刘思国
- 作品数：377 被引量：1,082H指数：17
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家攀登计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 旋毛虫p49基因的克隆、序列分析及表达被引量：5
- 2002年
- 目的 获得旋毛虫排泄分泌抗原(excretory antigen,ES)p49基因的克隆、测序及表达。 方法 通过RT-PCR,从旋毛虫幼虫总RNA中扩增得到特异片段,利用TA克隆将PCR产物克隆入pUC-T载体中并进行测序及同源性比较,并定向克隆到表达载体pEG-4T-3中,转化感受态细胞,诱导表达。 结果 RT-PCR扩增得到p49基因,其核苷酸序列与已发表的p49基因序列一致;BLAST分析表明其与旋毛虫p49基因、43 KDa分泌性糖蛋白同源性均为99％。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,重组蛋白诱导表达在67 KDa处有一新蛋白带。 结论 提取旋毛虫幼虫总RNA,用RT-PCR方法克隆并表达了p49基因。
- 温艳甘绍伯劳为德高虹张传生刘思国
- 关键词：旋毛虫基因克隆基因表达
- 重排噬菌体E基因、含有该基因的打孔质粒载体及其应用
- 本发明公开了一种经基因重排后获得的PhiX174噬菌体mE基因以及含有该基因的打孔质粒载体及其构建方法，本发明还进一步涉及该孔质粒载体在制备菌蜕中的用途，属于基因工程领域。本发明利用基因重排技术，对PhiX174噬菌体E...
- 刘思国常月红刘慧芳王春来彭伟司薇
- 文献传递
- 牛抗菌肽Bac7-Bac5融合基因在大肠杆菌中的过表达,纯化及抑菌活性被引量：14
- 2007年
- 牛抗菌肽Bac7和Bac5是一种线性阳离子小分子多肽,在机体天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要作用。根据Gen bank中公布的牛抗菌肽bac7和bac5成熟肽基因序列,人工合成了融合基因Bac7-Bac5片段,克隆于原核表达载体pET32(a+)中构建了重组表达载体pET-B7-B5,将其转化于E.coli BL21(DE3)中实现了重组蛋白B7-B5(rB7-B5)的过表达,表达的rB7-B5以包涵体形式存在,rB7-B5表达量约占细菌总蛋白的36.6%,分子量大小为33kDa,与预测大小相符。以8mol/L尿素变性包含体后用Ni亲和层析柱纯化目的蛋白,经多步透析法复性的rB7-B5对猪胸膜肺炎放线杆菌和耐药性大肠杆菌具有很好的抑菌活性,为新型抗菌制剂的研制和开发奠定了基础。
- 赵昆刘思国王春来宫强迟磊刘建东王勇云孟克常月红刘慧芳周媛媛孙延鸣
- 关键词：融合基因抑菌活性
- 鸡传染性支气管炎病毒SY毒株生物学特性及其S1基因分子遗传变异分析
- 2002年
- 通过生物学特性研究 ,验证了分离自沈阳地区的SY毒株确实为 1株鸡传染性支气管炎病毒。病毒中和试验表明 ,SY血清型不同于参考毒株T、H52 、M41及国内其他流行株如HD、XB、DB等 ;S1基因序列分析表明 ,SY核苷酸序列及推导的氨基酸序列与参考毒株Beau、M41、H12 0 、N1 62、Gray、6/ 82和Ark99等毒株的同源率都低于 80 % ,进化关系与各参考毒株也相距甚远 ,糖基化位点出现 3个新位点 ,氨基酸疏水性区域也存在差异。
- 刘明春江国托康丽娟刘思国赵玉军
- 关键词：分子遗传生物学特性S1基因
- 结核分枝杆菌rv3295基因的原核表达及单克隆抗体的制备被引量：1
- 2015年
