刘明远
- 作品数：221 被引量：671H指数：14
- 供职机构：吉林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 旋毛虫和伪旋毛虫肌幼虫时期排泄分泌产物iTRAQ法蛋白质组学分析被引量：2
- 2020年
- 目的探究旋毛虫和伪旋毛虫肌幼虫时期排泄分泌产物(ESP)中的差异蛋白,分析两者免疫抑制差异的原因和参与包囊形成的潜在功能蛋白。方法收集旋毛虫和伪旋毛虫ESP,采用二喹啉甲酸检测法测定旋毛虫、伪旋毛虫ESP蛋白浓度,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白质量,对经过超滤管酶解法酶解后的ESP多肽段采用同位素相对定量和绝对定量标记技术(iTRAQ)标记,混合标记后的样品进行液相分离高pH反相色谱和液相串联质谱检测。检测完成后,搜索UniProt数据库中的旋毛虫(Trichinella spiralis)和伪旋毛虫(Trichinella pseiudospiralis)数据库,在可信蛋白(得分80以上)的基础上筛选同源蛋白,比较同源蛋白的差异表达情况。利用QuickGO对差异蛋白进行标准化描述。选取9个差异明显的重要蛋白进行实时荧光定量PCR验证,采用△△Ct法验证基因表达水平。采用SPSS 19.0软件进行统计学分析结果经iTRAQ标记鉴定出旋毛虫可信蛋白492个,伪旋毛虫535个,可用于定量分析的旋毛虫蛋白193个,伪旋毛虫蛋白164个。旋毛虫/伪旋毛虫同源比对结果显示,表达蛋白上调162个,下调31个。GO分析结果显示,分子功能主要富集在离子结合功能、肽酶活性、氧化还原酶活性和核酸酶活性,分别为45、18、12和8个。在生物过程中,涉及最多的是小分子代谢过程(15个),碳水化合物代谢过程(12个),生物合成过程(12个),DNA代谢过程过程(8个)。差异蛋白涉及的细胞组成成分主要为细胞质和含蛋白质的复合物。KECG分析显示,与硫胺素代谢,鞘糖脂生物合成,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成相关的蛋白大部分上调。plancitoxin-1(E5SXW8)、胰蛋白酶(E5SPA7)、胱抑素(E5S387)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(E5SJH4)、5’-核苷酸酶(E5S554)、烯醇酶(E5SQX1)、L-天冬酰胺酶(E5SBA6)蛋白表达和基因转录水平在旋毛虫肌幼虫时期均高于伪旋�
- 张雨璐王洋白雪唐斌胡晓祥张春玲刘明远刘晓雷
- 关键词：旋毛虫肌幼虫蛋白质组学ITRAQ
- 伪旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库的构建及筛选被引量：1
- 2008年
- 目的获取伪旋毛虫(Trichinella pseudospiralis)肌幼虫时期抗原性基因。方法利用λZAP载体构建伪旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库;以感染伪旋毛虫60天后的猪血清为抗体探针,对伪旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行免疫学筛选,对筛选出的强反应原性克隆进行测序,利用相关分子生物学软件进行序列分析。结果构建的伪旋毛虫cDNA表达文库的库容量为0.55×106pfu,重组率为95.6%,扩增后文库滴度为1.2×1010pfu/mL。从2.0×105个重组噬菌体筛选获得阳性克隆27个。序列分析结果表明这27个阳性克隆共编码7种cDNA分子,其编码的类似蛋白分别为伪旋毛虫Tp21kDa蛋白、伪旋毛虫Tp28kDa蛋白、蛋白酶体激活因子亚单位(Proteasome activator subunit)类蛋白、Nudix水解酶(Nudix hydrolyase)类蛋白、凝集因子(Condensin)类蛋白、尿嘧啶糖基化酶(uracil glycosylase)类蛋白和一个未知蛋白。结论获得两个反应原性较强且高拷贝的抗原基因,其分别编码Tp21kDa蛋白及蛋白酶体激活因子亚单位。
- 吴秀萍赫荣华高丽芳付宝权王学林R. Blaga邓洪宽于申业P. Boireau王峰刘明远
- 关键词：肌幼虫CDNA表达文库
- 旋毛虫新生幼虫p46 000抗原基因的克隆及序列分析
- 应用感染旋毛虫猪血清,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行了免疫筛选,对阳性克隆pBK-CMV-WN10的序列分析结果表明,cDNA全长为1352bp,含有1个1218bp的完整的开放阅读框架(ORF),编码的多肽由406个...
