张小慧
- 作品数：15 被引量：109H指数：6
- 供职机构：中南大学湘雅医学院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胚胎不同器官的细胞连接蛋白基因表达研究被引量：1
- 1999年
- 目的探索胚胎不同分化阶段、不同器官中细胞连接蛋白基因的表达规律及其与细胞分化的关系。方法采用Ｃｏｎｎｅｘｉｎ系列基因探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法，对不同胎龄的不同胚胎器官中Ｃｘ基因表达状态进行了研究。结果（１）胚胎期肝、胃、肺、肾等器官中Ｃｘ３１、Ｃｘ４６、Ｃｘ３１．１不表达。（２）胚胎不同发育阶段连接蛋白基因呈不同表达状态。如Ｃｘ２６、Ｃｘ４３在３个月胎龄的肝脏中高度表达、Ｃｘ３２从第５周至第５月都呈高度表达；（３）连接蛋白基因表达有器官差异性，肝Ｃｘ３２、胃Ｃｘ３７、肺Ｃｘ４０和肾Ｃｘ４３基因高度表达。（４）连接蛋白基因在各器官中表达又有交叉性，Ｃｘ２６在上述肝、胃、肾等器官中呈不同表达状态。（５）细胞连接蛋白基因的表达状态与组织细胞的分化基本一致。结论它们可能是调节胚胎组织分化。
- 张建湘李桂源张小慧
- 关键词：连接蛋白基因表达胚胎
- 不同妊娠时期人胎盘绒毛细胞连接蛋白基因表达的研究
- 2000年
- 目的 探索妊娠不同时期人胎盘绒毛细胞连接蛋白基因表达的规律及其与细胞分化的关系。 方法 采用多种细胞连接蛋白基因 c DNA探针 ,通过 Northern印迹法 ,研究了不同妊娠时期胎盘绒毛细胞内 Cx基因的表达状态。 结果 1.Cx基因表达有器官特异性 ,绒毛细胞中 Cx43、Cx32及 Cx40表达 ,而 Cx31.1、Cx33、Cx37、Cx46不表达 ;2 .在不同发育阶段的胎盘绒毛中 ,Cx43、Cx32、Cx40的表达水平与周龄呈各自特点的曲线关系 ;3.Cx基因的表达与绒毛细胞的分化及绒毛的形成过程基本一致。 结论 某些 Cx基因在调节绒毛细胞分化。
- 张小慧张建湘祝继明李桂源
- 关键词：连接蛋白基因基因表达妊娠期胎盘绒毛细胞
- 9p21-22区域鼻咽癌候选抑瘤基因的克隆及其功能的初步研究
- 染色体9p21-22区域高频率的等位基因杂合性丢失（Loss of Heterozygosity,LOH）是肺癌、乳腺癌、膀胱癌和鼻咽癌等多种肿瘤中的常见事件。David Sidransky 等检测了大量原发性非浸润型和...
