李保文
- 作品数：43 被引量：71H指数：4
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学机械工程更多>>
- 中、美、日三国啮齿类饲料样品比较分析——24个月长期啮齿类致癌性实验的饲料选择被引量：1
- 2012年
- 目的评估饲料品质、供应风险及价格,为24个月长期致癌性试验寻找最佳的饲料及饲料供应商。方法将日本进口MF18饲料,美国进口LabDiet饲料以及北京科澳生产的啮齿类饲料样品分别包装,委托专业检测实验室对常规营养成分、毒理及微生物指标进行检测,评估饲料品质;对各来源饲料的运输风险、非可控因素等可能影响饲料品质及稳定供应的方面进行评估;兼顾饲料价格作为参考评估因素。结果经评估,3种饲料品质均符合饲料国标GB14924-2001*的要求;以毒性研究关注的毒理指标作为评价标准,则3种饲料品质排序为:MF18饲料(最佳)—>LabDiet饲料(较佳)—>科澳国产饲料(佳);进口饲料的运输及供应稳定性相比存在较大风险;国产饲料价格相对便宜但未成为关键评估因素。结论经过综合评估,特殊定制的本地国产饲料被认定为是国家药物安全评价监测中心24个月致癌性试验用的最佳饲料。
- 梁春南王三龙张海峰韩春兰沈连忠李保文汪巨峰
- 关键词：致癌性试验饲料毒性啮齿类动物
- 原代肝细胞分离培养及其作为致癌物预测体外模型应用的进展被引量：6
- 2015年
- 原代肝细胞的分离培养技术已有50余年的历史,由于原代肝细胞有体内的代谢酶和相应辅助因子,能维持肝脏的代谢功能,是研究药物代谢和致癌作用理想的体外模型。随着近10年来新技术的不断发展,尤其是三维培养技术的建立以及毒理基因组学的应用,使得体外原代肝细胞模型能用于对化合物潜在致癌性风险的预测,成为临床前药物致癌性实验的一种替代方法。本文对原代肝细胞分离、培养技术及其作为致癌物预测体外模型应用的研究进展进行综述和展望。
- 李耀庭吕建军周舒雅范昌发李保文汪巨峰黄芝瑛李波
- 关键词：毒理基因组学基因芯片
- 基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因小鼠的建立被引量：4
- 2018年
- 目的构建基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因(c-Ha-ras)的小鼠,以获得hRas基因在特定组织器官条件性表达的小鼠模型,用于药物的临床前致癌性安全评价及相关机制研究。方法首先构建hRas打靶载体,电击法转染入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用正负法筛选阳性ES细胞,通过PCR、Southern鉴定后,将正确重组hRas基因的ES细胞导入C57BL/6 J小鼠囊胚,移入同步发育的受体鼠子宫,妊娠足月出生的嵌合体小鼠与C57BL/6 J小鼠交配获得杂合子hRasfl/+小鼠。再将杂合子hRasfl/+小鼠间交配获得纯合子小鼠hRasfl/fi,然后与全身组织细胞表达Cre重组酶的Tg(EIIa-cre)小鼠进行交配,获得全身细胞表达hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,并通过荧光定量PCR方法检测不同日龄胚胎期仔鼠的hRas基因表达水平。结果成功构建了基于Cre-LoxP系统的人源hRas基因条件性定点敲入小鼠模型的载体,筛选得到的一个正确克隆,电转ES细胞后进行Southern blot鉴定,经过初筛和复筛,共获得12个阳性克隆,挑选A11号克隆ES细胞进行囊胚注射,移植了48枚胚胎,出生9只小鼠,其中6只为嵌合鼠,将嵌合率>50%的雄鼠与野生型C57BL/6 J雌鼠进行交配,出生21只后代,其中鉴定有4只hRasfl/+小鼠;hRasfl/+小鼠间交配出生29只小鼠,其中有14只纯合子hRasfl/fi小鼠;hRasfl/fl小鼠与Tg(EIIa-cre)工具鼠交配6次,未有仔鼠出生;跟踪不同发育时期胚胎中hRas基因的表达发现,E10.5~15.5 d胚胎中检测到hRas基因表达。结论成功建立运用Cre-LoxP系统建立了带有hRas基因敲入的纯合子小鼠hRasfl/fl,未能得到全身细胞高效表达人源hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,但为进一步利用hRasfl/fl小鼠模型建立其他组织特异性的条件性基因敲入小鼠模型做好技术储备。
- 刘甦苏吴曦周舒雅王辰飞左琴李保文范昌发
- 关键词：癌症
- GLP机构中的动物饲育管理
- GLP的实施水平会影响到动物实验的实施是否适当。对动物实验结果有影响的因素的恒定或设定条件的维持、控制对保证实验的重现性具有重要影响。科学的动物饲育管理,以及完善的操作记录,能够保证良好的实验质量。饲育环境的各种指标必须...
