张飞伟
- 作品数：16 被引量：66H指数：5
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 盐生杜氏藻锰超氧化物歧化酶(MnSOD)在大肠杆菌中的功能鉴定被引量：14
- 2007年
- 将极端耐盐的盐生杜氏藻(Dunaliella salina)的锰超氧化物歧化酶(DsMnSOD)基因克隆到表达载体pET32a中,并转入SOD缺陷型大肠杆菌菌株K12(SOD-)中,诱导重组蛋白表达,在耐盐、抗辐射和抗寒方面对其功能进行验证.结果显示,导入外源DsMnSOD基因的工程菌,在有氧条件下受到各种胁迫时,生长状况明显优于原菌,其耐受NaCl浓度从8%提高到10%,耐受紫外线(295 nm,83μW/cm2)照射时间从45 s提高到65 s,4℃培养的存活率从10.7%提高19.0%,且SOD的酶活表达依赖于Mn2+的存在.
- 邓婷婷李静马根王晓林赵向丽张飞伟乔代蓉曹毅
- 关键词：盐生杜氏藻锰超氧化物歧化酶
- 大肠杆菌植酸酶的原核表达及酶学性质被引量：6
- 2009年
- 将大肠杆菌植酸酶appA基因重组于表达载体pET32a中,导入大肠杆菌Origami(DE3)构建工程菌Origami(DE3)-pET32a-appA.对表达的appA重组植酸酶经Ni柱亲和纯化、SDS-PAGE分析表明,纯化后条带单一,酶的纯度较高.对其酶学性质的研究表明,该酶反应的比活力为3.36×106U/mg;最适pH为4.5;最适温度为60℃;在80℃和85℃的耐干热能力超过耐湿热能力;在37℃下,Mg2+﹑Ca2+﹑Mn2+对酶活性有促进作用,Co2+﹑Cu2+﹑K+对酶活性有不同程度的抑制作用,而Fe3+和Zn2+对酶活性有强烈的抑制作用;此外,该酶还具有非常好的抗胃蛋白酶水解的能力和部分抗胰蛋白酶水解的能力.
- 黄敏徐辉曹瑜朱俊张飞伟尤芳芳乔代蓉曹毅
- 关键词：原核表达酶学性质
- 疫苗制品中抑菌剂去除研究进展
- 2022年
- 本文依托国家药典委员会药品标准制修订研究课题(2020S03),对中国药典已收载添加抑菌剂的单剂量液体疫苗去除抑菌剂的可行性开展了研究,根据研究结果评估去除抑菌剂的风险效益,为《中国药典》修订提供技术支持。
- 朱德武瞿明霞闫亚楠姜崴李景良付博张飞伟杨勇张锐王晓娟孟丽杨汇川吴永林潘海龙
- 关键词：抑菌剂硫柳汞苯酚单剂量疫苗
- 一种氢氧化铝佐剂的制备方法
- 本发明公开了一种氢氧化铝佐剂的制备方法，它包括以喷雾状向三氯化铝溶液中加入氨水至溶液pH值为6.4‑6.8。本发明制备氢氧化铝佐剂的方法中，通过使氨水成喷雾状加入三氯化铝溶液，氨水与三氯化铝反应更加均匀，形成的非羟基氧化...
- 张飞伟刘少祥杨希飞胡高翔张华杨勇
- 文献传递
- 培养条件对百日咳杆菌发酵中百日咳毒素及丝状血凝素表达的影响
- 2021年
- 目的探讨培养条件对百日咳杆菌发酵中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)和丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)表达的影响。方法采用300 L全自动发酵罐进行百日咳杆菌发酵培养,培养基为百日咳S-S培养基,搅拌通气培养,培养量200 L,温度3537℃,培养时间40 h,接种比例1∶121∶15。试验分为高PT表达组(搅拌转速为160 r/min,搅拌叶片为直叶,有挡板,培养020及2140 h的通气量分别为600和400 L/min)、高FHA表达组(搅拌转速为220 r/min,搅拌叶片为弯叶,无挡板,培养020及2140 h的通气量分别为400和600 L/min)及对照组(搅拌转速为180 r/min,搅拌叶片为直叶,有挡板,通气量为500 L/min),每组平行培养3批培养物。于培养结束时采用ELISA法检测PT及FHA含量。结果高PT表达组PT含量平均值达3.16μg/mL,比对照组(平均值2.23μg/m L)提升了41.7%(P<0.05);高FHA表达组FHA含量平均值达21.37μg/mL,比对照组(平均值11.00μg/mL)提升了94.3%(P<0.05)。结论百日咳发酵工艺中,高搅拌剪切力和较低的溶氧水平有利于PT的表达,低剪切力和高溶氧水平有利于提高FHA的产量。
- 杨勇吴永超张飞伟杨坤闵宪捷刘佐军雍雪飞刘少祥潘海龙
- 关键词：百日咳毒素丝状血凝素百日咳杆菌发酵
- 无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量检测方法的建立及验证被引量：3
- 2016年
- 目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量,并对该方法进行验证及初步应用。方法 HPLC条件:Agilent SB 300 C18色谱柱(规格:4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:纯化水与甲醇的体积比为20﹕80;检测波长:225 nm;色谱柱温:30℃;流速:0.8 ml/min;进样量:10μl。对方法的系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性及定量限进行验证,并用建立的方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量。