顾文源 作品数:51 被引量:118 H指数:7 供职机构: 河北省动物疫病预防控制中心 更多>> 发文基金: 国家现代农业产业技术体系建设项目 河北省自然科学基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 经济管理 轻工技术与工程 生物学 更多>>
河北部分地区致犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定与耐药性及系统进化发育分析 被引量:4 2018年 随着养牛业规模的不断扩大,牛场引进犊牛数量的增多,犊牛腹泻的发病率和死亡率有着明显的上升趋势。许多病原微生物均可导致犊牛腹泻,其中大肠杆菌是主要致病菌,占90%以上,大肠杆菌引起犊牛的肠道疾病,初期症状为腹泻、脱水,严重时甚至会引起死亡,牛场内一旦发生该病,将严重影响犊牛生长、发育、产能,对养牛业的发展和经济效益造成严重的损失。 王梦佳 顾文源 刘媛 张薇 刘莹 李妍 路广计 李清艳 左玉柱 范京惠关键词:犊牛腹泻 大肠杆菌 进化发育 耐药性 病原微生物 一种死宰牛肉的鉴定方法 本发明通过对血红蛋白残留和过氧化物酶活性进行双标检测,同时测定待测样本中过氧化物酶的浓度C<Sub>1</Sub>以及血红蛋白的浓度C<Sub>2</Sub>,通过公式R=C<Sub>2</Sub>/C<Sub>1</S... 王增利 韩庆安 张若曦 马贵达 艾连峰 顾文源 李翀 仇国明 马宏伟 董维亚 吴秀楼 康志勇 赵彦岭 林建涵 张建虹 张哲 吴萌 霍惠玲 王建昌河北省塞内卡病毒A VP2基因克隆和序列分析 被引量:1 2022年 为了解河北省塞内卡病毒A(SVA)VP2基因的变异及分子进化情况,试验设计了一对VP2基因扩增引物,通过RT-PCR方法扩增和克隆测序,利用MEGA 7.0软件对测序获得的VP2基因序列和GenBank上的参考序列进行遗传进化分析,运用MegAlign 5.0软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析。结果表明:成功扩增并测序得到VP2基因序列,将该序列上传至GenBank,获得基因登录号为MZ031967,命名为SVA HB-BD株。该毒株与中国毒株核苷酸序列相似性为95.9%~99.6%;与原型毒株SVV-001(DQ64125-7核苷酸)相似性较低,为94.6%;与其他美国毒株(MN812946、MN812947、KC667560、MH704432、MN812938、MN812937、KU954086、NC011349)核苷酸相似性为93.0%~94.6%。SVA HB-BD株与2015—2016年分离毒株亲缘关系较近,处于同一分支,而与2017—2018年分离毒株亲缘关系较远。SVA HB-BD株与广东省分离毒株氨基酸序列相似性较高,并且在VP2蛋白中和表位位点高度保守。说明HB-BD株与中国毒株具有相同起源,并且在不断演变。 王晶 郭禹 赵云环 顾文源 刘涛 翟刚 张帅 王丙雷 左玉柱 范京惠关键词:VP2基因 PCR扩增 遗传进化 CSFV、PRV和PRRSV多重PCR检测方法的建立及其应用 被引量:9 2019年 由猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的繁殖障碍性疫病在中国的不断暴发,增加了猪的发病率和死亡率。为了建立同时检测这3种病毒的多重PCR方法,本研究根据GenBank中这3种病毒的参考基因序列设计引物,并对反应中的影响因素进行优化,建立了同时检测CSFV、PRV和PRRSV的多重PCR方法。该方法扩增的基因片段大小分别为570(CSFV),232 (PRRSV)和173bp(PRV)。敏感性和特异性试验结果显示,该方法对3种病毒的核酸最低检出量分别为23.88(CSFV),13.10(PRRSV)和14.60pg(PRV),对大肠杆菌(Ec.oli)、沙门菌(Salmonella)、猪乙型脑炎病毒(JEV)及猪圆环病毒2型(PCV2)的检测结果均为阴性。对2015年5月至2016年1月收集的168份临床样本检测结果显示,CSFV阳性率为24.4%,PRRSV阳性率为21.4%,提示河北省该段时间内引起猪繁殖障碍性疫病的主要病原为CSFV和PRRSV。经多重PCR检测为PRRSV、PRV或CSFV阳性的临床样本,再次使用商品化的试剂盒进行检测,符合率为100.0%。这些结果表明,本试验建立的多重PCR方法省时、高效,可用于PRRSV、PRV和CSFV感染的临床诊断。 顾文源 范京惠 邸晶美 罗尚星 刘宝京 左玉柱关键词:猪瘟病毒 伪狂犬病病毒 猪蓝耳病病毒和猪圆环病毒2型混合感染病例分析 2024年 0引言猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又称为猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)引起的一种高度传染性疾病,对所有年龄段和所有品种的猪易感。 赵云环 顾文源 孟子薇 肖娜 刘立辉 王亚轩 范京惠 左玉柱关键词:猪圆环病毒2型 屡配不孕 精液质量 鸡皮刺螨携带病原及传播病原的研究进展 2024年 鸡皮刺螨(Dermanyssus gallinae)是蛋鸡养殖中危害最严重的吸血性体外寄生虫之一,其感染会引起鸡群生长发育缓慢、消瘦、贫血,严重感染会导致鸡死亡,影响养鸡业健康发展。