何建勇
- 作品数：69 被引量：230H指数：8
- 供职机构：沈阳药科大学生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术理学更多>>
- 1株土壤放线菌的分类鉴定及其抗菌活性的研究被引量：3
- 2010年
- 对从土壤微生物中筛选到的放线菌菌株1356进行分类学和抗菌活性的研究。采用多相分类法,对菌株的形态特征、培养特征、生理生化特性及16 SrRNA基因序列进行了研究。结果表明:该菌株的形态特征、培养特征、生理生化特性为链霉菌属的特征;16S rDNA序列分析及系统进化树分析表明其序列与灰色产色链霉菌的同源性最高;该菌株的发酵产物对番茄叶霉、白色念珠菌、小麦根腐菌等17种真菌均有不同程度的抑制作用。放线菌1356菌株具有广谱抗真菌活性而对细菌无作用;初步确定其为链霉菌属灰色产色链霉菌的一个亚种。
- 陈雪婷郭婷婷田威何建勇
- 关键词：放线菌菌株鉴定RDNA真菌
- 平滑青霉或者疣孢漆斑菌及用其制备人参皂苷F<Sub>1</Sub>的方法
- 本发明公开了生物转化制备人参皂苷F<Sub>1</Sub>的两个菌株和用其改变三醇型人参皂苷糖基制备人参皂苷F<Sub>1</Sub>的方法。选取具有水解人参皂苷的活性菌株，人参皂苷F<Sub>1</Sub>采用需氧发酵...
- 张怡轩王金辉吴春福何建勇吴秀丽
- 文献传递
- 酮古龙酸菌细胞色素c基因的克隆及表达
- 2010年
- 目的:从酮古龙酸菌SCB329中分离细胞色素c(Cytc)相关基因,在大肠杆菌中进行表达并验证。方法:根据酮古龙酸菌SCB329基因组序列设计引物,通过PCR从SCB329基因组中扩增cytc基因,酶切后连接pET22b表达载体,转化至大肠杆菌DH5α后提取质粒,经PCR、质粒双酶切及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3),并对表达条件进行考察;用Chelating Sepharose珠粒对可溶性的Cytc-His融合蛋白进行纯化;经光谱扫描和血红素染色等方法对表达蛋白定性分析。结果:PCR扩增的cytc基因长513 bp;重组菌在IPTG浓度为0.025 mmol/L的条件下,于28℃诱导10 h后,SDS-PAGE分析可见表达条带,相对分子质量约为18×103;Ni柱亲和层析纯化得到目的蛋白,纯化蛋白经光谱扫描呈现Cytc特征峰,血红素染色呈现阳性结果。结论:从酮古龙酸菌SCB329中分离得到一种cytc基因,并表达纯化了融合蛋白Cytc-His,纯化蛋白呈现Cytc特性,为研究酮古龙酸菌中产酸关键酶的电子传递机制奠定了基础。
- 贾宁熊向华赵岩汪建华何建勇张惟材
- 关键词：细胞色素C电子传递
- 甲基营养菌MP688基因组完成图构建
- 2011年
- 目的:在Solexa测序建立的甲基营养菌MP688基因组精细图的基础上,构建MP688基因组完成图。方法:根据MP688基因组序列设计引物,进行常规PCR扩增,填补Scaffold内部缺口;利用BLASTN、BLAT软件分析预测6个Scaffold定位关系;通过组合PCR、长距离PCR等填充Scaffold间的物理缺口。结果:常规PCR填充Scaffold内部4个缺口;BLASTN、BLAT软件分析预测了Scaffold定位关系;组合PCR填充Scaffold间的2个物理缺口,长距离PCR填充其余4个物理缺口。结论:得到了MP688的基因组完成图,为MP688的吡咯喹啉醌生物合成途径的阐明和进一步的代谢工程育种奠定了基础。
- 智静娟熊向华何建勇汪建华何涛张惟材
- 关键词：甲基营养菌
- 一株银杏内生真菌代谢产物的初步研究被引量：7
- 2007年
- 从银杏树皮内侧分离纯化获得6种类27株内生真菌。使用TLC、HPLC、HPLC/ESI-MSn方法对上述真菌胞内代谢产物进行研究,最终发现1株真菌菌株G3B经发酵后产生银杏内酯B等成分。经形态学初步鉴定该菌株为镰孢菌属(Fusarium)真菌。
- 易大为张怡轩何建勇赵文倩吴春福
- 关键词：银杏内生真菌银杏内酯白果内酯
- 棒状链霉菌中lat基因的置换与克拉维酸的选择性生产被引量：3
- 2005年