结果该方法检测6份10μg/ml Triton X-100的理论塔板数在1 550~1 580之间,Triton X-100峰面积和保留时间的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为2.59%和0.04%;12μg/ml的Triton X-100溶液和无细胞百日咳纯化抗原样品中,Triton X-100能与其他物质完全分离;在2~30μg/ml范围内,Triton X-100浓度与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 01);该方法检测不同浓度Triton X-100样品的加标回收率均在98%~102%之间,RSD均不超过2%;同一实验人员在不同工作日和不同检测人员在同一工作日用该方法检测供试品中Triton X-100含量的RSD均小于4%;改变流动相的甲醇比例和柱温后,6次检测值的RSD分别为0.95%和0.51%;定量限可达0.5μg/ml。该方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量均较低。结论建立的HPLC法系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性良好,可用于无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量的定量检测。
- 唐浩张飞伟刘晓凤胡慧琼杨国友秦敏
- 关键词：高效液相色谱TRITON
- 吸附无细胞百白破联合疫苗的细菌内毒素检查
- 2014年
- 目的分析吸附无细胞百白破联合疫苗（adsorbed diphtheria-tetanus-acellular pertussis combined vaccine,DTa P）细菌内毒素检查方法的可行性。方法确定供试品最大有效稀释倍数（maximum valid dilution,MVD）,并将两个厂家的鲎试剂（λ=0.25 EU/ml）进行灵敏度复核试验后,按照《中国药典》三部（2010版）附录ⅫE细菌内毒素检查法要求,采用稀释法进行供试品干扰试验,确定无干扰稀释倍数;采用凝胶限量试验对13批DTa P进行细菌内毒素检测,并采用动态显色法定量检测其中6批DTa P细菌内毒素含量。结果供试品MVD为800倍;两个厂家鲎试剂灵敏度均在0.125-0.5（0.5-2λ）范围内,符合《中国药典》三部（2010版）规定的标准。将DTa P稀释400倍可排除干扰。13批DTa P凝胶限量试验结果均〈12 EU/剂,其中6批DTa P动态显色法结果均〈2.5 EU/剂,相同6批疫苗两种检测方法的结果趋势一致。结论凝胶限量试验与动态显色法均可用于DTa P细菌内毒素检查,但凝胶限量试验更经济,操作更简便,适用范围更广。
- 刘晓凤唐朝晖邓杰周晓舟张飞伟秦敏
- 关键词：吸附无细胞百白破联合疫苗内毒素
- 喷雾式添加氨水对氢氧化铝佐剂质量一致性的影响
- 2022年
- 目的通过喷雾式添加氨水制备氢氧化铝佐剂,分析其对佐剂质量批间一致性的影响。方法分别以喷雾和流加方式添加氨水至三氯化铝溶液各制备3批氢氧化铝佐剂,比较两种氨水添加工艺制备的佐剂粒径、pH、外观等质量指标。结果喷雾方式添加氨水制备的3批佐剂平均粒径为(96.7±8.6)nm,pH为4.93±0.02,透析后沉淀量为(20.9±0.4)g/L;流加方式添加氨水制备的3批佐剂平均粒径为(161.0±24.7)nm,pH为4.85±0.06,透析后沉淀量为(105.6±13.8)g/L。相较于流加,以喷雾式添加氨水制备的3批佐剂为均一的乳白色悬液,粒径更小,透析后透析袋底部大颗粒沉淀明显减少,批间一致性更好。结论采用喷雾方式将氨水加入三氯化铝溶液中,可使氨水与三氯化铝溶液接触更加充分,产物更加均匀,有助于提高氢氧化铝佐剂外观、粒径、pH等质量指标的批间一致性。
- 杨希飞刘少祥胡高翔周阳黄攀张华张莉杨坤张飞伟
- 关键词：粒径PH
- 不同胁迫下盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶基因表达及其与甘油合成的响应被引量：8
- 2007年
- 在已克隆的盐藻(Dunaliella salina)3-磷酸甘油脱氢酶GPD基因的基础上,利用实时荧光定量PCR的方法,研究了经高盐、厌氧、磷酸盐以及氧化等不同外界胁迫条件下该基因的表达情况,并同时监测了盐藻细胞甘油合成的动态变化.对比酿酒酵母的GPD基因,发现D.salina GPD基因受高渗诱导,同时D.salina细胞内可能存在多个形式的GPD基因.
- 孙晓菲黄非梁雪张飞伟杨旺桂白林含乔代蓉曹毅
- 关键词：盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶荧光定量PCR甘油合成
- 利用玉米芯水解液发酵生产木糖醇的研究被引量：13
- 2008年
- 以玉米芯为材料,分别从压强、温度、酸浓度以及水解时间几个方面对玉米芯的水解条件进行了研究,确定低压、120℃、水解时间为2 h作为玉米芯半纤维素的水解条件;同时研究了利用玉米芯水解液发酵生产木糖醇的条件,结果表明热带假丝酵母(Candida tropicalis)的最优发酵条件为:初始pH 7.5,装液量70%,接种量10%,发酵温度28℃.
- 张飞伟苏艳秋黄敏郑红波吴鹏黎娅乔代蓉
- 关键词：木糖醇木糖发酵
