董继斌
- 作品数：15 被引量：40H指数：3
- 供职机构：复旦大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金国家攀登计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学化学工程更多>>
- 利用细胞培养基或动物血浆中的荧光标记产物测定鞘磷脂合酶活性(英文)被引量：1
- 2014年
- 鞘磷脂合酶(SMS)催化神经酰胺(ceramide,Cer.)转变为鞘磷脂(sphingomyelin,SM)。近来的研究表明神经酰胺和鞘磷脂参与了代谢综合征的过程,因而鞘磷脂合酶被认为是开发抗代谢综合征药物的潜在靶点。鞘磷脂合酶有两个同工酶,分别称为鞘磷脂合酶1(SMS1)和鞘磷脂合酶2(SMS2)。这两种同工酶的亚细胞定位不同,在不同组织中的表达水平也有差异。到目前为止,已发表有多种方法测定组织和细胞匀浆中的总SMS活性,这些方法通过分析总反应体系或细胞内的酶促反应产物来衡量SMS活性。本文介绍一种测定SMS活性或筛选SMS抑制剂的新方法。我们将荧光标记的神经酰胺(NBDCer.)作为底物与细胞孵育,或者将该底物注射到小鼠体内,然后监测在细胞培养基或小鼠血浆中出现的荧光标记的鞘磷脂(NBDSM)的含量。采用这种办法可有效检测出D609(一种鞘磷脂合酶抑制剂)对细胞和小鼠整体SMS活性的抑制作用。我们进一步采用该方法检测了SMS1基因敲除小鼠和SMS2基因敲除小鼠的SMS活性,结果发现注射底物后,SMS2基因敲除小鼠(而不是SMS1基因敲除小鼠)血浆中NBDSM的堆积被明显阻断。因而该方法可用于检测生理或药理条件下在体或离体组织的SMS活性、筛选SMS抑制剂、甚至筛选SMS2特异性抑制剂。
- 丁庭波董继斌楼滨蒋宪成
- 关键词：酶活性测定鞘磷脂神经酰胺
- 携带K5基因突变体的腺病毒构建及K5蛋白表达被引量：1
- 2008年
- 目的对血管生成抑制因子纤溶酶原Kringle 5(K5)基因进行突变,构建于重组腺病毒中,并观察突变后K5蛋白的表达情况。方法用重叠延伸技术对K5基因Furin蛋白酶水解识别位点进行定点突变,分别构建携带K5基因和突变后的K5m基因表达框的腺病毒载体Ad-EF1-αK5/K5m;用RT-PCR法比较腺病毒感染TC-1细胞后K5和K5m mRNA的表达;用免疫沉淀和Western blot法比较腺病毒感染TC-1细胞后K5蛋白和突变后K5蛋白的表达。结果成功对K5基因进行点突变,携带K5突变基因腺病毒K5蛋白表达量明显多于携带未突变K5基因腺病毒。结论对K5基因Furin蛋白酶水解识别位点进行定点突变能提高腺病毒介导的K5蛋白分泌表达量,为进一步以腺病毒为载体携带K5基因在眼部新生血管异常增生性疾病的实验研究提供基础。
- 刘岩刘芳叶迅董继斌陆琴李秋华陈红专
- 关键词：腺病毒KRINGLE5
- 高密度脂蛋白(HDL)抗动脉粥样硬化研究进展被引量：11
- 2012年
- 血浆高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)通过其载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I,ApoA-I)介导胆固醇逆向转运,呈现抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)功能。近来大量研究结果显示高密度脂蛋白的多种抗AS、抗炎功能与胆固醇代谢无关,而是由其联结的鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine 1-phosphate,S1P)和ApoA-I分别通过S1P受体和清道夫受体B-I(scavenger receptor class BI,SR-BI)介导的细胞内信号通路来实现。
- 董继斌吴满平
- 腺病毒介导的小鼠肝脏鞘磷脂合酶SMS过表达与动脉粥样硬化发生关系的研究
- 本实验以鞘磷脂合酶(Sphingomyelin Synthase，SMS)为研究目标，主要围绕两方面展开课题：
一、利用腺病毒载体介导的基因表达系统建立小鼠肝脏鞘磷脂合酶过表达模型;二、重点研究小鼠SMS过表达...
- 董继斌
- 关键词：腺病毒动脉粥样硬化基因表达系统
- 严重急性呼吸道综合征冠状病毒疫苗研究现状被引量：7
- 2003年
- 冠状病毒被认为是新近爆发的严重急性呼吸道综合征的病原体 .迄今公共数据库中已发表了不同国家和地区分离的 12个SARS病毒株基因组完整序列 .突起蛋白是冠状病毒的主要抗原 ,包含许多抗原决定簇 .SARS冠状病毒突起蛋白的相对保守性为有效疫苗的开发奠定了很好的研究基础 .灭活或减毒的冠状病毒疫苗存在一定的局限性和危险性 .
