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王晓晓: 作品数：14 被引量：44H指数：4; 供职机构：潍坊医学院更多>>; 发文基金：山东省自然科学基金山东省高等学校科技计划项目国家级大学生创新创业训练计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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帕金森病大鼠黑质致密部IgG蛋白的表达变化被引量：1: 2014年; 目的研究帕金森病(Parkinson disease,PD)模型大鼠黑质致密部免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)的表达变化,探讨其在PD发病中的作用。方法经单侧微量注射神经毒素6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)制备PD大鼠模型。采用免疫组化方法检测对照组大鼠双侧、模型组大鼠健侧及损毁侧黑质致密部酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元、IgG阳性细胞数目及积分光密度值(integrated option density,IOD)比值的变化。结果模型组PD大鼠损毁侧TH阳性神经元数量较健侧明显减少(P<0.01),正常组大鼠和模型组大鼠黑质致密部均有IgG阳性细胞存在,但是模型组大鼠损毁侧致密部IgG阳性细胞数量明显增加(P<0.01),染色深。结论 PD大鼠黑质致密部细胞IgG蛋白表达增加,表明IgG参与了PD的发生。; 汪明玉刘志辉付文玉庄文欣孙杨杨同王欣刘宗昱王晓晓马璐璐; 关键词：帕金森病酪氨酸单氧化酶免疫球蛋白G 黑质

慢病毒介导核受体相关因子1基因修饰骨髓间充质干细胞移植治疗帕金森病模型大鼠被引量：6: 2015年; 目的探讨慢病毒介导核受体相关因子1(Nurrl)基因修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植至帕金森病(PD)模型大鼠纹状体后对PD大鼠的治疗作用。方法采用神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)纹状体注射成功制备PD大鼠模型18只,将携带绿色荧光的慢病毒GV287-Nurr1感染大鼠BMSCs,然后随机移植入6只PD模型大鼠的纹状体内(实验组),设生理盐水组(假移植组)6只及感染空慢病毒GV287的BMSCs组(对照组)6只;术后第1、2、4周观察大鼠的行为改善情况;免疫组织化学染色法检测纹状体及黑质中Nurrl和酪氨酸羟化酶(TH)蛋白的表达变化;RT-PCR法检测黑质Nurrl mRNA和TH mRNA的表达变化。结果慢病毒感染后的BMSCs及上清中均检测到Nurr1蛋白;对照组与实验组大鼠在移植后第1、2、4周的旋转行为较假移植组均有所改善,且实验组比对照组改善更明显;实验组纹状体Nurr1阳性细胞有效存活并沿胼胝体向皮质及对侧脑组织迁移;实验组纹状体及黑质损毁侧Nurrl和TH蛋白及mRNA的表达较假移植组和对照组明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导Nurr1基因修饰大鼠BMSCs移植治疗PD大鼠,能有效地改善PD模型大鼠的行为学症状,增加大鼠脑内纹状体和黑质区Nurr1和TH的表达。; 王晓晓付文玉庄文欣李锋杰王倩刘金城; 关键词：慢病毒酪氨酸羟化酶帕金森病

帕金森病大鼠黑质免疫球蛋白IgG及其mRNA的表达变化: 2015年; 目的:观察帕金森病(PD)模型大鼠黑质致密部(SNc)免疫球蛋白G(IgG)及其mRNA的表达变化,探讨Ig G在PD发病中的作用。方法:单侧微量注射6-羟多巴胺(6-OHDA)制备PD大鼠模型。免疫组化法观察对照组大鼠双侧、模型组大鼠健侧及注射侧SNc酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元和IgG阳性细胞的数量变化,RTPCR法检测两组大鼠黑质TH mRNA、IgG mRNA的表达变化。结果:模型组大鼠注射侧SNc内TH阳性神经元的数量较健侧显著减少(P<0.05),两组大鼠SNc均可见IgG阳性细胞,但模型组大鼠注射侧SNc IgG阳性细胞的数量显著增加(P<0.05),染色较深。模型组大鼠注射侧TH mRNA表达明显低于健侧和对照组双侧,IgG mRNA表达明显高于健侧和对照组双侧。结论:PD大鼠黑质致密部细胞IgG蛋白及其mRNA表达均增加,表明IgG与PD的发生有关。; 曹建欣庄文欣付文玉刘宗昱王晓晓; 关键词：帕金森病酪氨酸羟化酶免疫球蛋白G 黑质致密部

