朱春平
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- H3N2亚型猪流感病毒10个基因的原核表达及抗HA蛋白单抗杂交瘤细胞株的建立
- 猪流感病毒(Swine influenza virus，SIV)是单股负链RNA病毒，属于正黏病毒科，A型流感病毒属。流感病毒有A、B、C三种型，它们均能够感染猪，引起猪流感(Swine influenza，SI)的发生...
- 朱春平
- 关键词：猪流感病毒原核表达杂交瘤细胞
- 文献传递
- H3N2亚型SIV核蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2015年
- 【目的】克隆和表达H3N2型猪流感病毒(SIV)A/swine/Henan/1/2010(H3N2)的核蛋白(NP)基因,为制备NP抗体和SIV基因工程疫苗奠定基础。【方法】提取SIV A/swine/Henan/1/2010(H3N2)的RNA,用RT-PCR扩增NP基因,将其定向克隆到pET-28a(+)原核表达载体,构建重组表达载体,并将其转化入大肠杆菌Rosetta中表达,用SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物,同时考察IPTG不同浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和不同诱导时间(2,4,6,8h)对重组NP蛋白表达量的影响。【结果】克隆到1 512bp的NP基因,与预期的核蛋白基因大小一致,共编码498个氨基酸;构建的重组表达载体在大肠杆菌Rosetta中表达出了分子质量约60ku的重组核蛋白,其主要以包涵体的形式存在。IPTG不同诱导浓度和不同诱导时间对重组NP蛋白表达量的影响均较小。【结论】克隆和表达了H3N2亚型猪流感病毒的核蛋白基因。
- 朱春平李燕吴亚丽常婧竹刘琳高文明李新生
- 关键词：猪流感病毒核蛋白H3N2亚型大肠杆菌
- 猪流感病毒H3N2核蛋白基因在大肠杆菌中的表达和鉴定
- 目的：克隆、表达和鉴定猪流感病毒A/swine/Henar/1/2010(H3N2)的核蛋白基因(NP)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.方法：用RT-PCR扩增核蛋白基因,将其定向克隆到pET-28a(+)原核表...
- 朱春平李燕周云飞吴亚丽常婧竹刘琳高文明李新生
- 关键词：核蛋白基因大肠杆菌克隆表达病原鉴定
- 文献传递
- H1N1亚型猪流感病毒SW/HN/405/10株神经氨酸酶基因来源的探究
- 2013年
- 为了研究H1N1亚型猪流感遗传演化与变异的特性,2010年2月从河南省某发病猪场采集疑似猪流感的病猪鼻拭子,通过鸡胚尿囊腔传代接种法分离病毒,利用血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)及RT-PCR方法对病毒分离株进行鉴定,并对分离株的NA基因进行了序列扩增及遗传进化分析。结果表明:分离到一株H1N1病毒,命名为A/swine/Henan/405/2010(H1N1)(SW/HN/405/10);同源性分析结果发现:分离毒株NA基因与GeneBank中登录的类禽型H1N1流感病毒代表株有较高的同源性(92.1%～99.4%),与A/swine/HongKong/NS62/2005的同源性最高;NA核苷酸序列分析发现:没有核苷酸插入或缺失,其酶活性中心,二硫键及糖基化位点高度保守,但抗原位点有变异;系统进化树分析发现:该分离株的NA基因与类禽型H1N1猪流感病毒进化关系最近且处于同一分支上。由此推测该分离株NA基因可能来源于类禽型H1N1猪源谱系,遗传特征相对稳定,但同时也发生了一定的变异,说明该分离株还在不断地变异和演化。
- 王俊亚周云飞朱春平刘媛媛张晓娟崔保安李新生
- 关键词：猪流感病毒H1N1亚型NA基因
- H3N2亚型SIV血凝蛋白单克隆抗体的制备被引量：2
- 2016年
- 【目的】制备H3N2亚型猪流感病毒(SIV)的单克隆抗体,为SIV的鉴别诊断奠定基础。【方法】将A/swine/Henan/1/2010(H3N2)猪流感病毒初步浓缩后,免疫6周龄的BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与瘤细胞NS0融合,采用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,对杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体进行Western blot检验和抗原结合活性检测。【结果】经过3次有限稀释法克隆纯化,最终得到1株能稳定分泌单克隆抗体的阳性细胞株,命名为1C10,经检测其腹水抗体效价为1∶51 200。单克隆抗体亚型鉴定结果表明,1C10为IgG1亚型,轻链类型为κ链。Western blot检测结果表明,这株单克隆抗体能与H3N2特异性结合,而且能特异性识别血凝素蛋白(HA),而不与H1N1亚型猪流感病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒发生交叉反应。【结论】制备获得1株抗猪流感H3N2病毒HA蛋白的单克隆抗体,可用于猪流感病毒鉴别诊断方法的建立。
- 周云飞朱春平李燕常婧竹崔保安李新生
- 关键词：H3N2猪流感病毒单克隆抗体