- 张琳李保文汪巨峰
- 关键词：GLP
- 利用荧光定量PCR分析c-Ha-ras基因在C57-ras转基因小鼠中的拷贝数被引量：3
- 2015年
- 目的:利用real-time PCR建立检测C57-ras转基因小鼠中外源c-Ha-ras基因拷贝数的简便方法,为药物安全性评价C57-ras转基因小鼠模型的繁殖和筛选提供数据支持。方法:以自建的人原癌基因c-Ha-ras转基因小鼠为研究对象,利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR的绝对定量法测定3个C57-ras转基因小鼠系的c-Ha-ras基因Ct值,通过与内参基因GAPDH比较计算获得转基因的拷贝数。结果:内参基因GAPDH的标准曲线为lg NGAPDH=-2.852Ct+26.236,外源基因c-Ha-ras的标准曲线为lg NRAS=-3.068Ct+39.186;经计算,NO.2、NO.3、NO.5系的F6代拷贝数分别为4、4和3,并且系内不同个体间拷贝数一致。结论:利用SYBR GreenⅠreal-time PCR技术建立了检测C57-ras转基因小鼠中外源基因拷贝数的方法,该方法操作简单,节约成本,为C57-ras致癌性模型的选留和应用提供了基础和技术手段,也为其他类似转基因品系中转基因拷贝数的确定提供了一种参考方法。
- 周舒雅刘甦苏左琴王辰飞李保文贺争鸣范昌发
- 关键词：拷贝数
- 动物笼具
- 本实用新型涉及一种动物笼具，其适用于饲养、观察或处置动物，尤其适用于在科学实验室和动物医院中饲养、观察或处置动物。所述笼具的特征在于具有一个或多个隔室，其中至少一个隔室是可以改变大小的隔室。由于具有可改变大小的隔室，该笼...
- 王三龙沈连忠李波李保文曹丽梅王佑春王秀文王雪汪巨峰
- 文献传递
- 一种EV71疫苗的体内效力评价方法及抗病毒药物筛选方法
- 本发明涉及一种EV71疫苗的体内效力评价方法及抗病毒药物筛选方法，具体涉及生物领域。更具体地，本发明建立了一个由动物模型、假病毒以及活体成像组成的敏感、安全、方便的EV71疫苗效力体内评价体系，为已有疫苗的质量控制和评价...
- 范昌发周舒雅刘强吴星陈盼吴曦王佑春毛群颖刘甦苏左琴黄维金李保文梁争论李文辉贺争鸣
- 文献传递
- 中国食品药品检定研究院新址动物设施建设过程中综合因素考虑阶段报告
- 动物实验设施的设计与建设是一个复杂的系统工程,需要各方面的共同参与.中国食品药品检定研究院新址动物设施的建设已经进入内部净化施工阶段,在完成前期的大量工作的北京下积累了一定的经验,在此与国内同行进行交流.在中检院新址动物...
- 梁春南贺争鸣李保文刘佐民姜蒙男
- 关键词：实验动物实验室布局规划
- 文献传递
- 毒性病理学大鼠和小鼠病变术语和诊断标准国际统一项目简介被引量：3
- 2013年
- 毒性病理学是药物临床前安全性评价的重要组成部分,目前诊断术语和诊断标准尚未完全统一,严重影响了不同人员和实验室间对病变的描述或对记录报告的解读,以及同行间交流和诊断水平的提高。术语和诊断标准的统一,尤其是针对大鼠和小鼠病变,已成为病理学家多年来努力的目标。本文对既往的术语统一项目,大鼠和小鼠病变术语和诊断标准的国际统一项目的组织结构和特征,整体概念和方法,包括诊断性和描述性术语、组合术语、分级系统、严重程度评分、非分级性改变、修饰语、阈值及同义词等内容进行综述。
- 吕建军范玉明林志屈哲霍桂桃杨艳伟张頔苗玉发潘东升王秀文王雪李保文汪巨峰李波
- 关键词：毒性病理学小鼠
- 模式小鼠总DNA三种提取方法比较被引量：5
- 2014年
- 目的建立简便、快捷、经济的模式小鼠总DNA提取方法,以快速鉴定大批量模式小鼠基因型。方法采用苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法提取同种模式小鼠总DNA,对比DNA纯度、得率、耗费时间,并比较基因型鉴定结果。结果苯酚抽提法得率最高,异丙醇沉淀法最低;而纯度则按照苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法顺序递减;在耗时上鼠耳煮沸法最短。三种方法提取的DNA均可做模版用于基因型鉴定。结论鼠耳煮沸法操作简单、成本最低,快速、基因型鉴定结果可靠,可用于规模化的基因型鉴定实验中。
- 刘甦苏左琴周舒雅王辰飞贺争鸣李保文范昌发
- 关键词：基因型鉴定PCR反应
