刘霄卉
- 作品数：18 被引量：23H指数：3
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学更多>>
- 绵羊肺腺瘤病特异性PCR及套式PCR诊断方法的建立被引量：5
- 2009年
- 绵羊肺腺瘤是由外源性反转录病毒JSRV引起的接触性传染的肺肿瘤性疾病。感染羊没有针对JSRV的循环抗体,但在感染羊的肺肿瘤组织、淋巴网状系统及外周血单核细胞中可检测到外源性前病毒exJSRV及JSRV转录产物。健康羊基因组中存在15~20拷贝的内源性前病毒enJSRV,内外源性前病毒的结构基因高度相似,而在U3区存在差别,因而,设计了针对exJSRVU3区的特异性引物并在国内首次建立了一步法特异性PCR检测法及套式PCR检测法。以700ng健康羊基因组DNA为背景,梯度稀释阳性质粒pJSRV-LTR作为模板,比较两种方法的敏感性,结果表明套式法的敏感性是一步法的10倍以上,套式法也是目前可用于检测感染羊血液样品的唯一方法,可望在绵羊肺腺瘤病的流行病学调查及防控方面起重要作用。
- 罗军荣刘霄卉余群英张淑琴周建华马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒套式PCR
- 绵羊肺腺瘤LAMP快速诊断方法的初步建立(英文)被引量：2
- 2013年
- 为了建立一种便捷、灵敏的绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)检测技术,本研究根据exJSRV LTR设计2对特异性引物,建立JSRV的LAMP(loop-mediated isothermal amplification,环介导等温扩增)检测方法,对反应体系中的MgSO4Betaine Bst DNA PoLymerase dNTP引物浓度等分别进行了优化,并进行敏感性和特异性试验。结果表明:所建立的反应体系在恒温水浴锅中作用60min即可得到其特有的阶梯状条带,而且对内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)的扩增结果为阴性,该方法对JSRV前病毒DNA的最小检测限为10拷贝,灵敏性高于一步PCR方法。LAMP和特异性PCR及套式PCR方法检测临床样品的符合率分别为92%和100%。该方法为绵羊肺腺瘤病的临床检测和基层检疫提供了一种简便、实用的方法,可望在绵羊肺腺瘤病的流行病学调查及防控方面起重要作用。基于本技术的专利已获国家知识产权局批准(专利号ZL 2012 1 0274280.7)。
- 刘霄卉于立新罗军荣周艳喜刘畅幺宏强周建华马学恩
- 关键词：环介导等温扩增绵羊肺腺瘤病毒敏感性
- 内源性绵羊肺腺瘤病毒全基因组序列测定与序列分析被引量：3
- 2012年
- 参照内源性绵羊肺腺瘤病毒株enJSRV-20全基因组序列设计合成3对引物,应用PCR技术扩增内源性绵羊肺腺瘤病毒基因片段分别连接pMD-18T载体并测序,完成了内源性绵羊反转录病毒基因组序列测定。分析结果显示,测定序列全长7 519bp,与内源性绵羊肺腺瘤病毒代表株enJSRV-20核苷酸同源性为99.4%,与外源性绵羊肺腺瘤病毒代表株AF357971.1的核苷酸同源性为90.4%。基于全基因组序列核苷酸的系统进化发生树分析结果显示,扩增序列与enJSRV-20的亲缘关系最近。
- 周艳喜苏佳李靖刘霄卉马学恩
- 关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒PCR扩增全基因序列
- 稳定表达绵羊肺腺瘤病毒表面蛋白A549细胞系的建立被引量：1
- 2011年
- 为研究绵羊肺腺瘤病病毒(JSRV)表面蛋白(SU)的致瘤机制,本研究构建稳定表达SU的羊肺细胞A549细胞系。采用PCR方法从含su基因的pGEX-4T-1-SU重组质粒中扩增SU编码序列,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,转染A549细胞。通过G418筛选,对转染阳性细胞进行纯化,获得稳定表达JSRVSU蛋白的A549细胞系。以间接免疫荧光及westernblot鉴定SU的表达状况,并运用共聚焦显微镜确认SU蛋白的亚细胞定位。结果表明,重组蛋白SU在A549细胞中有效表达,而且主要分布于细胞质中。该细胞系的建立为SU生物学功能的体外研究提供了平台。
- 刘霄卉罗军荣斯日古楞周建华马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒表面蛋白真核表达细胞内定位
- 检测绵羊肺腺瘤病病毒的LAMP引物及应用
- 本发明公开了检测绵羊肺腺瘤病病毒的环介导等温扩增反应引物，该引物由一对内引物和一对外引物组成，其中，内引物对由引物SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2组成；外引物对由引物SEQ ID NO.3和SEQ ID NO...