医学院校实验动物伦理学问题的思考被引量：14: 2014年; 动物实验是医学研究中必不可少的手段,因此实验动物对于医学的发展有着重要作用。随着社会的日益发展和人类的进步,实验动物伦理问题也受到人们的广泛关注,关注的焦点主要聚集在实验动物伦理问题的发展、现状、存在问题、立法状况、实施的必要性等方面,如何正确认识和对待实验动物的生命,如何科学、合理而人道地使用实验动物进行科学研究等方面。医学院校作为医学生迈入医学大门的第一步,在医学院校进行相关实验教学和研究是必不可少的,而动物实验在医学教育及研究中更是具有十分重要的意义,故针对医学院动物实验的现状及对待动物实验的看法等问题,并分析其引发的伦理学问题,从而探讨医学院医学研究中实验动物伦理学相关的问题。; 庄文欣刘宗昱付文玉王晓晓马璐璐; 关键词：医学院校实验动物伦理问题

血管活性肠肽对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元存活及小胶质细胞功能的影响被引量：2: 2015年; 目的:观察血管活性肠肽(VIP)对帕金森病(PD)大鼠黑质多巴胺(DA)能神经元存活和小胶质细胞活化的影响。方法:采用脑立体定位术将6-羟多巴胺注射至纹状体,制备大鼠PD模型。将PD大鼠随机分为VIP组和模型组,VIP组大鼠腹腔注射VIP 1 ml(20 ng/ml)。另10只正常大鼠为对照组。采用免疫组织化学和RT-PCR方法观测各组大鼠黑质DA能(酪氨酸羟化酶(TH)阳性)神经元数量、小胶质细胞(CD11b阳性)的数量和形态变化以及肿瘤坏死因子(TNF-α)和环氧酶-2(COX-2)的表达及相关分子mRNA水平达变化。结果:PD大鼠损毁侧黑质TH阳性神经元数量较对照组明显减少(P<0.05),小胶质细胞(CD11b阳性细胞)数量显著增加(P<0.05),并呈"阿米巴"样改变,TNF-α和COX-2阳性细胞数量明显增加(P<0.05);VIP组大鼠与模型组相比,黑质TH阳性神经元数量明显增加(P<0.05),CD11b阳性细胞数量明显减少(P<0.05),TNF-α和COX-2的阳性细胞数量显著减少(P<0.05)。RT-PCR检测结果可见,模型组大鼠黑质TH mRNA较对照组显著降低,而VIP组TH mRNA较模型组显著升高(P<0.05),模型组CD11b mRNA、TNF-αmRNA表达明显高于对照组,而VIP组大鼠CD11b mRNA、TNF-αmRNA表达显著低于模型组。结论:VIP对6-OHDA所致PD大鼠DA能神经元具有保护作用,并且可以抑制黑质内小胶质细胞活化及相关炎性因子的表达。; 刘宗昱庄文欣王晓晓刘金城李锋杰付文玉; 关键词：血管活性肠肽帕金森病小胶质细胞

真核表达载体pIRES2-EGFP-Nurr1的构建及鉴定: 2014年; 目的:构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因Nurr1的真核表达载体pIRES2-EGFP-Nurr1,并检测其在293T细胞中的表达。方法:采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从大鼠黑质中获取Nurrl基因,连接T载体测序正确后与真核空载体pIRES2-EGFP一起,经Nhe1和Xho1双酶切,T4 DNA连接酶连接,构建pIRES2-EGFP-Nurr1;真核表达载体pIRES2-EGFP-Nurr1测序正确后采用脂质体法将其转染293T细胞,倒置荧光显微镜下观察转染效率,PCR检测Nurr1基因mRNA水平的表达情况,免疫印迹试验(Western Blot)检测Nurr1蛋白的表达水平。结果:酶切及测序鉴定证实成功构建了重组真核表达载体pIRES2-EGFP-Nurr1;293T细胞转染pIRES2-EGFP-Nurr1后可以高度表达绿色荧光,有效转录Nurr1基因并正确的高表达Nurr1蛋白。结论:成功构建Nurr1真核表达载体且在293T细胞中高水平表达,为进一步转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),基因治疗帕金森病奠定基础。; 王晓晓付文玉郭军堂庄文欣林志娟; 关键词：真核表达载体

