杨梅
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 脱氧氮杂胞苷诱导HepG2细胞表达主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A被引量：1
- 2009年
- 目的观察主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A（MICA）在HepG2与L02细胞株中表达的差异及脱氧氮杂胞苷（5-aza-dC）对HepG2细胞株MICA表达的影响，探讨毛细血管扩张眭共济失调突变蛋白（ATM）依赖的DNA损伤途径与5-aza-dC调节MICA表达的关系。方法同时接种并培养L02和HeDG2细胞，在同一时间点收取细胞，流式细胞仪检测细胞膜MICA蛋白表达水平；不同浓度5-aza—dC（0．1、1．0、5．0mmol／L）作用于HepG2细胞不同时间（24、48、72、96h）后，定量PCR检测MICA mRNA水平以寻找5-aza-dC最佳作用浓度和时间；ATM特异性抑制剂咖啡因或RNA干扰技术干扰ATM表达，定量PCR检测细胞mRNA水平，流式细胞术检测细胞膜MICA蛋白表达水平。结果数据比较采用Kruskal-Wallis和Mean-Whitney U方差分析。结果流式细胞结果显示，HepG2细胞高水平表达MICA，而正常肝细胞L02几乎不表达MICA；5-aza—dC处理可上调HepG2细胞MICA的表达（x^2=7．20，P〈0．05），这种上调作用可被ATM特异性阻滞剂咖啡因和ATM特异的小分子干扰RNA所阻断（U=0．00，P〈0．05）。结论MICA在正常肝细胞株中无表达，在肝癌细胞株中高表达；5-aza-dC可诱导HepG2细胞MICA的表达，其机制可能与5-aza-dC引起的ATM依赖的DNA损伤途径有关。
- 吴进峰曾贵利沈薇杨梅王峰田绿李璇胡文艳李小平任红唐开福
- 关键词：DNA损伤主要组织相容性复合物脱氧胞苷
- RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU对PKR磷酸化的调节作用被引量：1
- 2010年
- 目的研究ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子对RNA聚合酶Ⅱ转录的影响,探讨RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU对PKR磷酸化的调节作用。方法将ALU全基因序列插入pcDNA3.1(-)载体的CMV启动子(一个RNA聚合酶Ⅱ启动子)的下游,构建重组质粒pcDNA3.1-ALU;转染HEK293细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR筛选稳定表达ALU的细胞;用干扰素处理稳定表达ALU序列的细胞,Western blot法检测PKR的磷酸化水平。结果ALU全基因序列插入pcDNA3.1载体的CMV启动子直接下游,能够被RNA聚合酶Ⅱ有效转录;在稳定表达ALU的HEK293细胞中,加干扰素与未加干扰素组PKR的磷酸化水平均明显高于相应的HEK293细胞对照组。结论ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子对RNA聚合酶Ⅱ转录无明显影响,但与RNA聚合酶Ⅲ启动下转录的ALU不同,RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU失去了对干扰素的拮抗作用,反而可以通过形成双链RNA的方式激活PKR的活性。
- 杨梅沈薇吴进峰曾贵利王峰任红唐开福
- 关键词：磷酸化干扰素
- 肝癌细胞对5-氮杂-2′-脱氧胞苷的敏感性与细胞总DNA甲基化水平无关
- 2010年
- 目的比较不同肝癌细胞株对5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-dC）的敏感性，探讨肝癌细胞对5-aza—dC的敏感性是否与细胞总DNA甲基化水平有关。方法用不同剂量（0．5、5．0、10．0μmol／L）的5-aza—dC处理肝癌细胞株（HepG2、QGY7701和HepG2．2．15细胞）及正常肝细胞株L02，比较不同浓度处理前后的细胞增殖抑制率，比较10μmol／L 5-aza-dC处理前后的Caspase-3活性及细胞DNA片段化水平（5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入率），比较不同细胞总DNA甲基化水平。组间检测结果比较采用t检验。结果5-aza—dC对HepG2、QGY7701、HepG2．2．15、L02细胞的半数抑制浓度分别为0．5、0．5、4．5、11．4μmol／L，与HepG2细胞和QGY7701细胞相比，HepG2．2．15细胞和L02细胞对5aza—dC不敏感。HepG2和QGY7701细胞中Caspase-3的活性升高较L02和HepG2．2．15细胞明显（P值均〈0．05），QGY7701细胞中5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入率升高较L02细胞明显（P〈0．05）。L02、HepG2、QGY7701和HepG2．2．15细胞的DNA总甲基化水平分别为11．7％±0．9％、10．9％±1．3％、11．7％±1．7％和12．2％±1．0％，差异无统计学意义（P值均〉0．05）。结论细胞对5-aza-dC的敏感性与细胞总DNA甲基化水平无关。
- 李小平黄爱龙杨梅
- 关键词：脱氧胞苷DNA甲基化CASPASE类
- RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU序列对HEK293细胞凋亡的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU序列对人胚肾293(HEK293)细胞凋亡的影响以及干扰素(IFN)在此机制中的作用。方法取对数生长期的HEK293细胞,分为6组,ALU-293组(瞬时转染重组质粒pcDNA3.1-ALU)、pcDNA3.1-293组[瞬时转染空质粒pcDNA3.1(-),作为阴性对照]、Poly I∶C-293组[瞬时转染dsRNA的多聚肌苷胞苷酸(Poly I∶C),作为阳性对照]、IFNβ-293组(加入1.65×104 U IFNβ,作为阳性对照)、空白对照组(未经处理的HEK293细胞)和HBs-293组(瞬时转染重组质粒pcDNA3.1-HBs),转染后48 h,采用MTT法检测细胞的增殖活性;Cellular DNA Fragmentation ELISA和DNA Ladder法检测细胞的凋亡情况;Real-time PCR检测细胞中IFNβ基因mRNA的水平。结果瞬时转染重组质粒pcDNA3.1-ALU能够抑制HEK293细胞增殖,并促使其凋亡,且细胞中IFNβmRNA的水平显著上调。结论 RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU序列能够通过激活干扰素系统来诱导细胞凋亡。
- 李璇高建杨梅胡文艳田绿彭湃澜王峰高昌益任红唐开福
- 关键词：细胞凋亡干扰素类
- RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU对PKR磷酸化及细胞凋亡的调节作用
- 目的:研究ALU自身的RNA聚合酶III启动子对RNA聚合酶II转录的影响,探讨RNA聚合酶II转录ALU的生理功能。
方法:/(1/)将Alu全基因序列插入pcDNA3.1载体的CMV启动子的下游,构建重组...
- 杨梅
- 关键词：PKRRNA聚合酶II
- 文献传递
