胡朝阳
- 作品数：29 被引量：26H指数：2
- 供职机构：江苏大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 昆虫线性单链DNA病毒表达策略研究进展
- 2019年
- 昆虫线性单链DNA(linear single-stranded DNA,linear-ssDNA)病毒感染的昆虫种类很广泛。它们主要归属于细小病毒科(Parvoviridae)的浓核病毒亚科(Densovirinae)和二分DNA病毒科(Bidnaviridae)。近年来,随着宏基因组学方法的发展,越来越多的昆虫linear-ssDNA病毒被发现,其基因组转录模式也逐渐被解析。昆虫linear-ssDNA病毒的基因组具有双义和单义两种类型,因此,该文将阐述双义和单义两种类型基因组的表达策略特征。总结来讲,其主要是通过未剪接(unsplicing)、选择性剪接(alternative splicing)、选择性多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation)等转录方式产生多种转录本,采用选择性起始(alternative initiation)、漏扫描(leaky scanning)或移框(frameshifing)等方式表达蛋白质。现综述昆虫linearssDNA病毒的表达模式类型和研究进展,为研究其他的linear-ssDNA病毒的表达策略提供理论参考。
- 李瑞于倩胡朝阳姚勤
- 关键词：选择性剪接
- 家蚕二分浓核病毒DNA聚合酶基因启动子P97的研究
- 2013年
- 家蚕浓核病毒2型(BmDNV-2)已被正式命名为家蚕二分浓核病毒(BmBDV),该病毒致使家蚕罹患浓核病。BmBDV是目前已知唯一能够编码DNA聚合酶的ssDNA病毒,DNA聚合酶的表达对该病毒复制至关重要。使用双荧光素酶报告系统检测BmBDV DNA聚合酶基因启动子P97的活性以及病毒潜在的调控蛋白或宿主的互作蛋白对P97的调控作用。BmBDVDNA聚合酶翻译起始位点上游286 nt序列具有启动子活性,但其活性比病毒非结构蛋白NS1基因启动子P5的活性弱。共转染瞬时表达病毒的NS1蛋白使P97启动子活性降低,而病毒的结构蛋白VP则可提高P97启动子活性;宿主家蚕的转录因子Twist蛋白的表达能够提高P97启动子的活性,但其调控作用较小。
- 马瑛吕鹏张苗苗胡朝阳李国辉陈克平姚勤
- 关键词：DNA聚合酶活性
- 在枯草杆菌芽胞表面展示P74蛋白膜外肽段被引量：1
- 2012年
- 目的:对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)囊膜蛋白P74膜外肽段与枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CotC与进行融合表达,制备表面展示有P74蛋白的重组芽孢,为深入研究该重组芽孢的功能提供基础。方法:将CotC基因与BmNPV P74膜外编码序列进行融合,构建表达CotC-P74融合蛋白的重组质粒pJS700-p74。通过双交换使该重组质粒中的CotC-P74表达盒整合到枯草芽胞杆菌染色体淀粉酶基因位点,并对发生同源重组后的菌株进行筛选和PCR鉴定。结果:PCR结果表明CotC-P74成功地整合到枯草芽孢杆菌基因组上,通过作者实验室制备的P74多抗对诱导后的重组芽孢衣壳总蛋白进行Western blot分析,结果在49 kDa位置处能杂交到一条特异的蛋白带。结论:P74蛋白胞外肽段成功地展示在枯草芽胞杆菌芽胞表面。
- 李国辉王鹏唐琦胡朝阳黄国平
- 关键词：家蚕核型多角体病毒枯草芽孢杆菌芽孢
- 昆虫氨基酸转运蛋白的分类与功能
- 2021年
- 氨基酸是一类在生物体内参与蛋白质合成、细胞生长调节等生理功能的重要小分子物质,也是一些重要生理活性物质的前体。氨基酸的跨膜转运受氨基酸转运蛋白的调节,氨基酸转运蛋白通常能够转运具有相似结构的多种氨基酸。昆虫的氨基酸转运蛋白可分为8个家族,在营养吸收、物质转运、神经系统调节、信号途径调控和病毒感染等方面具有多种重要功能。本文简要综述昆虫氨基酸转运蛋白的分类和功能,为家蚕和其他昆虫的生理及病理研究提供参考。
- 胡朝阳申佳敏刘庆森李国辉陈克平姚勤
- 关键词：昆虫
- 家蚕二分浓核病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及其特异性验证
- 2018年
- 家蚕二分浓核病毒(Bm BDV) NS1蛋白是一个与病毒复制相关的多功能蛋白。为获得NS1蛋白的单克隆抗体,设计并合成了12条NS1蛋白的抗原表位肽段,分别免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,获得了18株能分泌抗体的阳性杂交瘤细胞。在大肠埃希菌中表达NS1作为抗原,通过Western blot对所获得的单克隆抗体进行验证。结果表明,由8/C278细胞株获得的单克隆抗体能特异识别重组的NS1蛋白,所用抗原表位序列为DIPPEEYRELRT。利用该抗体能检测到Bm BDV感染家蚕中肠组织中NS1蛋白的表达。该研究为深入探索NS1蛋白的功能打下了基础。