除了吸血性寄生的这种直接作用外,鸡皮刺螨也是多种动物病原和人畜共患病病原的载体和储存库,可传播肠炎沙门菌、产单核细胞李氏杆菌、禽痘病毒、禽流感病毒和东方马脑炎病毒等,对禽类和人类的生命健康都构成了一定的威胁。本文对鸡皮刺螨的生活史、致病性、携带病原情况、传播病原的途径和部分鸡皮刺螨传播病原研究现状等方面进行了综述,以期为今后鸡皮刺螨作为病媒的研究提供方向和指导。 徐楷 顾文源 张学迪 张玥 尹硕 秦建华 潘保良 王传文关键词:病媒 奶牛的异常表现与健康状况评估 2017年 牛群的健康是保证其高产稳产的基础,奶牛的任何异常行为都表明其可能存在不同科度的健康隐患。本文根据奶牛养殖方面的经验及参考大量文献,把奶牛外部表现、体况、饮水产奶及消化代对情况等方面的异常表现与健康的关系进行总结,以供奶牛养殖者参考,希望对其有所帮助。 邵丽玮 王晓芳 安永福 薛振卫 顾文源 刘荣昌关键词:奶牛 A型塞内卡病毒VP2蛋白抗原区的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量:1 2023年 为建立高效的A型塞内卡病毒(SVA)的血清学检测方法,本研究经PCR扩增SVA VP2基因的优势抗原区域(VP2-1基因)后构建重组质粒p ET-32a-VP2-1,将其转化大肠杆菌感受态细胞并经IPTG诱导表达重组VP2蛋白(rVP2),表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用western blot鉴定,结果显示,在42 ku处出现特异性条带,表明r VP2可以与SVA阳性血清特异性反应。以r VP2为包被抗原,经反应条件的优化,建立了基于SVA VP2抗原区的间接ELISA抗体检测方法。本研究建立的间接ELISA检测方法的最适抗原包被浓度为2μg/mL,5%脱脂乳的PBST作为封闭液37℃孵育1 h,待检血清的最适稀释度为1∶500,兔抗猪Ig G-HRP稀释度为1∶10000,最佳显色时间为10 min。当检测样品的S/P值<0.201时,样品检测结果为阴性;当检测样品的S/P值≥0.201时,结果为阳性。利用该方法检测SVA,猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)等阳性血清,结果显示,除SVA检测为阳性外,其他病毒均为阴性,特异性较强。将SVA阳性血清2倍倍比稀释(1∶50,1∶100,1∶200,1∶400,1∶800,1∶1600)后经该间接ELISA方法检测,评估其敏感性,结果显示,SVA阳性小鼠血清在1∶800稀释后检测结果仍为阳性,敏感性较高。将同一批次和不同批次纯化的r VP2包被ELISA板,按照该ELISA方法检测8份猪SVA阳性血清,评估该方法的重复性。结果显示,批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,该方法重复性好。利用本实验建立的间接ELISA方法与血清中和试验同时对266份临床血清样品检测,结果显示,本研究建立方法检测的样品阳性率为19.1%,中和试验检测的样品阳性率为19.55%,两种方法检测结果符合率为97.7%。本研究首次基于SVA r VP2建立的间接ELISA方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好,为SVA的检测和其感染的防控提供了可靠的技术支持。 翟刚 顾文源 王晶 刘莹 赵云环 刘涛 刘涛 张帅 左玉柱关键词:VP2 间接ELISA 一种死宰牛肉的鉴定方法 本发明通过对血红蛋白残留和过氧化物酶活性进行双标检测,同时测定待测样本中过氧化物酶的浓度C<Sub>1</Sub>以及血红蛋白的浓度C<Sub>2</Sub>,通过公式R=C<Sub>2</Sub>/C<Sub>1</S... 王增利 韩庆安 张若曦 马贵达 艾连峰 顾文源 李翀 仇国明 马宏伟 董维亚 吴秀楼 康志勇 赵彦岭 林建涵 张建虹 张哲 吴萌 霍惠玲 王建昌文献传递 含牛轮状病毒VP6的嵌合型HBcAg颗粒抗原的制备及其免疫原性分析 2021年 本研究将编码牛轮状病毒VP6蛋白的部分基因插入到HBcAg的免疫显性区的基因中,构建了pET32a-HBcAg-VP6原核表达载体,并将其转化至大肠杆菌BL21中进行表达。重组蛋白经纯化和Western blot鉴定后,通过透射电镜观察重组蛋白HBc-VP6是否形成病毒样颗粒。以重组蛋白HBc-VP6皮下注射BALB/c小鼠,对免疫原性进行初步评价。结果显示:重组蛋白HBc-VP6在BL21中主要以沉淀的形式表达,经纯化、复性后的重组蛋白HBc-VP6能够自我折叠装配成病毒样颗粒结构,能够与BRV阳性血清发生特异性反应。重组蛋白HBc-VP6能够刺激小鼠产生抗BRV特异性抗体,同时可以产生相关的Th1型和Th2型细胞因子,试验结果证实,本研究成功制备了含VP6和HBcAg的重组蛋白HBc-VP6,并在小鼠模型中初步评价了其免疫原性,为今后牛轮状病毒疫苗的研制提供了新的思路。 邢亚茹 张增贤 顾文源 郭禹 彭志豪 左玉柱 范京惠关键词:牛轮状病毒 乙肝病毒核心抗原 VP6基因