胞免疫组化试验表明,突变型和正常型的C11V和C11D都能在Sf9细胞质中正常表达;制备的BmVgR兔源多克隆抗体和Myc标签抗体同时检测到细胞表达的目的蛋白,表明试验所制备的VgR抗体特异性较好;由于SP+LBD1+EGF1肽段存在信号肽,细胞表达的蛋白会分泌进入细胞培养液中,Western blot对培养液进行蛋白检测,表明突变型vit存在氨基酸缺失,但并不影响肽蛋白的正常表达,且表达量没有明显差异。【结论】EGF1结构域的缺失并不影响SP+LBD1+EGF1肽蛋白的
罗娟陈恩祥刘红玲彭芷昕杨从文沈关望张海燕邢润苗林英夏庆友
关键词：家蚕原核表达细胞表达
蜕皮激素对家蚕卵黄原蛋白基因表达的调控被引量：2
2014年
蜕皮激素(20-hydroxy ecdysone,20E)是由前胸腺分泌的能调节节肢动物昆虫纲、甲壳纲等动物蜕皮的激素.家蚕属于完全变态昆虫,一生经历卵、幼虫、蛹、成虫四个发育时期.20E在家蚕发育过程中有不可替代的作用.本研究通过酶联免疫吸附反应(ELISA)测定家蚕变态期前后血淋巴中20E滴度,发现在卵黄原蛋白基因(Bombyx mori vitellogenin,BmVg)高量表达前的雌雄血淋巴中20E含量没有明显差异,但含量变化趋势与BmVg表达趋势相一致.用20E注射上蔟后60 h的家蚕和添食5龄家蚕,能诱导雌性和雄性脂肪体中BmVg表达和蛋白合成.调查处理后的家蚕所产卵中的卵黄磷蛋白(BmVn)含量及重量,发现蚕卵中BmVn含量及蚕卵重量都明显增加;本研究还通过脂肪体体外培养,证明了20E是直接作用于脂肪体来诱导BmVg的表达.本研究结果表明,20E是通过诱导脂肪体中BmVg的转录来增加蚕卵中BmVn积累,从而最终使得蚕卵重量也相应增加.
沈关望林英吕毅华王继岩邢润苗夏庆友
关键词：蜕皮激素卵黄原蛋白家蚕基因表达
昆虫中存在高等动物性激素吗？被引量：2
2014年
性激素在调控高等动物附性器官的发育和成熟,激发和维持第二性征以及增进两性细胞的结合和孕育能力等方面有不可替代的作用。性激素包括雌性激素和雄性激素,主要存在于哺乳动物中。随着检测技术的不断进步,越来越多的研究显示性激素并非高等动物所特有。包括一些昆虫在内的无脊椎动物中同样含有性激素,家蚕Bombyx mori、欧洲兔虱Spilopsyllus cuniculi等昆虫被高等动物性激素或者性激素类似物处理过后能产生一定的应答,且有研究报道昆虫中同样含有羟基固醇脱氢酶等高等动物催化合成性激素的某些酶类。本文以雌激素为例,在全面总结高等动物雌激素在昆虫中的鉴定、代谢、生理作用等相关研究的基础上,分析昆虫对高等动物性激素的合成、应答以及高等动物性激素在昆虫中作为昆虫"性激素"的可能性。雌激素作为高等动物的主要雌性激素,在很多昆虫组织或个体提取物中同样存在。目前的研究已经证实家蚕等昆虫能代谢雌激素,用雌激素处理某些昆虫后也能影响该昆虫的生理过程。雌激素对高等动物许多生理过程都具有显著的调节作用,但主要还是作为性激素调节性别相关的生理过程。为了明确脊椎动物雌激素在昆虫中是否存在且发挥着性激素功能,相关的研究可以主要从3个方面着手:(1)昆虫中能否检测到高等动物雌激素类似物存在;(2)雌激素是否也能让昆虫产生雌性相关的生理应答,从昆虫中提取的雌激素类似物能否令高等动物产生雌性特异的响应;(3)昆虫是否能够合成雌激素,体内是否存在参与催化合成雌激素的酶类。
沈关望王继岩杨从文张海燕邢润苗林英夏庆友
关键词：性激素雌二醇昆虫生理作用生物合成
家蚕卵黄原蛋白(BmVg)基因启动子的克隆与活性鉴定
2014年
卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)在家蚕蛹期脂肪体高量表达,研究家蚕卵黄原蛋白基因(BmVg)的转录调控机制及启动子活性,将有助于利用家蚕蛹生物反应器高效表达外源蛋白。设计特异引物,以家蚕蛹基因组DNA为模板PCR扩增得到BmVg长约1.5 kb的启动子片段。构建由不同长度截短BmVg启动子片段驱动荧光素酶报告基因表达的细胞转染载体pGL3-Vg Promoter,分析转染家蚕胚胎培养细胞BmE-SWU1中的BmVg启动子片段活性,结果显示最低截短至BmVg基因翻译起始位点上游90 bp的启动子片段具有转录活性。进一步用截短法分析不同长度启动子的活性,当启动子-752^-952 bp、-42^-152 bp区域被截掉后,启动子的转录活性明显降低,暗示这2个区域内可能存在与启动子启动效率相关的重要调控元件。
杨从文沈关望张海燕彭芷昕陈恩祥邢润苗刘红玲韩超珊林英
关键词：启动子克隆家蚕蛹
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