- 付宝权吴秀萍刘明远张亚兰原丽红李莲瑞卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫免疫筛选基因克隆
- 文献传递
- 旋毛虫A200711蛋白对裸鼠H7402细胞实体瘤的抑制作用被引量：5
- 2015年
- 为了探讨旋毛虫A200711蛋白对BALB/c裸鼠皮下人肝癌H7402细胞实体瘤的抑制作用。本试验将BALB/c裸鼠右侧腋下注射人肝癌H7402细胞,建立裸鼠实体瘤模型。成瘤后,每2d向实体瘤中间部位多点注射0.2mL质量浓度为7.5mg/L的旋毛虫A200711蛋白,观察裸鼠一般临床症状及实体瘤生长情况;每3d称量裸鼠体质量,测量肿瘤直径,计算肿瘤的体积,绘制肿瘤生长曲线;3周后处死裸鼠,小心剥离肿瘤组织,称量肿瘤的重量,计算抑瘤率。20d后裸鼠腋部皮下均长出肿瘤结节,成瘤率为100%,平均直径3~5 mm;与模型对照组比较,注射A200711蛋白12d后裸鼠实体瘤体积明显缩小,抑瘤率达到39.67%。结果表明,旋毛虫A200711蛋白对裸鼠人肝癌细胞实体瘤的生长具有明显的抑制作用。
- 刘菁刘晓雷白雪汪洋孙树民赵静张馨月于晓梅刘明远王学林
- 关键词：裸鼠实体瘤抑瘤
- 以重组蛋白为抗原的ELISA法检测旋毛虫抗体被引量：4
- 2005年
- 目的寻求特异性强、敏感性高的旋毛虫病诊断抗原。方法以旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在E.coli高效表达的重组蛋白为抗原,分别以兔、猪和健康者血清及旋毛虫病阳性血清为一抗,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG、山羊抗猪IgG和山羊抗人IgG为二抗,建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法,并以旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(ES)抗原作为检测对照。结果以T668重组蛋白为抗原,对兔、猪和人旋毛虫病血清进行检测,阳性检出率为100%,且敏感性高(0.016μg/孔),与ES抗原检测结果完全一致。结论T668重组抗原有望替代ES抗原检测旋毛虫抗体。
- 牛廷献潘菲菲刘明远卢强付宝权Pascal Boireau
- 关键词：旋毛虫重组蛋白间接ELISA
- 旋毛虫属分类的研究进展被引量：5
- 2006年
- 近年来,随着遗传学、生物学和生物化学的发展,已将旋毛虫属分为8个种和3个分类地位尚未定的基因型。文章就不同种和基因型的旋毛虫,分别具有的不同宿主、环境选择因素和世界性分布区域做一综述。
- 崔国祯王学林刘明远夏慧卿邓洪宽杨志东孙磊谭业平
- 关键词：旋毛虫病
- 一种旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法与应用
- 一种旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法与应用，属于荧光免疫检测技术领域。为了更快速、稳定、准确检测旋毛虫感染，本发明提供了一种旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条，包括样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫和底板，所述结合垫上...
- 刘明远刘晓雷杨勇王学林白雪唐斌丁静王楠张小波
- 文献传递
- 旋毛虫虫体蛋白对肝癌细胞H7402的抑制作用被引量：14
- 2007年
- 目的:研究旋毛虫虫体蛋白对肝癌H7402细胞的抑制作用,确认其对肝癌细胞的抗肿瘤活性。方法:通过体内、体外培养获得旋毛虫成虫与新生幼虫的混合物,采用匀浆、离心方法制备旋毛虫虫体蛋白,紫外分光光度计检测蛋白浓度。分别设0.035、0.070、0.140 mg/ml与H7402细胞作用为实验组,并设虫体蛋白对正常肝细胞HL-7702细胞作用为对照组,采用MTT检测细胞增殖能力,划痕实验、侵袭实验检测旋毛虫虫体蛋白对H7402的迁移及侵袭能力的影响,采用TUNEL法和流式细胞术分析肿瘤细胞凋亡和细胞周期。结果:成功制备了旋毛虫虫体蛋白。0.035、0.070、0.140 mg/ml旋毛虫虫体蛋白对H7402细胞增殖的抑制率分别为(22.40±13.80)%、(29.45±16.80)%、(39.38±17.80)%。TUNEL实验和流式细胞术可观察到旋毛虫虫体蛋白诱导H7402凋亡,其凋亡率为(39.07±0.90)%,细胞周期阻滞于S期。划痕和侵袭的实验表明旋毛虫虫体蛋白对H7402细胞迁徙能力有抑制作用,对其侵袭的抑制率为(63.79±13.71)%。结论:旋毛虫虫体蛋白对肝癌H7402细胞的增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,可能是一个有潜在应用价值的抗肝癌生物制剂。
- 王学林杨世杰吴秀萍于申业叶春艳邓洪宽魏征仁王卫芳王芯蕊刘明远
- 关键词：旋毛虫抗肿瘤抗增殖
- 旋毛虫新生幼虫p46000抗原基因的表达与抗原性分析被引量：10
- 2005年
- 目的 对旋毛虫新生幼虫p460 0 0抗原基因进行原核表达并检测重组抗原的抗原性。 方法 利用聚合酶链反应 (PCR)扩增目的基因 ,克隆到原核表达载体 pET 2 8a ,构建重组表达质粒 ,经酶切及测序鉴定后转化大肠埃希菌BL2 1(DE3 ) ,以异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导表达。十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)、酶联免疫吸附测定 (ELISA)和蛋白质印迹法 (Westernblotting)分析表达产物。 结果 SDS PAGE结果显示表达产物的分子量约为Mr 480 0 0 ,与理论值相符。ELISA和Westernblotting结果表明 ,重组蛋白可被旋毛虫感染的猪血清和兔抗重组蛋白血清识别 ;兔抗重组蛋白血清可识别旋毛虫新生幼虫抗原Mr 460 0 0蛋白。 结论 成功表达了旋毛虫新生幼虫p460 0 0抗原基因 ,重组抗原具有良好的抗原性。
- 原丽红付宝权刘明远高飞张亚兰吴秀萍林本夫李莲瑞卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：抗原基因旋毛虫重组抗原抗原性分析SDS-PAGE猪血清
- 旋毛虫诊断技术
- 本标准规定了家畜（猪、马和犬属动物）和野生动物旋毛虫病原学诊断、酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光免疫层析试纸卡、多重聚合酶链式反应（多重PCR）检测方法的技术要求和操作规范。本标准适用于猪产地检疫、屠宰加工、流行病学...
- 刘明远 刘晓雷 王媛媛 吴秀萍 董雅琴 白雪 王学林 唐斌 杨勇 丁静
