于志丹
- 作品数：10 被引量：29H指数：4
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- 减蛋综合征病毒京911株全基因克隆及序列分析
- 设计18对PCR引物分段扩增减蛋综合征病毒(京911株)全基因序列，扩增产物克隆到pMD18-T载体并测序。用DNAMAN软件对编码核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性分析，全基因核苷酸序列同源性为97.41％，其编码主要蛋...
- 于志丹王君伟肖妙
- 关键词：鸡减蛋综合征病毒基因克隆核苷酸序列
- 减蛋综合征病毒京911株全基因克隆及序列分析
- 设计18对PCR引物分段扩增减蛋综合征病毒(京911株)全基因序列,扩增产物克隆到pMD18-T载体并测序。用DNAMAN软件对编码核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性分析,全基因核苷酸序列同源性为97.41%,其编码主要蛋...
- 于志丹王君伟肖妙
- 关键词：减蛋综合征病毒全基因
- 文献传递
- 鸭减蛋综合征抗体消长规律初步研究
- 2012年
- 减蛋综合征（Egg drop syndrome,EDS-76）是由减蛋综合征病毒（EDSV）引起的一种以产蛋鸡产薄壳或无壳蛋,产蛋率严重下降为主要特征的传染病。减蛋综合征病毒又称鸭腺病毒,一些研究表明,尽管发生疾病都是在产蛋鸡,但鸭才是EDSV的天然贮存宿主[1],
- 王晓东于志丹李鑫马波王君伟
- 关键词：减蛋综合征病毒抗体消长规律发生疾病EDSV无壳蛋
- 两株不同亚型禽流感病毒NS1基因的表达及抗原性检测被引量：4
- 2006年
- 为进一步研究禽流感病毒非结构蛋白NS1的功能及其在临床中的应用,本试验分别对H5N1、H9N2两株不同亚型禽流感病毒的NS1基因进行了原核表达及抗原性检测。实验分别用限制性内切酶EcoRI和XhoI消化不同亚型NS1基因的重组质粒pMD-18T-NS1(H9N2)和pMD-18T-NS1(H5N1),获得目的片段NS1,然后将NS1基因克隆到原核表达载体pProEXHTc中。将重组质粒pProc-NS1(H9N2、H5N1)转化DH5α感受态细胞,用1mmol/LIPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测,目的蛋白分子量大小为30ku,与预期结果相符。West-ern-blot检测表明所表达的蛋白能与NS1的多克隆抗血清反应,并且存在交叉反应。
- 孙进华于志丹曲哲会张雅为王君伟
- 关键词：禽流感病毒非结构蛋白基因表达
- A型禽流感病毒NS1蛋白的表达及其诱导细胞凋亡功能的研究被引量：6
- 2009年
- 利用瞬时表达方法表达禽流感病毒(AIV)NS1蛋白,并初步研究了体外表达的NS1蛋白对宿主细胞凋亡的影响。应用脂质体介导法,将含有不同亚型AIV NS1基因的阳性质粒pcDNA3.1(+)-qNS1(H5N1)、pcDNA3.1(+)-rNS1(H9N2)转染Vero细胞系及MDCK细胞系。经SDS-PAGE及Western-blotting检测,qNS1和rNS1基因在Vero细胞及MDCK细胞中均获得了表达。应用AO/EB荧光染色法、Annexin V-PI法分别对转染后的Vero细胞及MDCK细胞进行细胞凋亡检测,结果显示,转染阳性质粒的MDCK细胞凋亡率增高,而转染空载体pcDNA3.1(+)的MDCK细胞及转染的Vero细胞均无明显变化。表明,qNS1、rNS1蛋白在体外培养的MDCK细胞中表达并能够诱导其发生凋亡,而在Vero细胞中却不能发挥此功能。
- 孙进华马波于志丹霍慧王君伟
- 关键词：禽流感病毒NS1蛋白MDCK细胞VERO细胞真核表达
- 减蛋综合征病毒五邻体基因的原核表达及其表达蛋白的部分活性分析被引量：5
- 2010年