- 刘霄卉马学恩罗军荣周建华
- 马传染性贫血病毒受体基因的原核表达被引量：1
- 2008年
- 为了构建马传染性贫血病毒受体(ELR1)的原核表达体系,克隆ELR1的编码区基因,将其亚克隆到PET-30a构建重组表达质粒PET-30a-ELR1,经酶切和DNA测序鉴定,将阳性质粒转化E.coliBL21感受态细胞,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE电泳及Westhern-blot分析鉴定,结果表明:该基因在大肠杆菌中以包涵体形式表达,其表观分子质量约为39.6ku;利用尿素洗涤纯化可以得到具有较高纯度的表达蛋白,是一种理想的免疫原。
- 张淑琴罗军荣刘霄卉杨旭艳马学恩周建华
- 关键词：EIAV原核表达
- JSRV-TM重组真核表达载体的构建及其在HepG2细胞株中的表达
- 绵羊肺腺瘤病病毒(Jaagsiekte retrovirus, JSRV)属于β反转录病毒，为线性单股正链RNA，全长7.4kb，编码相互重叠的gag,pro,pol,env基因。其中env基因的orf编码跨膜蛋白(tr...
- 刘霄卉罗军荣斯日古楞周建华马学恩
- 关键词：真核表达载体跨膜蛋白发病机理
- 文献传递
- 羊Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离培养及鉴定被引量：1
- 2009年
- 为改进羊肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离和培养技术,本研究采用IgG黏附法结合磁化树脂微粒法分离纯化了山羊肺泡Ⅱ型上皮细胞,碱性磷酸酶染色检查表明Ⅱ型细胞占90%以上,台盼蓝染色活细胞为95%以上。羊肺泡Ⅱ型上皮细胞分离纯化方法的建立,为今后体外分离培养绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的探索性工作奠定了基础,也为研究肺纤维化及肺癌发病机理等重大课题提供了重要的技术支持。
- 罗军荣余群英刘霄卉高华武志红周艳喜周建华马学恩
- 表达绵羊肺腺瘤病毒跨膜蛋白HepG2细胞系的建立
- 2011年
- 为深入研究绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)与绵羊肺腺瘤病(OPA)发病关系,本研究采用PCR方法从pGEX-4T-1-TM重组质粒中扩增编码JSRV跨膜蛋白(TM)的基因序列,并引入标签多肽HA序列和限制性内切酶位点,将其重组至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建了重组质粒pcDNA-TM-HA。通过转染HepG2细胞并用G418筛选,对稳定表达TM的阳性细胞进行纯化,获得了稳定表达JSRV tm基因的HepG2细胞系。间接免疫荧光及western blot检测结果表明,重组蛋白TM-HA在HepG2细胞中得到正确表达。JSRV TM蛋白稳定表达细胞系的建立为进一步研究该蛋白与JSRV诱导OPA发病关系提供了重要的实验平台。
- 刘霄卉罗军荣斯日古楞周建华马学恩
- 关键词：跨膜蛋白真核表达HEPG2细胞系
- 绵羊肺腺瘤PCR诊断方法的建立及应用被引量：2
- 2011年
- 利用特异性PCR方法实现对绵羊肺腺瘤病毒(OPAV)快速精确诊断和病毒类型的分析。参照GenBank中公布的外源性绵羊肺腺瘤病毒基因序列,针对病毒env基因YXXM基序设计了特异性PCR引物,建立了特异性PCR检测方法。成功扩增出病毒囊膜基因(env)多变区序列片段(ST)通过序列比对确定病毒类型。此方法操作简便,可用于绵羊肺腺瘤的快速诊断,可望在绵羊肺腺瘤发病机制等研究中起到重要作用。
- 周艳喜苏佳李靖刘霄卉马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒聚合酶链反应
