田威
- 作品数：33 被引量：65H指数：4
- 供职机构：沈阳药科大学生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：国家科技基础条件平台建设计划沈阳市科学技术计划项目辽宁省普通高等教育本科教学改革研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程自然科学总论更多>>
- 钩端螺旋体层粘连蛋白结合蛋白Lsa20的表达与功能分析
- 2015年
- 目的:表达并纯化可溶性重组钩端螺旋体层粘连蛋白结合蛋白Lsa20,并对其与层粘连蛋白(LN)相互作用的生物特性进行分析。方法:优化合成Lsa20基因,连接到表达载体p ET28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,然后利用Ni-NTA亲和介质纯化目标蛋白,重组蛋白经超滤浓缩后,进行相关ELISA、流式细胞术、间接免疫荧光实验。结果:构建了重组蛋白表达菌株,目标蛋白呈可溶性表达,纯化后纯度达90%以上;ELISA证实重组Lsa20与LN有较强的亲和力,测得解离常数为(27.23±2.53)nmol/L;流式细胞术及间接免疫荧光实验结果表明重组Lsa20可黏附到COS-7细胞表面。结论:重组Lsa20在体外能够与层粘连蛋白结合,具有同天然蛋白类似的生物学特性。同时,以Lsa20与LN相互作用实验为例,建立了研究LN结合蛋白生物功能的基本方案,为后续鉴定和研究新的LN结合蛋白的作用规律及黏附机制奠定了良好的实验基础。
- 魏颖袁盛凌姚雪晶陶好霞王令春刘纯杰田威王艳春
- 关键词：原核表达层粘连蛋白相互作用
- 人铜锌超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的融合表达与纯化
- 2018年
- 目的:在大肠杆菌中表达并纯化人铜锌超氧化物歧化酶(HuSOD1)。方法:合成HuSOD1编码基因,PCR扩增后连入pMAL-p5x质粒构建融合表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,IPTG诱导表达,NBT法测定HuSOD1酶活,利用麦芽糖结合蛋白亲和层析柱纯化MBP-HuSOD1融合蛋白,经因子Ⅹa酶切及分子筛柱层析纯化HuSOD1蛋白。结果:构建了pMAL-p5x-HuSOD1表达载体,在大肠杆菌中实现了高表达,目的蛋白占全菌蛋白的30%,其中可溶性表达占63%,具有超氧化物歧化酶活性;通过亲和层析纯化得到纯度大于95%的融合蛋白MBP-HuSOD1,经因子Ⅹa酶切后纯化得到纯度约90%的HuSOD1蛋白。结论:在大肠杆菌中表达并纯化获得有活性的MBP-HuSOD1,经进一步酶切、纯化后得到HuSOD1。
- 刘晓阳刘凌志李彤李彤张惟材田威熊向华
- 关键词：麦芽糖结合蛋白纯化
- 菌株Streptomyces capillispiralis 1070代谢产物的抗肿瘤机制被引量：3
- 2009年
- 目的考察菌株Streptomyces capillispiralis 1070的代谢产物抑制肿瘤细胞A549增殖的作用机制。方法采用MTT法考察菌株Streptomyces capillispiralis 1070的活性代谢产物对A549细胞增殖的抑制作用,采用吖啶橙活细胞染色荧光显微镜观察法、罗丹明123活细胞染色流式细胞检测技术及扫描电镜技术、透射电镜技术观察A549细胞增殖受到抑制后的各种变化。采用全波长扫描与Molish反应对活性物质的成分做初步判断。结果该活性物质可使A549细胞存活率降低至25.79%,可使A549细胞线粒体膜电位明显下降,能使A549细胞胞浆内出现酸性自噬泡,但细胞膜结构完整、无细胞内容物外漏。结论推测该活性物质是通过诱导细胞自噬而发挥其抗肿瘤作用。菌株Streptomyces capillispiralis 1070的活性代谢产物为多糖类物质。
- 彭珧杨静玉吴春福田威张怡轩
- 关键词：STREPTOMYCESA549细胞自噬抗肿瘤
- 活跃链霉菌nshA基因失活对那西肽发酵的影响被引量：1
- 2012年
- 目的通过对活跃链霉菌那西肽生物合成基因簇中的nshA基因进行内部片段缺失,考察其对那西肽生物合成的影响。方法利用重叠延伸PCR(Gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)的方法失活nshA基因,并构建具有接合转移功能的大肠杆菌-链霉菌重组质粒pSH03,通过接合转移将重组质粒pSH03导入到活跃链霉菌细胞内,并通过同源交换形成活跃链霉菌基因组上的nshA基因失活。采用摇瓶进行发酵,采用HPLC的方法检测发酵液中诺西肽的含量。结果重组菌株的那西肽发酵产量较对照菌株有明显提高。结论 nshA基因对那西肽的生物合成有负调节作用,该基因的失活,有利于那西肽生物合成酶结构基因的表达,使诺西肽的产量有明显提高。