- 通过PCR方法扩增得到减蛋综合征病毒(EDSV)结构蛋白五邻体(Penton)基因,将其克隆到原核表达载体pET-30a(+)的多克隆位点,构建了原核表达载体pET-30a-Penton,将其转化到感受态细胞Rosetta(DE3)pLysS中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了54.0ku的融合蛋白。用纯化的融合蛋白免疫家兔制备抗血清,通过血凝试验、Western-blot、血凝抑制试验、细胞中和试验进行分析,表明该融合蛋白不能引起鸡红细胞凝集,无血凝活性;可与EDSV阳性血清发生特异性反应,能够诱导机体产生中和抗体,具有良好的抗原性。
- 杨华刘晓民于志丹马波王君伟
- 关键词：减蛋综合征病毒原核表达活性分析
- 重组鸡痘病毒rFPV-VP3-F的遗传稳定性及在鸡体内的表达被引量：1
- 2009年
- 为了评价重组禽痘病毒rFPV-VP3-F的遗传稳定性,将rFPV-VP3-F在鸡胚成纤维细胞(CEF)连续培养20代。对第5、10、15和20代病毒的F基因进行扩增及序列分析,未发现F基因发生氨基酸改变;通过间接免疫荧光方法检测各个代次rFPV-VP3-F中F基因特异表达的情况;将rFPV-VP3-F和禽痘病毒FPV017分别接种于35日龄商品鸡,在免疫后第7、14、21、28、35 d采集各组血清,检测中和抗体效价。结果显示,F基因在重组禽痘病毒中可以稳定遗传,可在CEF中表达相应蛋白,可刺激鸡产生相应的抗体。
- 李丹王君伟于志丹赵妍尚绪增鞠环宇杨雪晶
- 关键词：重组鸡痘病毒中和抗体
- 鹅细小病毒VP3基因和鹅副黏病毒F基因在重组禽痘病毒中联合表达被引量：4
- 2008年
- 将重组转移载体质粒pSY681-VP3-F-LacZ与脂质体转染禽痘病毒感染的CEF细胞,通过五轮蓝斑筛选,获得纯化的重组病毒rFPV-VP3-F。经PCR检测,表明GPV-VP3基因和GPMV-F基因已重组到特异性禽痘病毒基因组中;Dot-ELISA和间接免疫荧光试验,证明VP3蛋白和F蛋白在重组病毒感染的CEF细胞中获得有效表达并且两种蛋白都保持其反应原性。
- 于志丹王君伟孙进华藏玉婷张雅为
- 关键词：鹅细小病毒衣壳蛋白鹅副黏病毒重组禽痘病毒
- 鹅细小病毒VP3基因和鹅副粘病毒F基因在重组禽痘病毒中联合表达
- 鹅细小病毒/(goose parvovirus/)和鹅副粘病毒/(goose paramyxovirus/)分别是鹅细小病毒病和鹅源新城疫的病原。这两种病都是养鹅生产中的烈性传染病，广泛流行于世界上许多国家和地区，染病鹅...
- 于志丹
- 关键词：重组禽痘病毒鹅细小病毒衣壳蛋白鹅副粘病毒
- 文献传递
- 减蛋综合征病毒五邻体重组蛋白的原核表达及抗原性鉴定被引量：10
- 2009年
- 根据减蛋综合征病毒(EDSV)AV-127株的全基因序列(GenBank序列号AC000004)设计了1对引物,采用PCR扩增出五邻体(Penton)完整基因,将其连接到克隆载体pMD18-T,经过鉴定后测序。序列分析表明,所获得的DNA片段核苷酸序列和GenBank中AV-l27株的五邻体比较有9个碱基突变,但利用DNAstar分析,两者的氨基酸完全一致。然后酶切胶回收后将目的片段连接到质粒表达载体pET-30a(+),获得的阳性克隆命名为pET-30a-Penton。将pET-30a-Penton转化E.coli Rosetta,经37℃、1.0 mmol·L-1 IPTG诱导表达5 h,SDS-PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀,结果显示目的蛋白以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为54.0 ku。Western Blot试验结果表明目的蛋白具有较好的抗原活性。
- 肖妙于志丹马波王君伟
- 关键词：减蛋综合征病毒原核表达抗原性
