刘朗夏
- 作品数：14 被引量：2H指数：1
- 供职机构：暨南大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- PCNA蛋白突变体的真核表达载体构建及鉴定
- 2012年
- 目的构建带FLAG标签的细胞增殖核抗原(PCNA)蛋白Y211A、Y211D突变型重组质粒,真核表达及鉴定。方法以FLAG-PCNA野生型基因为模板,运用PCR定点突变技术扩增出带突变位点的基因序列,将其插入真核表达载体pCMV-N-FLAG,进行双酶切实验和测序验证。然后,利用脂质体将重组质粒转染至293T细胞,Western blotting鉴定融合蛋白的表达。结果 FLAG-PCNA(Y211A)、FLAG-PCNA(Y211D)重组质粒测序结果正确,获得PCNA蛋白突变体。结论成功构建了带FLAG标签的PCNA蛋白Y211A、Y211D真核表达载体,验证了突变型PCNA融合蛋白的表达,为PCNA蛋白功能的深入研究奠定了基础。
- 刘小会淡松松秦焕焕高学娟刘朗夏
- 关键词：PCNA蛋白突变体真核表达
- 一种青蒿琥脂生物素标记衍生物及其制备方法和在靶向弥漫大B细胞淋巴瘤中的应用
- 本发明涉及一种青蒿琥脂生物素标记衍生物及其制备方法和在靶向弥漫大B细胞淋巴瘤中的应用，通过对青蒿琥脂的分子结构进行化学修饰，添加酰胺键与生物素相连，合成得到青蒿琥脂生物素标记衍生物，进一步采用小分子SM Pull dow...
- 刘朗夏刘小会曾丽怡姚华张岚高学娟熊丹
- GST-HRB融合蛋白的表达与纯化被引量：1
- 2011年
- 构建GST-HRB重组质粒,进行融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用PCR扩增及基因重组技术,以pcDNA-3.1-HRB为模板扩增出HRB全基因序列,并将其插入带有GST(谷胱甘肽巯基转移酶)标签的原核表达载体pGEX-6P-1中,构建GST-HRB融合蛋白表达质粒。然后,将重组质粒GST-HRB转化至大肠杆菌Rosseta进行融合蛋白的表达。利用GST琼脂糖珠进行融合蛋白的纯化,最后应用SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定纯化的融合蛋白。结果表明,成功构建pGEX-6P-1-HRB原核表达载体,表达及纯化了GST-HRB融合蛋白。
- 刘丽杰高学娟刘小会陈妙娟朱森刘朗夏
- 关键词：融合蛋白纯化
- UV照射和MMS诱导下PCNA表达的变化及相关研究
- 2014年
- 目的:建立DNA损伤的模型,在蛋白水平和mRNA水平研究PCNA的表达变化情况。方法:UV照射和MMS处理细胞后利用Western blot和实时荧光定量PCR检测PCNA蛋白表达水平和mRNA水平的变化,以及利用倒置荧光显微镜观察细胞的形态变化。运用ShRNA干扰技术降低泛素E3连接酶RAD18和CUL4A的表达,检测内源PCNA蛋白表达水平的变化。结果与结论:UV照射和MMS处理细胞后,细胞形态发生变化,随着时间的延长,大部分细胞趋于死亡。实时荧光定量PCR的结果发现PCNA的mRNA水平下降,但是PCNA蛋白水平的表达无明显变化,说明DNA损伤时PCNA蛋白的稳定性增加,暗示细胞中存在着一定的机制,维持PCNA蛋白表达量的稳定。干扰E3连接酶CUL4A和RAD18的表达时,PCNA蛋白水平有所升高,提示二者参与了PCNA的降解过程。
- 谢颖颖汤冬娥刘小会高学娟刘朗夏
- 关键词：PCNADNA损伤UVMMS
- FlightlessⅠ与核质转运蛋白Importin β及核孔蛋白Nup88的相互作用被引量：1
- 2015年
- Fightless I(FLII)是一个在肿瘤中高表达的蛋白,前期研究提示FLII可能参与核质转运过程,为鉴定FLII是否与核膜结合蛋白相互作用,构建GST-FLII、GST-LRR融合蛋白重组质粒并转化至大肠杆菌Rosetta进行诱导表达,使用GST琼脂糖珠进行融合蛋白的纯化。通过SDS-PAGE对纯化蛋白进行验证之后,利用GST-pull down及免疫共沉淀技术证明了FLII与Importinβ、Nup88蛋白的相互作用,并鉴定FLII上的LRR结构域为相互作用区域。研究结果提示FLII可能参与了Importinβ的部分生物学作用,为进一步分析FLII与Importinβ、Nup88的生物学功能奠定了基础。
- 廖声友王翠华汤冬娥魏金梅贺玉娇熊海庭徐凤梅高学娟刘小会刘朗夏
- 关键词：免疫共沉淀FLIGHTLESSIMPORTINNUP88
- GSN mRNA的3’UTR在制备抗肿瘤药物中的应用
- 本发明公开了GSN mRNA的3’UTR在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明首次发现GSN mRNA的3’UTR可以通过介导上皮细胞‑间充质转化信号通路抑制肿瘤细胞迁移、侵袭和增殖的能力，并且GSN mRNA的3’UTR具有...
