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丁峰
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1
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供职机构:
中山大学中山医学院
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发文基金:
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相关领域:
医药卫生
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余升红
中山大学中山医学院
蒋玮莹
中山大学中山医学院
王继成
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2010
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聚合酶链式反应非特异性扩增抑制因子的发现以及全血直接PCR检测G 6PD基因外显子3-4突变
2010年
目的(1)研究消除PCR反应非特异性扩增新技术。(2)研究全血直接PCR能否用于葡萄糖6-磷酸脱氢酶基因突变检测。方法(1)将新鲜全血混合基因组DNA进行PCR扩增,看全血能否抑制基因组DNA非特异性扩增,将新鲜人血清混合基因组DNA进行PCR扩增,看新鲜人血清能否抑制基因组DNA非特异性扩增。(2)将1μl全血加入PCR反应液,98℃变性后转入PCR循环,使用Taq(Fermentas)扩增G6PD基因外显子3-4,取扩增产物50μl进行DNA双向自动测序,使用ClustalX软件将测序结果与基因库中标准G6PD基因外显子3-4序列进行比对分析。结果(1)发现新鲜全血能抑制基因组DNA非特异性扩增,进一步研究发现是新鲜人血清抑制了基因组DNA非特异性扩增。(2)全血直接PCR加上DNA测序找到一例G6PD突变g.13503A>G。结论(1)新鲜人血清中存在PCR非特异性扩增抑制因子。(2)使用Taq DNA聚合酶(Fermentas)能进行全血直接PCR扩增,加上DNA测序可用于G6PD基因突变研究。
余升红
丁峰
王继成
蒋玮莹
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突变检测
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