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吴亮: 作品数：74 被引量：285H指数：11; 供职机构：江苏大学临床医学院更多>>; 发文基金：镇江市科技支撑计划(社会发展)项目江苏省预防医学科研基金中国博士后科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>

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刚地弓形虫绿色荧光蛋白突变株的构建被引量：2: 2011年; 目的构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的弓形虫突变株,探讨以其检测宿主细胞感染率的效果。方法在人子宫颈癌(HeLa)细胞中培养弓形虫RH株速殖子,电穿孔法向虫体导入质粒ptubP30-GFP/sag-CAT,氯霉素和极限稀释法筛选稳定表达P30-GFP融合蛋白的突变株,RT-PCR法和荧光显微镜检测GFP蛋白在虫体内的表达。HeLa细胞分别感染1×104～1×107个突变株虫体,24 h后,显微镜计数各孔10个高倍镜视野下具有GFP荧光的HeLa细胞数。流式细胞仪检测"纳虫泡",评估HeLa细胞感染率。结果导入ptubP30-GFP/sag-CAT质粒后,经氯霉素筛选获得阳性克隆。RT-PCR检出虫体GFP基因表达,镜下可见GFP荧光聚集于虫体外膜。HeLa细胞感染率随虫体接种量的增多而增加,接种1×104～1×107个虫体24 h后,具有GFP荧光的HeLa细胞数分别为(14±6)、(133±45)、(332±93)和(443±90)个;流式细胞仪检测HeLa细胞感染率分别为(0.49±0.09)%、(8.76±0.50)%、(21.02±1.49)%和(39.00±3.47)%。结论构建了刚地弓形虫GFP荧光蛋白突变株,为检测虫体在宿主细胞内的增殖提供了新途径。; 吴亮袁异玮姜旭淦傅行礼逯兆喜涂国华李礼陈盛霞周红; 关键词：弓形虫突变株绿色荧光蛋白荧光显微镜流式细胞仪

隐孢子虫卵囊DNA纯化方法的研究进展被引量：3: 2009年; PCR技术不仅可检测极微量的隐孢子虫,而且具有高度特异性,在隐孢子虫检测中发挥重要作用。PCR检测中,隐孢子虫卵囊模板DNA的制备尤为重要,需对卵囊进行分离纯化和裂解后才能提取纯化DNA。本文综述目前常用的卵囊分离纯化、裂解和DNA提取纯化的方法。; 吴亮章秋霞李婷婷陈盛霞曹建平; 关键词：隐孢子虫卵囊 DNA 纯化

单增李斯特菌感染抑制HepG2细胞RhoA表达并促进其凋亡被引量：5: 2016年; 目的探讨单增李斯特菌(Lm)调控Hep G2细胞的凋亡能力以及对Rho家族Rho A蛋白表达的影响。方法常规方法培养Hep G2细胞,分别以感染复数(MOI)=10和MOI=100接种Lm菌EGD株,共培养1 h和20 h后收集培养物。异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,反转录PCR检测Hep G2细胞Rho A和caspase 3编码基因表达,分光光度法检测Hep G2细胞活化的caspase 3水平,Western blot法检测Hep G2细胞Rho A蛋白表达。结果 Lm的侵袭可促进Hep G2细胞凋亡,下调Hep G2细胞Rho A编码基因和蛋白表达,并上调caspase 3编码基因表达。结论 Lm感染促进宿主细胞凋亡,抑制宿主细胞Rho A表达。; 吴亮韩新烨刘原苏丹华付涛姜旭淦陈盛霞许化溪; 关键词：单增李斯特菌 RHO 细胞骨架凋亡