- 目的提高棒状链霉菌的克拉维酸生产能力 ,去除副产物头霉素C。方法将安普霉素抗性基因片段插入到 4 7kb的lat pcbAB基因片段中 ,采用接合转移方法对棒状链霉菌中头霉素C生物合成的关键基因lat基因进行了置换。结果与结论经PCR验证 ,染色体上正常的lat pcbAB基因被插入失活的基因所替代。对重组菌株的发酵产物进行HPLC检测 ,发现所有的重组菌株均不再合成头霉素C ,并且重组菌株C35 85 lat ::apr、C2 5 1 lat::apr和C16 6 lat::apr的克拉维酸产量较出发菌株分别提高了 2 6 7 6 8%、4 3 6 9%和 35 0 5 %。结果表明基因插入失活是去除多余组分 。
- 舒杨何建勇田威张怡轩张寒丽
- 关键词：棒状链霉菌基因置换高效液相色谱法克拉维酸
- 氨甲酰-妥布霉素产生菌的高产菌株筛选被引量：7
- 1999年
- 以黑暗链霉菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔｅｎｅｂｒａｒｉｕｓ１６３为出发菌株，应用磁场、磁场复合吖啶橙、耐受氨甲酰妥布霉素、磁场复合耐受氨甲酰妥布霉素筛选得到５株高产菌株，经摇瓶发酵复筛后表明。
- 张怡轩白秀峰何建勇王明琳
- 关键词：妥布霉素黑暗链霉菌诱变菌株筛选
- 钩体LPS生物合成与装配途径及相关基因分析被引量：2
- 2004年
- 目的 预测问号钩体黄疸出血型赖株脂多糖 (LPS)合成、装配途径 ,并对其中几个关键基因的特征进行深入分析。方法 使用NCBI/BlastX ,ProDom/Blast ,Jpred2 ,TMHMM对问号钩体黄疸出血型赖株全基因组ORF基因所编码蛋白进行在线分析 ,并使用Bioedit,PepTool软件进行蛋白质一、二级结构分析。 结果 确定了脂质A和核心多糖生物合成基因lpxA、lpxB、lpxC、lpxD、lpxK、kdsA、kdsB、kdtA、lnt、htrB和O -抗原生物合成基因簇rfblocus等以及装配、跨膜转运中的基因rf bP、rfbX、rfc、rfaL、rfe绘制了LPS合成及装配途径示意图。并对合成和装配途径中几个关键的基因编码蛋白 (LpxA、Rfc、RfbX、RfaL)的二级结构、跨膜区域、结构域等进行了分析。结论 问号钩体黄疸出血型赖株LPS合成、装配途径与典型的革兰阴性菌 ,如大肠埃希菌K - 12相似 ,主要差异在于钩体特殊的脂肪酸代谢途径和O -抗原多糖结构。该研究为进一步探讨钩体LPS基因功能及其与致病性关系奠定基础。
- 耿燕郭晓奎张怡轩缪有刚何建勇赵国屏
- 关键词：LPS生物合成基因分析生物信息学问号钩体
- 红霉素链霉菌聚酮合成酶基因eryAIII的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的:在大肠杆菌中异源表达红霉素链霉菌聚酮合成酶eryAIII基因。方法:构建表达载体pET-m28a,PCR扩增高GC含量长片段基因eryAIII及分子伴侣GroELS的基因,并插入该载体,每个基因都能够独立启动和终止表达;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达。结果:NdeⅠ、HindⅢ分别酶切质粒pET-m28a/eryAIII-GroELS,琼脂糖凝胶电泳显示获得与预期大小相同的DNA片段;SDS-PAGE结果表明,重组大肠杆菌表达了由eryAIII编码的相对分子质量为348×103的蛋白;与GroELS共表达后,目的蛋白在上清中的表达量明显增加。结论:GroELS提高了eryAIII编码蛋白的可溶性,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础。
- 张丽华王洋何彰华刘晓洁师明磊何建勇赵志虎
- 关键词：聚酮合成酶红霉素链霉菌异源表达
- 双拷贝aveC基因对阿维菌素产量的影响
- 2008年
- 目的通过在阿维链霉菌染色体上增加aveC基因的拷贝数,提高阿维菌素"1"组分的产量。方法采用基因工程技术,在阿维链霉菌染色体DNA的bkdAB基因中插入一套aveC基因,通过同源双交换得到重组菌株,采用HPLC考察各组分的含量。结果第二套aveC基因正确地插入到基因组DNA的预定部位。然而,对重组菌株发酵产物的HPLC分析显示,阿维菌素"1"组分比例并没有明显的变化,但B1a效价却有显著提高。结论aveC基因产物的活性可能不是决定阿维菌素"1"组分比例的主要因素,但aveC基因产物的活性可能是阿维菌素生物合成的限制因素。
- 陈光张怡轩何建勇
- 关键词：阿维链霉菌阿维菌素