- 阳剑波宾亮华李忠花张小慧李江钱骏张必成周鸣谢奕李桂源
- 关键词：鼻咽癌杂合性丢失抑瘤基因克隆
- 文献传递
- 鼻咽上皮组织定向cDNA文库的快速构建被引量：7
- 2001年
- 目的 采用SMART (switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)技术 ,快速构建了高质量的成人鼻咽上皮组织定向cDNA文库。方法 从成人正常鼻咽上皮组织分离总RNA ,利用经修饰的oligo(dT)引物 (含sfiIB酶切位点 )合成cDNA第一链 ,同时根据真核生物mRNA 5′端帽子结构特点 ,利用SMART核苷酸 (含sfiIA酶切位点 )作为cDNA第二链在mRNA 5′端延伸出去的模板 ,进而以此序列为引物利用LD PCR(Long distance PCR)合成双链cDNA ,双链cDNA经sfiI(IA&IB)酶切和过柱分级分离后 ,克隆入经sfiI酶切的λTripIEX2载体后经体外包装而成cDNA文库。结果 获得 1.5× 10 6个重组子 ,重组率达 10 0 %。文库扩增后 ,滴度达 3.8× 10 9pfu/ml,插入cDNA平均长度为 1.5kb。结论构建的成人鼻咽cDNA文库具有良好的质量 ,该cDNA文库为进一步筛选。
- 张必成余鹰邱元正钱骏周鸣李忠花张小慧向娟娟朱诗国李桂源
- 关键词：鼻咽肿瘤DNA重组基因文库遗传学技术CDNASMART
- 染色体7q32-ter鼻咽癌相关基因的初步研究被引量：6
- 2001年
- 为克隆 7q32 ter区域等位基因杂合性丢失最小共同缺失区的鼻咽癌相关基因 .以STSD7S5 0 9为探针 ,PCR法筛选位于该区的细菌人工染色体 (BAC)克隆 ,应用EST介导的定位 候选克隆策略并结合生物信息学筛选出在鼻咽癌细胞株和活检组织中表达增强的ESTAA7734 5 4,cDNA克隆测序和生物信息学资源获取全长cDNA ,DNA印迹和甲基化分析研究其表达增强的机制 .结果表明 ,克隆的NAG18基因cDNA全长 80 2bp ,编码 2 2 7个氨基酸 ,定位于胞核 .该基因分别与人、鼠TAXREB10 7基因及RPL6基因高度同源 .其表达增强的机制不是基因拷贝数的丢失和甲基化位点的改变 .可以断定NAG18是定位于 7q32 ter最小共同缺失区的鼻咽癌相关基因 ,它是一高度保守的基因 。
- 张小慧李忠花张必成董利周鸣曹利唐珂李伟芳李桂源
- 关键词：鼻咽癌相关基因染色体
- NAG14基因结构域蛋白的原核表达被引量：1
- 2002年
- 董利王洁如钱骏张小慧谭琛聂新民李桂源
- 关键词：基因表达融合蛋白
- 染色体7q32-ter最小共同缺失区鼻咽癌抑瘤基因候选者的筛选被引量：4
- 2000年
- 目的：在明确 7q32- ter区域等位基因杂合性丢失最小共同缺失区位于以 D7S509为中心的 D7S500- D7S509- D7S495的基础上，筛选和克隆位于该区内鼻咽癌相关的候选抑瘤基因。方法：应用定位—候选克隆策略筛选位于该最小共同缺失区的 3′末端 ESTs(expressed sequence tags,ESTs),RT- PCR和 Northern杂交筛选出在鼻咽癌细胞株和活检组织中表达下调的 ESTs,采用 cDNA克隆测序和生物信息学资源获取候选 EST的全长 cDNA。 Southern杂交和甲基化分析研究候选基因表达下调的机制。结果：筛选 D7S500- D7S495区域内的 12个代表新基因的 3′末端 ESTs序列，发现一个 EST（ AI290024）在鼻咽癌细胞株及 50％（ 6/12）的鼻咽癌活检组织中表达下调， Multiple Tissue Northern(MTNTM) Blot杂交结果显示该 EST在心、肝、肾等多种组织中存在大小 2.0 kb的转录本。通过测定包含该 EST的 cDNA克隆，获得该新基因（命名为 NAG- 22基因） 2.3 kb转录本的全长 cDNA(GenBank登录号： AF247820),编码 77AA，含有 disintegrin的结构域。 NAG22在 NPC中表达下调的机制不是高甲基化和基因拷贝数的丢失。结论： NAG22是定位于 7q32- ter最小共同缺失区的一个与鼻咽癌相关的抑瘤基因候选者。