- 刘朗夏刘小会黄秀珠马洁高学娟李璐
- 文献传递
- 刚地弓形虫His-TgPP2C融合蛋白的表达与纯化
- 2012年
- 目的构建His-TgPP2C重组质粒,在大肠杆菌E.coil BL21(DE3)中进行融合蛋白的表达、纯化及鉴定。方法利用PCR扩增及基因重组技术,以pcDNA3-TgPP2C为模板,扩增出全长的TgPP2C基因,将所得的PCR产物插入带有His标签的原核表达载体pBAD-His中,得到重组质粒。经XhoⅠ、HindⅢ双酶切及测序鉴定正确后,转化至大肠杆菌E.coli BL21,通过异丙基-β-硫代半乳糖苷诱导表达His-TgPP2C融合蛋白,最后经Ni-NTA柱亲和层析纯化融合蛋白以及Western blot方法鉴定纯化的融合蛋白。结果得到构建好的His-PP2C质粒及纯化的目的融合蛋白His-TgPP2C。结论成功构建pBAD-His-TgPP2C原核表达载体,表达及纯化了His-PP2C融合蛋白,为深入研究TgPP2C蛋白在刚地弓形虫疾病发生发展过程中的作用奠定基础。
- 朱森高学娟刘小会陈妙娟刘丽杰刘朗夏
- 关键词：融合蛋白纯化刚地弓形虫
- Raf-1蛋白突变体的原核表达、纯化及活性鉴定
- 2012年
- 目的:将Raf-1蛋白259位丝氨酸(Ser,S)突变成天冬氨酸(Asp,D),构建突变型GST-Raf-1220-268S259D原核表达载体,表达和纯化融合蛋白及鉴定其生物学活性。方法:以pGEX-4T-1-Raf-1220-268为模板,运用PCR定点突变技术扩增出Raf-1220-268S259D基因序列,插入原核表达载体pGEX-6P-1,表达和纯化重组蛋白,GST沉降实验鉴定蛋白的生物学活性。结果:重组质粒测序结果正确,获得模拟磷酸化GST-Raf-1220-268蛋白。GST沉降实验检测到目的蛋白和14-3-3蛋白具有体外特异性结合活性。结论:成功构建GST-Raf-1220-268S259D原核表达载体,并表达及纯化了有生物学活性的融合蛋白,为进一步针对Raf-1的研究提供实验依据。
- 刘小会高学娟刘朗夏
- 关键词：突变体原核表达纯化
- ZSWIM1蛋白在调控肺腺癌细胞增殖和转移中的应用
- 本发明属于蛋白质科学技术领域，具体涉及ZSWIM1蛋白在调控肺腺癌细胞增殖和转移中的应用。本发明提供了ZSWIM1蛋白在调控癌细胞增殖和转移中的应用，ZSWIM1蛋白可作为癌细胞增殖和转移调控的新靶标；通过检测ZSWIM...
- 何庆瑜高学娟张弓官柏烨连琼华刘朗夏
- 文献传递
- 埃兹蛋白(Ezrin)及其突变体的原核表达与纯化
- 2012年
- Thr567位点磷酸化是ezrin活化的必需条件。利用定点突变引物将T567突变为A或D,通过PCR扩增出相应的基因片段,将其通过T4连接酶连接至含His标签的原核表达载体pET-20b(+),构建了原核重组质粒pET-20b(+)-Ez WT,pET-20b(+)-EzT567A和pET-20b(+)-EzT567D。转化表达宿主大肠杆菌Rosseta后,用异丙基-β-硫代半乳糖诱导重组蛋白的表达。重组蛋白经亲和镍柱纯化以后,应用western blot鉴定纯化的融合蛋白。Ezrin野生型及其组成型激活和显性负突变质粒的成功构建及其目的蛋白His-Ez WT,His-EzT576A和His-EzT576D的成功表达纯化,为更深入地研究ezrin生物学功能奠定基础。
- 刘腾飞陈妙娟高学娟刘小会刘朗夏
- 关键词：埃兹蛋白野生型