- 以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白。通过亲和层析纯化,以该重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合筛选制备抗该重组蛋白的单克隆抗体;采用Western-blot验证单克隆抗体的特异性;通过亚型鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型。结果显示,Rv3295蛋白以可溶形式表达,蛋白质的分子质量大小为25ku。获得1株抗该重组蛋白的单克隆抗体1F7,其亚型为IgG1/κ;Western-blot结果显示,该抗体具有较好的特异性。本研究制备的Rv3295蛋白的单克隆抗体对于研究Rv3295蛋白的功能及其与DNA之间的互作奠定了基础。
- 崔莹莹宋宁宁党光辉曹俊李华芳于申业刘思国
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达单克隆抗体
- 猪瘟病毒E2蛋白4重复抗原表位的构建及抗原活性研究被引量：2
- 2003年
- 利用PCR方法获得 4次重复的猪瘟病毒E2蛋白中和性抗原表位基因 ,将其克隆到 pGEM 5ZF(+)载体 ,测序正确后亚克隆到pGEX 3X载体构建得到重组质粒pGEX 3X 4P。重组质粒在大肠杆菌中诱导表达了含 4重复抗原表位的融合蛋白。该蛋白经纯化后 ,利用间接ELISA检测其与血清的反应性 ,结果表明 ,纯化的融合蛋白与兔抗CSFVE2血清有很强的反应性 ,与兔抗BVDVE2血清不反应 。
- 张青婵刘思国徐兴然余兴龙涂长春
- 关键词：猪瘟病毒CSFV基因克隆技术疾病防治
- 间接免疫荧光抗体法在APP疫苗保护效果评价中的初步应用
- 2010年
- 应用间接免疫荧光抗体法对免疫攻毒后小鼠肺脏中的APP抗原进行了定位,比较了灭活疫苗和重组亚单位疫苗对小鼠肺脏中APP抗原的清除能力,同时与各组小鼠的存活率及其肺脏的病理学变化进行相关性比较。结果表明,灭活疫苗组和重组亚单位疫苗组小鼠肺脏的荧光强度、数量均明显弱于对照组,而重组亚单位疫苗组又明显弱于灭活疫苗组。说明两种疫苗均对APP抗原有一定的清除和中和作用,且重组亚单位疫苗的作用强于灭活疫苗。该结果与各组小鼠的存活率和肺脏病理学损伤的结果一致。说明通过间接免疫荧光定位免疫攻毒后小鼠肺脏中的APP抗原作为疫苗保护效果的一种评价方法是可行的。
- 邵美丽刘思国
- TaqMan探针实时定量PCR检测肉中金黄色葡萄球菌的研究被引量：6
- 2013年
- 根据GenBank公布的金黄色葡萄球菌的nuc基因序列设计一对引物和一条TaqMan探针,在分析其特异性基础上,构建阳性重组质粒进行荧光定量PCR扩增,制备标准曲线,分析方法的敏感度。进一步将该方法应用到人工染菌肉样中,分析其最低检出限。结果显示该方法对5株金黄色葡萄球菌均可产生特异性扩增曲线,其他6株非单增李斯特菌不产生扩增曲线,表明该方法具有较强的特异性。对阳性重组质粒定量扩增所建立标准曲线的相关系数为0.997,敏感度为1.87×101拷贝.μL-1。该法对人工染菌肉样中金黄色葡萄球菌的最低检出限为2.0×102cfu.g-1。该方法特异性强、敏感性高,可为肉中金黄色葡萄球菌的快速、准确的定量检测奠定基础。
- 邵美丽许岩刘思国赵燕丽孔保华
- 关键词：TAQMAN探针荧光定量PCR
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅢA基因的克隆和表达
- 以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型参考株基因组DNA为模板,PCR方法扩增出apxⅢA基因3.1kb的片段,扩增产物克隆于pMD18-T中,重组质粒经酶切鉴定后进行核苷酸序列测定,并与GenBank中不同血清型胸膜肺炎放...
- 邵美丽刘思国王春来郭洋张秀华郭设平佟恒敏
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌
- 文献传递
- 大肠杆菌打孔质粒载体、其构建方法及在制备菌蜕中的应用
- 本发明公开了一种大肠杆菌打孔质粒载体pBV－E及其构建方法，本发明还公开了该大肠杆菌打孔质粒载体在制备大肠杆菌菌蜕中的用途，属于基因工程领域。本发明大肠杆菌打孔质粒载体采用了两个启动子，即pR、pL串联双启动子来表达E基...
- 刘思国王春来常月红刘惠芳
- 文献传递