- 叶迅孟夏董继斌梁旻胡放陈红专
- 关键词：严重急性呼吸道综合征冠状病毒疫苗SARS基因组
- 人载脂蛋白A-I重组腺病毒载体的构建及在小鼠体内的表达
- 目的：构建人载脂蛋白A-I基因的重组腺病毒载体，探讨人载脂蛋白A-I在小鼠体内的表达，建立人载脂蛋白A-I过表达小鼠模型。
方法：采用基因工程技术，从重组质粒pDNR-LIB-ApoA-I-PA获得目的基因人载...
- 李悦董继斌吴满平
- 关键词：载脂蛋白A-I腺病毒载体内毒素动物模型
- 文献传递
- 携带Kringle 5基因重组腺病毒的构建及其对荷肺癌小鼠生存期的作用被引量：2
- 2008年
- 目的:构建携带人纤溶酶原Kringle 5(K5)基因重组腺病毒并观察其在小鼠肺癌细胞中的表达和对荷TC-1瘤小鼠的生存期的影响。方法:构建携带人纤溶酶原K5基因表达框的腺病毒载体Ad-EF1α-K5,用RT-PCR法检测腺病毒感染TC-1细胞后K5 mRNA的表达,用免疫沉淀和Western bloting法检测腺病毒感染TC-1细胞后K5蛋白的表达。建立荷TC-1小鼠肺癌C57BL/6小鼠模型,观察重组腺病毒对荷瘤小鼠生存期的影响。取肿瘤组织做免疫组织化学染色并计数微血管密度。结果:携带K5基因的人V型腺病毒能有效感染小鼠肺癌TC-1细胞,在转录和翻译水平进行表达,能有效延长荷瘤鼠的生存期并降低肿瘤微血管密度。结论:腺病毒可作为便捷的载体携带K5基因感染肿瘤细胞,分泌表达K5蛋白,延长荷瘤小鼠生存期,可能与其通过抑制肿瘤区血管生成、遏制肿瘤区血供有关。
- 刘岩刘芳叶迅董继斌陆琴赵毅李秋华陈红专
- 关键词：腺病毒KRINGLE血管生成
- 人载脂蛋白AⅠ重组腺病毒载体的构建及其在小鼠体内的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建人载脂蛋白AⅠ基因的重组腺病毒载体,探讨人载脂蛋白AⅠ在小鼠体内的表达,建立人载脂蛋白AⅠ过表达小鼠模型。方法采用基因工程技术从重组质粒pDNR-LIB-apoAⅠ-PA获得人载脂蛋白AⅠ基因,插入穿梭质粒pshuttle CMV后,在细菌内与pAdEasy-1进行同源重组,经脂质体转染HEK293细胞,在细胞内包装获得腺病毒颗粒AdV-AⅠ,并进行大量扩增和纯化。纯化的腺病毒经尾静脉注射入BALB/c小鼠体内,通过双向琼脂免疫扩散反应、免疫比浊法及免疫印迹法检测人载脂蛋白AⅠ在小鼠体内的表达。结果成功构建了重组腺病毒载体,纯化后的病毒滴度达4.0×1013pfu/L。重组腺病毒载体能在小鼠体内高表达人载脂蛋白AⅠ,且在注射1天后表达高达740±110 mg/L。结论成功构建了重组腺病毒载体,并能介导外源基因人载脂蛋白AⅠ在小鼠体内的表达,建立了人载脂蛋白AⅠ过表达小鼠模型,为进一步研究载脂蛋白AⅠ的抗内毒素功能奠定了基础。
- 李悦董继斌吴满平
- 关键词：分子生物学腺病毒载体脂多糖
- 利用细胞培养基或动物血浆中的荧光标记产物测定鞘磷脂合酶活性
- 鞘磷脂合酶(SMS)催化神经酰胺(ceramide,Cer.)转变为鞘磷脂(sphingomyelin,SM).近来的研究表明神经酰胺和鞘磷脂参与了代谢综合征的过程,因而鞘磷脂合酶被认为是开发抗代谢综合征药物的潜在靶点....
- 丁庭波董继斌楼滨蒋宪成
- 改良凝胶电泳和脂染色检测血清前β1高密度脂蛋白的方法和应用
- 陈允钦董继斌张晓金邹云增陈灏珠葛均波