RhoA因子在单增李斯特菌侵袭HepG2细胞中的作用: 2016年; 目的研究HepG2细胞的Rho家族RhoA因子在Lm侵袭中的作用。方法构建真核表达载体p3×FLAGMyc-CMV-24-RhoA,经脂质体法转染HepG2细胞,使HepG2细胞过表达RhoA;同时针对RhoA序列合成siRNA,脂质体法转染HepG2细胞,抑制HepG2细胞RhoA表达。2种细胞同时感染Lm,通过Real-time PCR检测HepG2细胞RhoA上调/下调时培养物中Lm-Hly基因拷贝数,评估Lm数量。结果HepG2细胞转染p3×FLAG-Myc-CMV-24-RhoA载体后,Western blotting法检测RhoA表达量升高,且48h升高显著,此时HepG2细胞内Lm数量明显低于对照组;HepG2细胞转染siRNA后,Western blotting法检测RhoA表达量降低,且72h降低显著,此时HepG2细胞内Lm数量明显高于对照组。结论Lm侵入受HepG2细胞RhoA因子调控,主动下调细胞RhoA因子表达可能是Lm侵袭机制之一。; 吴亮王妍然刘原苏丹华付涛姜旭淦陈盛霞许化溪; 关键词：单增李斯特菌细胞骨架 RHOA HEPG2细胞

Tet-on慢病毒系统表达弓形虫ROP18的研究被引量：2: 2015年; 目的用Tet-on慢病毒载体系统构建稳定表达弓形虫棒状体蛋白18(ROP18)的293T细胞株。方法PCR扩增ROP18基因序列插入慢病毒载体p LVCT-t TR-KRAB中,构建带有ROP18活性片段的慢病毒载体p LVCT-t TRKRAB-ROP18。经鉴定后将该重组载体(6μg)与辅助质粒ps PAX2(4μg)和p MD2.G(2μg)共同转染293T细胞,荧光显微镜下观察细胞荧光。于转染后48和72 h收集含有慢病毒颗粒上清液,感染293T细胞。以1μg/ml强力霉素(DOX)诱导293T细胞表达ROP18,荧光显微镜下观察细胞荧光,RT-PCR法检测293T细胞中的ROP18表达情况。结果 PCR扩增rop18片段为960 bp,与预期大小一致。经PCR和酶切鉴定重组慢病素载体构建成功。转染48 h后,293T细胞于荧光显微镜下可见绿色荧光。经DOX诱导24 h即可观察到293T细胞中明亮绿色荧光。RT-PCR检测结果显示,293T细胞ROP18可产生960 bp特异条带,与预期结果一致。结论采用Tet-on慢病毒载体系统构建了稳定表达弓形虫ROP18的293T细胞株。; 王晓朱君吴亮吴腊梅刘原苏丹华丁宁赵康容姜旭淦陈盛霞曹建平; 关键词：刚地弓形虫慢病毒

金黄色葡萄球菌总RNA提取的研究被引量：5: 2018年; 目的金黄色葡萄球菌是一种临床常见致病菌,具有坚固细胞壁,常规方法难以抽提其总RNA。方法本研究采用3种方法提取金黄色葡萄球菌总RNA,包括直接Trizol法、溶菌酶裂解法和溶葡球菌酶裂解法,使用琼脂糖电泳检测3种方法抽提总RNA效果。结果研究结果表明,直接Trizol法和溶菌酶裂解法无法有效裂解金黄色葡萄球菌,未提取出总RNA。结论溶葡球菌酶裂解法可以有效裂解金黄色葡萄球菌,其提取效果理想,可以广泛推广。; 朱晓丽刘口妍任峰陆娟吴亮; 关键词：金黄色葡萄球菌总RNA 溶葡球菌酶