- 张小慧钱骏王洁如董利曹利周鸣唐珂李伟芳李桂源
- 关键词：鼻咽肿瘤
- 精细定位和克隆9p21-22区域内鼻咽癌候选抑瘤基因被引量：48
- 2000年
- 目的：进一步精细限定鼻咽癌９ｐ２１－２２区域等位基因杂合性丢失的频率和范围，筛选和克隆其共同缺失区内鼻咽癌相关的候选抑瘤基因。方法：应用１１个定位于 ９ｐ２１－２２区域的高密度微卫星位点，检测 ２５例低分化鼻咽癌患者的杂合性丢失，确定其共同缺失区；用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ筛出在鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１和鼻咽癌活检组织中表达下调的、定位于共同缺失区内的 ３’末端ＥＳＴｓ（Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｔａｇｓ）；采用 ＲＡＣＥ技术和生物信息学资源克隆出候选ＥＳＴ的全长ｃＤＮＡ。结果： ２５例患者中有１７例（６８％）存在一个或多个位点的杂合性丢失，其中Ｄ９ｓ１６１（３５．０％，７／２０），Ｄ９Ｓ１６７８（３１．５％，６／１９），Ｄ９Ｓ２６３（３．３％，６／１８）和Ｄ９Ｓ１８５３（３３．３％，７／２１）四个紧邻位点的丢失频率相对较高，并发现六位患者在该四个位点表现为连续性缺失；筛选Ｄ９Ｓ１６１－Ｄ９Ｓ１８５３区域内２５个代表新基因的３’末端ＥＳＴｓ序列，发现一个ＥＳＴ（ｄｂＥＳＴ：２０８８２５）在鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１及７３％（１１／１５）的活检组织中表达降低， Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔ
- 阳剑波宾亮华李忠花张小慧钱骏张必成周鸣谢奕邓龙文李桂源
- 关键词：鼻咽肿瘤染色体杂合性丢失克隆
- 基因组生物信息学在大规模测序中的应用被引量：3
- 2000年
- 大规模自动测序技术的迅猛发展使人类基因组计划 (Human Genome Project,HGP)取得了巨大进展 ,近来兴起的基因组信息学在 HGP的研究方面显示出巨大潜能。文章着重介绍了生物信息学的成就及在测序成就中的作用 ,目的在于阐明基因组生物信息学与大规模测序技术结合将是 HGP的发展趋势。
- 张小慧李桂源
- 关键词：人类基因组计划大规模测序
- 一个定位于7q31-32的鼻咽癌负相关新基因的初步研究被引量：6
- 2001年
- 目的：克隆染色体7q31-32区域D7S495附近鼻咽癌相关的候选抑瘤基因，并研究其在鼻咽癌发生发展中的作用。方法：应用定位－候选克隆策略结合生物信息学手段筛选鼻咽癌负相关的EST(Expressed Sequence Tags)，cDNA克隆测序和5′RACE扩增获取候选EST的cDNA序列。Northern杂交和RT-PCR检测其组织表达谱及其在正常人胚鼻咽上皮与鼻咽癌细胞株和活检组织中的表达差异。Southern杂交和甲基化分析表达差异的机制。结果：克隆到一个位于7q31-32的与鼻咽癌负相关的新基因(GenBank登录号：AF196976，命名为NAG-14)，该基因编码649AA，含有LRR和IgC2结构域。Multiple Tissue Northern(MTNTM) Blot杂交结果显示该基因在脑组织中表达较强，而在心、肝、肾、肺、脾、骨骼肌和胎盘等多种组织中检测不到表达。RT-PCR检测发现其在鼻咽癌细胞株和75％活检组织表达缺失或下调，Southern 和甲基化分析表明其在鼻咽癌细胞株中某些位点发生甲基化修饰，鼻咽癌活检组织中存在遗传物质丢失。结论：NAG_14可能是定位于7q31-32的一个与鼻咽癌相关的抑瘤基因候选者。
- 王洁如宾亮华钱骏张小慧向娟娟唐珂李伟芳李桂源
- 关键词：鼻咽癌