- 田晓垚李丹陈光田威何建勇
- 关键词：那西肽基因工程菌
- 安普霉素生物合成途径的研究被引量：12
- 2002年
- 安普霉素产生菌黑暗链霉菌 (S.tenebrarius) 1- 16经亚硝酸胍 (NTG)、硫酸二乙酯 (DES)诱变筛选获得了生物合成阻断变株。微生物转化实验结果表明 2 -脱氧链霉胺 (2 - DOS)、巴龙霉胺和安普霉胺是安普霉素生物合成的中间体。阻断变株共合成实验结果明确了各阻断变株阻断位点间的关系及上述中间体在安普霉素生物合成中的衍生次序。依据以上实验结果 ,我们提出了安普霉素可能的生物合成途径。
- 李相丰何建勇田威韩果红白秀峰
- 关键词：安普霉素生物合成途径抗生素微生物转化
- 红球菌g26中C_(17)位脱氢酶的克隆表达及生物转化
- 2021年
- 目的对红球菌g26中的短链脱氢酶基因进行克隆表达并考察其能否将甾体化合物雄甾-4-烯-3.17-二酮(androst-4-ene-3,17-dione,AD) C17位羰基还原为羟基。方法通过检索数据库获得红球菌g26中的两个短链脱氢酶基因,应用PCR、重组表达载体的构建等生物技术在大肠杆菌中进行外源表达,破碎细胞后应用SDS-PAGE对可溶性蛋白进行分析,筛选出合适的目的蛋白诱导条件,进而进行酶的体外转化反应,应用薄层色谱分析、高效液相分析和质谱法鉴定产物结构。结果与结论红球菌g26中的短链脱氢酶可以转化甾体化合物AD为睾丸酮(TS)。红球菌g26内的短链脱氢酶参与了甾体化合物C17位羰基到羟基的还原反应。
- 顾飞飞张诗雯田威
- 关键词：红球菌属生物转化甾体化合物
- 1株土壤放线菌的分类鉴定及其抗菌活性的研究被引量：3
- 2010年
- 对从土壤微生物中筛选到的放线菌菌株1356进行分类学和抗菌活性的研究。采用多相分类法,对菌株的形态特征、培养特征、生理生化特性及16 SrRNA基因序列进行了研究。结果表明:该菌株的形态特征、培养特征、生理生化特性为链霉菌属的特征;16S rDNA序列分析及系统进化树分析表明其序列与灰色产色链霉菌的同源性最高;该菌株的发酵产物对番茄叶霉、白色念珠菌、小麦根腐菌等17种真菌均有不同程度的抑制作用。放线菌1356菌株具有广谱抗真菌活性而对细菌无作用;初步确定其为链霉菌属灰色产色链霉菌的一个亚种。
- 陈雪婷郭婷婷田威何建勇
- 关键词：放线菌菌株鉴定RDNA真菌
- 棒状链霉菌中lat基因的置换与克拉维酸的选择性生产被引量：3
- 2005年
- 目的提高棒状链霉菌的克拉维酸生产能力 ,去除副产物头霉素C。方法将安普霉素抗性基因片段插入到 4 7kb的lat pcbAB基因片段中 ,采用接合转移方法对棒状链霉菌中头霉素C生物合成的关键基因lat基因进行了置换。结果与结论经PCR验证 ,染色体上正常的lat pcbAB基因被插入失活的基因所替代。对重组菌株的发酵产物进行HPLC检测 ,发现所有的重组菌株均不再合成头霉素C ,并且重组菌株C35 85 lat ::apr、C2 5 1 lat::apr和C16 6 lat::apr的克拉维酸产量较出发菌株分别提高了 2 6 7 6 8%、4 3 6 9%和 35 0 5 %。结果表明基因插入失活是去除多余组分 。
- 舒杨何建勇田威张怡轩张寒丽
- 关键词：棒状链霉菌基因置换高效液相色谱法克拉维酸
- 发酵与分离工程实验教学改革的探索与实践
- 2021年
- 发酵与分离工程实验教学中存在大型生产实验无法开展、实验演示操作学生看不清楚的问题。为了解决这些教学问题,一方面通过加强实验课程资源建设,建立了生产工艺虚拟仿真实验、实验操作与讲解视频等教学资源。另一方面,改进实验教学方法,将教师讲授式教学改为翻转课堂式教学。教改后学生预习效果、实验操作标准程度、实验理解和综合运用能力明显提高。因此,通过制作虚拟仿真、实验操作视频等教学资源供学生自学,结合翻转课堂式教学能够明显提高学生的学习效果,是一种值得推广的实验教学方法。
- 倪现朴陈光田威李丹张怡轩夏焕章
- 关键词：教学方法
- 新金分枝杆菌3β-脱氢酶(3β-HSD)的多基因控制机制被引量：2
- 2019年
- 目的分枝杆菌中类固醇3β位脱氢酶(3β-HSD)及其同工酶是植物甾醇降解过程中的关键限速步骤,本文作者在基因水平上确证其组成和生物学功能。方法以结核分枝杆菌中功能明确的Rv1106c基因序列为模板在新金分枝杆菌基因组中进行序列比对,对基因片段进行体外表达验证其活性,再通过基因敲除验证其在类固醇代谢中的生理功能。结果在新金分枝杆菌基因组中筛选获得4条类固醇3位脱氢酶基因同源序列,具有3β羟基氧化功能,敲除突变菌株对植物甾醇代谢只减慢约10%。结论证实了新金分枝杆菌中有多个3β位脱氢酶基因参与类固醇的代谢。
- 李园园田威邹雷董娜常尊学
- 关键词：基因敲除
