汤慕瑾
- 作品数：12 被引量：79H指数：6
- 供职机构：中山大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学化学工程更多>>
- 利用转座子Tn917构建杀虫Bt工程菌被引量：15
- 1999年
- 利用链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）的转座子Ｔｎ９１７衍生载体ｐＴＶ１Ｔｓ将苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ，Ｂｔ）的２个杀虫晶体蛋白（ＩＣＰｓ）基因整合进Ｂｔ染色体上，转座频率达５９×１０－５．将对双翅目昆虫有毒效的ＩＣＰｓ基因ｃｒｙ１１Ａ和广谱溶细胞且对蚊子等有毒效的ｃｙｔ１Ａ基因分别克隆到ｐＴＶ１Ｔｓ上，用高压电激法转入对鳞翅目昆虫有毒效的库斯塔克亚种（Ｂｔｓｕｂｓｐｋｕｒｓｔａｋｉ）ＨＤ１菌株，分别筛选到在染色体基因组上整合进这２个基因的突变株ＨＴ２６和ＨＴ４５，整合基因均能在这２株工程菌中获得表达并形成正常的伴孢晶体．生物测定结果显示，表达的Ｃｒｙ１１Ａ和Ｃｙｔ１Ａ晶体蛋白有很高的杀虫活性，对库蚊三龄幼虫的ＬＣ５０分别为８３ｎｇ／ｍＬ和６４ｎｇ／ｍＬ，同时Ｃｙｔ１Ａ晶体蛋白对培养的昆虫细胞有较强的溶解作用．
- 余健秀庞义李建华余榕捷汤慕瑾
- 关键词：苏云金杆菌杀虫剂
- 苏云金杆菌毒力的生物测定被引量：10
- 2000年
- 本文对苏云金杆菌（Ｂｔ）制剂的生物测定标准化及目前采用的生物测定方法作一较详细的介绍。其中对鳞翅目幼虫的生物测定包括混合饲食法、浸叶饲喂法、蜡洞法、液滴法；对双翅目幼虫的生物测定则有世界卫生组织提出的方法和美国国内标准方法；对路翅目幼虫目前还没有一个统一的标准方法。生化和免疫测定法比传统的生物测定方法快速、简便，但亦存在不足。
- 汤慕瑾余健秀刘静宇庞义
- 关键词：生物测定方法鳞翅目幼虫饲喂法苏云金杆菌(BT)毒力免疫测定法
- 全文增补中
- 苏云金杆菌辅助蛋白基因p19和orf1-orf2对杀虫晶体蛋白Cyt1 Aa表达的影响(英文)
- 2003年
- 为检测苏云金杆菌辅助蛋白P19和ORF1 ORF2对杀虫晶体蛋白Cyt1Aa表达的影响 ,构建了 5个重组表达质粒。 5个质粒都含有cyt1Aa基因 ,但pT1只含有cyt1Aa基因 ,pT2同时含有p19基因 ,pT3同时含有orf1 orf2串联基因 ,pT4同时含有p19基因和p2 0基因 ,pT5同时含有orf1 orf2串联基因和p2 0基因。将这 5个表达质粒和质粒pWF4 5电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型 4Q7中 ,分别获得转化菌株Bt T1、Bt T2、Bt T3、Bt T4、Bt T5和Bt WF4 5。SDS PAGE结果显示 ,菌株Bt T1、Bt T2和Bt T3只产生少量的 2 7kDCyt1Aa蛋白 ,而且部分降解为大约 2 4kD的蛋白。而Bt T4和Bt T5能产生大量的Cyt1Aa蛋白 ,但Bt T4和Bt T5的Cyt1Aa蛋白产量都明显少于Bt WF4 5。电镜观察和生物测定结果表明Bt T4和Bt T5与Bt WF4 5的晶体大小和杀蚊毒力没有显著性差异。研究表明P19和ORF1 ORF2对Cyt1Aa蛋白的合成显示可能有抑制作用。
- 汤慕瑾曾少灵陈建武师永霞徐炜袁美妗庞义
- 关键词：苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白
- 苏云金杆菌小试生产发酵影响因子的研究被引量：12
- 2002年
- 利用 1 0L全自动发酵罐对苏云金杆菌小试生产的发酵条件进行了研究。结果显示 ,不同的温度、pH值、培养基成分及接种方式对发酵产量和发酵周期均有影响 ;在培养基配方中存在葡萄糖时 ,葡萄糖单独灭菌对提高苏云金杆菌发酵产量是重要的。初步生物测定显示 ,发酵上清中存在一些杀虫增效因子 ,建议配制苏云金杆菌制剂时尽可能加以利用。
- 余健秀汤慕瑾徐建敏庞义
- 关键词：苏云金杆菌发酵微生物杀虫剂PH值接种方式培养基
- 苏云金杆菌辅助蛋白P20对杀虫晶体蛋白Cry1Ab表达的影响被引量：5
- 2003年