- 胡朝阳刘伟邓炎春唐培培姚勤李国辉
- 关键词：NS1蛋白单克隆抗体抗原表位
- 病毒非经典途径合成蛋白质的分子机制
- 2015年
- 病毒增殖过程涉及到病毒与宿主蛋白之间复杂的相互作用。为充分利用病毒基因组的有限资源,使病毒基因组编码的蛋白质数量最大化,除经典途径之外,病毒还可通过非经典途径来合成蛋白质。现就非经典途径中,对病毒蛋白质合成的起始、延伸以及终止过程的类型及特征进行综述,为深入研究病毒蛋白质合成的分子机制及抗病毒分子靶标的开发提供参考。
- 李国辉周倩胡朝阳唐琦邱立鹏姚勤
- 关键词：病毒基因蛋白质
- 黏蛋白2对猪流行性腹泻病毒感染的拮抗作用研究
- 2023年
- 肠黏膜屏障的完整性与猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的致病性密切相关。黏蛋白2(Mucin 2,Muc2)作为肠黏膜屏障的重要组成蛋白,在阻止病原体、毒素和异物入侵等方面发挥重要作用。本文旨在探究黏蛋白Muc2对PEDV复制的拮抗作用。通过观察PEDV感染仔猪空肠黏膜屏障情况,利用RNA干扰策略和分子病毒学检测方法在细胞水平上研究分析Muc2表达水平与PEDV复制的关系,并进一步探讨猪源Muc2天然蛋白发挥抗PEDV作用的具体阶段。结果显示:PEDV感染仔猪空肠段进行PAS染色发现,病毒感染后肠绒毛表面黏液层变薄,结构被破坏,杯状细胞明显减少;与对照组相比,干扰Muc2基因能够上调PEDV⁃N的mRNA及蛋白水平;Muc2蛋白添加后显著抑制PEDV⁃N蛋白的表达,且病毒mRNA水平显著下降(P<0.05);在病毒感染前使用50μg/mL Muc2蛋白预处理1 h后,PEDV⁃N mRNA相对表达量极显著下降(P<0.001),而在病毒吸附、入侵和复制阶段无显著差异(P>0.05),表明Muc2具有降低PEDV侵染宿主细胞的作用。综上所述,本研究验证了Muc2在PEDV感染中的拮抗作用,发现了Muc2主要作用于病毒侵染宿主细胞阶段,为深入探讨Muc2与PEDV间的作用机制奠定了基础,也为制定PEDV新防控策略提供了思路。
- 张雪张雪钱嘉莉徐红徐红宝梅英刘诗雨胡朝阳张雪寒胡朝阳张雪寒郭容利贾斌
- 关键词：猪流行性腹泻病毒MUC2肠道屏障
- 家蚕两种主要病毒的分子基础及病毒与宿主的相互作用
- 姚勤陈克平胡朝阳李国辉刘晓勇张春霞周阳申红星唐琦
- 该项目重点揭示了家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori bidensovirus, BmBDV)基因组结构、基因表达调控策略、基因功能以及家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovir...
- 关键词：
- 关键词：家蚕基因表达分子育种技术
- 家蚕二分浓核病毒VD1-ORF4基因在两类表达系统中的表达分析
- 2015年
- [目的]为获得家蚕二分浓核病毒(Bm BDV)VD1-ORF4编码的可溶性蛋白,对该序列在两类表达系统中进行表达。[方法]在原核系统中,将靶基因克隆入载体p MAL-c2X中,使麦芽糖标签序列与靶基因5’端融合,将融合后的重组质粒转化大肠杆菌BL21,进而对其进行IPTG诱导,对诱导后的表达产物进行Western blotting分析;在真核表达系统中,以笔者实验室改造的Ac-Bacmid为分子载体,通过转座,将多角体启动子控制的VD1-ORF4表达盒定点插入到载体中,在脂质体的介导下,将整合型重组杆粒转染Sf-9细胞,将转染上清感染Sf-9细胞,并对其总蛋白进行Western blotting分析。[结果]在两类表达系统中,都只鉴定到Bm BDV VD1-ORF4部分序列的表达,其融合表达产物大小都约70 kDa。[结论]获得Bm BDV VD1-ORF4截短蛋白,为其功能研究奠定基础。
- 李国辉周倩徐五胡朝阳姚勤
- 关键词：杆状病毒
- 家蚕二分浓核病毒NS1蛋白的表达及定位
- 2015年
- [目的]在Bm N细胞中表达家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori bidensovirus,Bm BDV)非结构蛋白NS1,并分析其亚细胞定位。[方法]在病毒非结构蛋白NS1基因5'端加上kozak序列、3'端融合Flag标签序列;将重组序列克隆至昆虫细胞表达载体pIBV5/His上,转染BmN细胞,通过Western blot和免疫荧光检测NS1蛋白的表达和亚细胞定位。[结果]PCR和酶切鉴定显示重组表达载体构建正确;Western blot检测到一条大小约37 kDa的特异条带,免疫荧光分析显示表达的蛋白主要定位于细胞核中。[结论]构建的真核表达质粒能在BmN细胞中稳定表达NS1蛋白,该蛋白主要定位在细胞核中。
- 张清张晓龙李国辉姚勤胡朝阳
- 关键词：亚细胞定位
