吴璇
- 作品数：9 被引量：12H指数：3
- 供职机构：贵阳医学院基础医学院多媒体形态学实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白基因克隆及表达
- 2009年
- 目的对亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)成虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4(Actin relatedprotein2/3complex subunit4)基因进行克隆、表达和免疫学研究。方法以亚洲牛带绦虫cDNA文库中肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4的已知序列设计合成一对特殊引物,进行PCR技术扩增目的基因,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,在CaCl2制备的感受态大肠埃希菌BL21/DE3中经过异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达,表达产物经过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定。由于蛋白在包涵体表达,故通过N-十二烷基肌氨酸钠(SKL)法纯化获得纯化重组蛋白并用蛋白印迹(Western-blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明,pET-28a(+)-Arp2/3重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明,基因在大肠埃希菌BL21/DE3包涵体中表达,经过包涵体沉淀的溶解、重折叠和离子交换层析方法获得高纯度蛋白。重组蛋白能识别亚洲牛带绦虫患者及牛带绦虫患者血清,表明该蛋白具有免疫反应性。结论成功克隆亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因,表达和纯化得到了该基因的重组蛋白并且证明该基因具有免疫反应性,为进一步研究该基因的功能提供条件。
- 王杰戴佳琳黄江吴璇廖兴江杜武英郎书源
- 关键词：亚洲牛带绦虫基因克隆免疫反应性
- 亚洲牛带绦虫WD40基因表达及免疫学分析
- 2008年
- 目的对亚洲牛带绦虫WD40基因进行克隆、表达和免疫学研究。方法将亚洲牛带绦虫成虫WD40基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用免疫印迹试验(Western Blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明,pET-28a(+)-WD40重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达。重组蛋白能识别感染了亚洲牛带绦虫的猪血清和患者血清,表明其具有免疫反应性。结论亚洲牛带绦虫WD40基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达,为进一步研究该蛋白的功能提供了基础依据。
- 马俊英黄江吴璇胡旭初余新炳王虎
- 关键词：亚洲牛带绦虫基因克隆原核表达
- 亚洲牛带绦虫自吞噬相关蛋白3基因克隆及表达
- 2009年
- 目的从亚洲带绦虫成虫cDNA质粒文库中识别并预测自吞噬相关蛋白（autophagy related protein3-like,APG3）基因,并将该基因进行克隆表达,为进一步研究其生物学功能提供基础依据。方法利用生物信息网站及其他分析软件包,分析该蛋白质理化特性等,并将其克隆到原核表达质粒pET-28a（＋）中,经PCR、双酶切及测序鉴定之后诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行鉴定。结果该基因全长为1 331 bp,编码区为92-1099,编码335个氨基酸,理论分子量、等电点分别为37 498.5 Da和4.71。PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a（＋）-Ta APG3重组质粒构建成功。经过尿素破包涵体法得到纯化蛋白。结论发现亚洲牛带绦虫APG3基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白。
- 戴佳琳廖兴江胡旭初徐劲余新炳吴璇黄江
- 关键词：亚洲牛带绦虫基因克隆原核表达
- 亚洲牛带绦虫Spef1-Like基因克隆、表达及纯化被引量：3
- 2009年
- 目的扩增、克隆和表达亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)Spef1-Like基因全长cDNA,并进行表达产物的纯化。方法以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含Spef1-Like基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化。结果PCR,双酶切及DNA测序见过均表明重组质粒pET-28a(+)-Spef1-Like构建成功,该基因在大肠埃希菌中以上清表达,纯化后蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3得到高效表达。结论成功克隆了亚洲牛带绦虫Spef1-Like基因,并表达和纯化了Spef1-Like蛋白,为研究Spef1-Like的功能及其疫苗等研究提供了基础依据。
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- 关键词：亚洲牛带绦虫基因克隆原核表达
- 牛带绦虫亚洲亚种乳酸脱氢酶基因的克隆表达及免疫原性分析被引量：5
- 2008年
- 目的对牛带绦虫亚洲亚种成虫乳酸脱氢酶基因(LDH)进行克隆、表达和免疫原性分析。方法将牛带绦虫亚洲亚种成虫TaLDH克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白pET-30a(+)-TaLDH用蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均显示重组质粒pET-30a(+)-TaLDH构建成功。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白,浓度为0.9mg/ml。Western blotting分析结果显示,重组蛋白pET-30a(+)-TaLDH能识别感染牛带绦虫亚洲亚种的猪血清和患者血清,在相对分子质量(Mr)35000处有一清晰条带,表明其具有免疫反应性。结论牛带绦虫亚洲亚种成虫乳酸脱氢酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达。
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- 关键词：牛带绦虫亚洲亚种克隆原核表达
- 重组亚洲牛带绦虫乳酸脱氢酶的组织定位和酶学特性研究
- 目的观察亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)重组乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,TaLDH)在成虫及虫卵的组织定位,获得其主要的酶动力学参数。方法应用免疫荧光方法,观察T...
- 吴璇戴佳琳黄江杜武英胡旭初徐劲余新炳包怀恩
- 关键词：亚洲牛带绦虫乳酸脱氢酶
- 文献传递
- 亚洲牛带绦虫成虫延伸因子-1基因的表达、纯化及免疫学分析被引量：3
- 2008年
- 目的对亚洲牛带绦虫成虫延伸因子-1(elongation factor1,EF-1)基因进行克隆、表达和免疫学初步研究。方法将亚洲牛带绦虫成虫EF-1克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,用蛋白印迹法(Western blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-28a(+)-EF-1构建成功。重组蛋白可被感染了亚洲牛带绦虫患者血清和猪血清识别,表明其具有免疫反应性。结论亚洲牛带绦虫成虫EF-1基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
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- 关键词：亚洲牛带绦虫基因克隆原核表达
- 亚洲牛带绦虫钙调神经磷酸酶B基因的原核表达和免疫学分析被引量：1
- 2008年
- 【目的】对亚洲牛带绦虫钙调神经磷酸酶B基因(CaN)进行克隆、表达和免疫学初步研究。【方法】将亚洲牛带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析。【结果】PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-30a(+)-Ta CaN构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因能在大肠杆菌BL-21/DE3中表达,经亲和层析得到了纯化重组蛋白。重组蛋白能被感染了亚洲牛带绦虫的猪和患者的血清识别。【结论】亚洲牛带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达。为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
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- 关键词：亚洲牛带绦虫基因克隆原核表达
- 亚洲牛带绦虫磷脂酰肌醇转移蛋白α基因的克隆表达和免疫学分析
- 2008年
- 目的原核克隆表达亚洲牛带绦虫成虫磷脂酰肌醇转移蛋白α基因(Ta PITPα),探索其应用前景。方法将亚洲牛带绦虫成虫PITPα克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(Western Blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-Ta PITPα重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清和感染了亚洲牛带绦虫的猪血清识别,表明其具有免疫活性。结论亚洲牛带绦虫成虫磷脂酰肌醇转移蛋白α基因可在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得具有免疫活性的高效表达,为进一步的功能研究奠定了基础。
- 吴璇黄江胡凤玉赵俊红胡旭初徐劲余新炳包怀恩
- 关键词：亚洲带绦虫原核表达