- 苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,简称Bt)杀虫晶体蛋白Cry1Ab因其C 半端缺少了一段含 4个半胱氨酸的氨基酸序列而导致蛋白的不稳定 ,报道苏云金杆菌辅助蛋白P2 0帮助Cry1Ab蛋白的表达及晶体的形成。利用穿梭载体pHT310 1构建 3个表达质粒 ,即pT1B、pP1B和pDP1B ,3个质粒都含有cry1Ab基因 ,不同在于pT1B没有p2 0基因 ,pP1B含有p2 0全基因 ,而pDP1B不仅含有p2 0全基因 ,且在p2 0基因前插入cry1A(c)启动子。分别将这 3个表达质粒经电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型菌株CryB中 ,获得转化菌株T1B、P1B和DP1B。Westernblot表明cry1Ab基因在这 3株菌中均表达了 130kD的蛋白 ,部分降解为大约 6 0kD的蛋白。蛋白定量分析显示 ,3株菌 130kD蛋白量的比为 1∶1.4∶1 5 ,降解后的 6 0kD蛋白量的比为 1∶1.1∶1.6 ,Cry1Ab蛋白总量的比为 1∶1∶2∶1 6。镜检发现 ,Cry1Ab在 3株菌中都形成典型的菱形晶体 ,其晶体大小为T1B
- 汤慕瑾袁美妗陈建武师永霞曾少灵余健秀庞义
- 关键词：苏云金杆菌辅助蛋白杀虫晶体蛋白CRYLAB生物杀虫剂
- 苏云金芽孢杆菌cyt1 Aa基因在拟步甲亚种菌株中的表达及重组菌株杀虫活性研究被引量：1
- 2007年
- 将含苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis,简称Bti)cyt1Aa基因的质粒电激转化至对鞘翅目害虫有专一活性的Bt拟步甲亚种(Bacillus thuringiensis subsp.tenebrionis,简称Btt)菌株中进行表达,获得重组菌株Btt-WF45。对表达产物进行SDS-PAGE分析,显示Cyt1Aa蛋白获得了大量表达。生物测定结果表明,Btt-WF45对鞘翅目小圆叶甲(Plagiodera Redtenbacher)幼虫没有毒力,对致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)的毒力比对照菌株4Q7-WF45高0.33倍,对白纹伊蚊(Aedes albopictus)的毒力比4Q7-WF45高0.63倍。由于在重组菌株Btt-WF45中Cry3A蛋白的表达量太低,所以在该结果中未能显示Cyt1Aa蛋白与Cry3A蛋白是否存在协同增效作用。
- 袁美妗汤慕瑾师永霞王莉庞义
- 关键词：苏云金杆菌AA杀虫活性
- 利用突变技术研究苏云金杆菌杀虫晶体蛋白的进展被引量：7
- 2001年
- 本文综述了近年来利用突变技术研究苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白(Insecticidalcrystalproteins ,ICP)杀虫作用机制所取得的进展。其中结构域Ⅰ参与不可逆结合及影响离子通道的形成 ;结构域Ⅱ参与与受体的结合 ,包括可逆结合和不可逆结合 ;结构域Ⅲ保持三维结构稳定 ,同时可能参与结合受体的过程 ,插膜以及离子通道调节。
- 汤慕瑾余健秀李建华庞义
- 关键词：苏云金杆菌杀虫晶体蛋白结构域点突变
- 苏云金杆菌Cyt类杀虫晶体蛋白及其特征被引量：10
- 2002年
- 本文综述了国内外有关苏云金杆菌Cyt类杀虫晶体蛋白的分类、杀虫特性、作用机理 ;具有分子伴侣功能的 2 0kDa蛋白对cyt基因在大肠杆菌和苏云金杆菌中的表达的影响 ;
- 刘静宇余健秀汤慕瑾庞义
- 关键词：苏云金杆菌抗性
- 苏云金芽胞杆菌辅助蛋白基因的克隆、表达及其功能研究
- 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)产生的杀虫晶体蛋白(insecticidal crystal proteins,ICPs)在细胞生长的稳定期积聚成伴胞晶体,形成伴胞晶体的量达到细胞干重...
- 汤慕瑾
- 关键词：苏云金杆菌辅助蛋白杀虫晶体蛋白BT基因
- 文献传递
- 苏云金杆菌vip3 A基因的克隆、表达及杀虫活性分析被引量：16
- 2002年
- 用全长PCR方法从野生型苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)菌株S184中克隆了 2 3kb大小的vip3A基因并进行了序列分析。将vip3A S184基因插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP ,转化大肠杆菌M15 ,转化子经 1mmol LIPTG诱导后可表达 89kD大小的Vip3A S184蛋白 ,并得到Westernblot证实。蛋白可溶性试验表明 ,目的蛋白中约有 19%是可溶的 ,用透射电镜观察到大多数蛋白是以包涵体形式存在的。因此 ,可以在自然条件下进行目的蛋白的纯化和对家兔进行免疫制备多克隆抗体 ,用于苏云金杆菌Vip3A蛋白表达的检测。利用IPTG进行诱导培养的菌液对甜菜夜蛾 (Spodopteraexigua)、斜纹夜蛾 (S .litura)和棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)等 3种害虫的初孵幼虫进行生物测定 ,结果表明 ,Vip3A
- 陈建武唐丽霞汤慕瑾师永霞庞义
- 关键词：苏云金杆菌基因克隆抗体