帕金森病大鼠中缝背核5-羟色胺、神经肽Y、P物质蛋白及mRNA的表达变化被引量：4: 2014年; 目的：检测帕金森病（PD）大鼠中缝背核与抑郁相关神经内分泌激素5-羟色胺（5-HT）、神经肽Y（NPY）、P物质（SP）蛋白及其mRNA的表达变化，探讨PD与抑郁的关系。方法：雄性SD大鼠单侧微量注射6-OHDA制备PD大鼠模型，将制模成功的10只雄性大鼠作为模型组，另10只正常大鼠作为对照组，采用免疫组织化学显色观察正常大鼠与PD大鼠中缝背核神经内分泌激素5-HT、NPY、SP阳性细胞的分布、形态及数量变化，采用RT-PCR方法在mRNA水平检测正常大鼠与PD大鼠中缝背核5-HT合成的限速酶-色氨酸羟化酶2（TPH2）、NPY和SP的表达变化。结果：免疫组织化学结果显示，模型组大鼠中缝背核5-HT、NPY免疫反应阳性神经元数量明显少于对照组，而模型组大鼠中缝背核SP免疫反应阳性神经元数量明显多于对照组。RT-PCR检测显示模型组大鼠中缝背核TPH2mRNA和NPYmRNA表达明显低于对照组，而模型组大鼠中缝背核SPmRNA表达明显高于对照组。结论：PD大鼠中缝背核与抑郁相关神经内分泌激素发生明显表达变化。; 栾守婧付文玉庄文欣刘长山马璐璐王晓晓; 关键词：帕金森病中缝背核 5-羟色胺 P物质

Nr4a2过表达慢病毒载体的构建及鉴定被引量：1: 2014年; 目的:构建含Nr4a2基因的绿色荧光慢病毒载体,并检测其体外表达目的基因的水平。方法:设计Nr4a2基因的引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增,插入经AgeⅠ/AgeⅠ酶切的GV287慢病毒载体构建GV287-Nr4a2慢病毒质粒。PCR鉴定、测序验证后,将其与pHelper1.0载体、pHelper2.0载体共同转染293T细胞(人胚肾细胞),48小时后收集含慢病毒颗粒的细胞上清液,经浓缩并测定滴度后感染293T细胞,72h后观察增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达。结果:酶切及测序鉴定证实成功构建了重组慢病毒载体GV287-Nr4a2;荧光显微镜下可见绿色荧光高度表达;Nr4a2蛋白能在293T细胞中有效表达;包装过表达慢病毒并测其浓缩滴度为2.0×108TU/ML。结论:成功构建Nr4a2慢病毒载体且在293T细胞中良好表达,为进一步转染大鼠骨髓间充质干细胞,基因治疗帕金森病奠定基础。; 王晓晓付文玉庄文欣王倩刘宗昱刘金城; 关键词：慢病毒过表达

香椿子多酚提取物对6-OHDA诱导的PC12细胞损伤的保护作用被引量：8: 2016年; 目的:研究香椿子多酚提取物(polyphenols from toona sinensis seeds,PTSS)对神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:体外培养PC12细胞,实验分为对照组、PTSS组、6-OHDA组及PTSS+6-OHDA组,倒置显微镜下观察各组细胞形态;MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫组织化学染色法检测各组细胞Caspase-3、COX-2和TNF-α的表达变化。结果:PTSS可有效地降低6-OHDA引起的PC12细胞的损伤,增加细胞存活率,减少细胞早期凋亡;降低Caspase-3、COX-2及TNF-α的表达。结论:PTSS对6-OHDA引起的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。; 刘金城庄文欣李锋杰李万忠李晓健王晓晓付文玉; 关键词：PC12细胞 6-羟多巴胺

改良纹状体内两点注射6-OHDA法制备大鼠帕金森病模型被引量：6: 2015年; 目的:探讨改良的单侧纹状体两点法双靶点注射神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)制备帕金森病(PD)大鼠模型,对提高制模成功率的可行性。方法:利用立体定向技术以两点法双靶点注射6-羟多巴胺(6-OHDA)于雄性Sprague-Dawley大鼠右侧纹状体,分别于注射后2周和4周检测两组大鼠行为学变化;免疫组织化学法观察大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的数量变化;RT-PCR和Western Blot法分别检测TH mRNA和TH蛋白的表达变化。结果:造模2周后模型成功率为82.9%,4周后模型成功率高达88.6%;与对照组比较,模型大鼠6-OHDA注射侧黑质TH阳性细胞数显著减少(P<0.01);TH mRNA和TH蛋白的表达水平均明显降低(P<0.01)。结论:改良的单侧纹状体两点法双靶点注射6-OHDA制备大鼠帕金森病模型简单、易行,成功率高。; 王晓晓付文玉庄文欣王倩刘宗昱刘金城; 关键词：帕金森病 6-OHDA 纹状体

王晓晓

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