隐孢子虫对宿主细胞凋亡的调控机制研究进展被引量：3: 2010年; 逯兆喜吴亮陈盛霞曹建平; 关键词：隐孢子虫病宿主细胞凋亡感染性腹泻上皮细胞

银杏外种皮对钉螺的杀灭机理被引量：16: 2007年; To study the toxicity of extracts of Ginkgo biloba sarcotesta to Oncomelania hupensis,snails were exposed to 40% and 80% of 24 h LC 50 of the extract of Ginkgo bilba for 24 h,choline esterase(ChE),alanine aminotransferase(ALT),alkaline phosphatase(ALP),lactate dehydrogenase(LDH),succino dehydrogenase(SDH),malic dehydrogenase(MDH)activities in cephalopodium and liver were determined by enzyme kinetic assay.Arecoline and niclosamide were used as reference molluscicides.The results showed that sarcotesta of Ginkgo biloba could inhibit ChE,ALT,ALP and MDH activities both in cephalopodium and liver;arecoline could inhibit ChE,ALP,SDH and MDH activities in cephalopodium and ChE,ALT,ALP,SDH and MDH activities in liver.Niclosamide had inhibitory effects upon ChE,ALT,ALP,SDH and MDH activities in cephalopodium,and ChE,ALT,ALP and SDH activities in liver.All three molluscicides did not inhibite LDH activity in cephalopodium and liver.These results indicate that lethal effects of extracts of sarcotesta of Ginkgo biloba are mediated via inhibition of MDH activitiy,and interference with the NADH respiratory chains.Inhibition of vital enzymic mechanisms causes snails to death.; 陈盛霞吴亮杨小明姜旭淦李龙根张蓉仙夏磊邵世和; 关键词：ARECOLINE NICLOSAMIDE

采用实时PCR技术比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果被引量：2: 2009年; 目的比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA的效果。方法将分离纯化的隐孢子虫卵囊分别加入美国Promega公司(简称Promega)和上海捷瑞公司(简称捷瑞)基因组DNA纯化试剂盒的裂解液、2%TritonX-100和5%异硫氰酸胍,同时联合使用冻融法、蛋白酶K法和声裂法裂解卵囊,用试剂盒法或Chelex-100法提纯卵囊基因组DNA,用实时PCR测定隐孢子虫卵囊囊壁蛋白(COWP)基因拷贝数,以Promega试剂盒为参照比较不同纯化方法的提纯效果。结果Promega试剂盒的裂解液裂解隐孢子虫卵囊的效果最好,纯化所得卵囊COWP基因拷贝数可达(6.45～9.86)×106;其他依次为捷瑞试剂盒的裂解液[(2.38～3.69)×106]、5%异硫氰酸胍[(1.27～21.29)×105]和2%TritonX-100[(2.06～866.70)×103]。冻融法+蛋白酶K法+声裂法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果最佳,其次为冻融法+声裂法和蛋白酶K法+声裂法,冻融法+蛋白酶K法效果最差。结论冻融法+蛋白酶K法+声裂法联合使用能使卵囊DNA的提纯效率达到最大,捷瑞基因组DNA纯化试剂盒和5%异硫氰酸胍裂解法提纯隐孢子虫卵囊DNA可获得与Promega试剂盒相近的效果。; 陈盛霞吴亮沈玉娟章秋霞李婷婷姜旭淦徐馀信曹建平; 关键词：隐孢子虫卵囊实时PCR DNA 提纯

慢性腹泻患者艰难梭菌、人芽囊原虫和隐孢子虫感染的研究被引量：4: 2019年; 收集江苏大学附属医院2018年收治的慢性腹泻患者粪样,涂片镜检并提取粪样DNA,采用多重PCR技术检测粪样中艰难梭菌16S rDNA基因、毒素A(tcdA)基因、毒素B(tcdB)基因和二元毒素(cdtA和cdtB)基因;常规PCR检测人芽囊原虫SSU rRNA基因;巢式PCR检测隐孢子虫SSU rRNA基因。96份慢性腹泻患者粪样中,检出艰难梭菌16S rDNA基因64份,阳性率为66.7%;艰难梭菌阳性粪样中,tcdA基因24例,tcdB基因18例,未检出单独携带tcdB基因粪样,产毒株携带率为37.5%,所有粪样中均未检出cdtA基因和cdtB基因;镜检结果显示,人芽囊原虫粪样16份,检出率为16.7%;PCR结果显示,21份粪样扩增出人芽囊原虫SSU rRNA基因,检出率为21.9%,镜检阳性粪样PCR检测也为阳性;未检测到艰难梭菌和人芽囊原虫混合感染;未检出隐孢子虫SSU rRNA基因。江苏大学附属医院慢性腹泻患者中主要检出的病原体为艰难梭菌和人芽囊原虫。; 周亚玲吴亮阴晴吴瑶何蕾邹治情戴晓玥夏雯; 关键词：慢性腹泻艰难梭菌人芽囊原虫隐孢子虫

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