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肖文

作品数：4 被引量：13H指数：2
供职机构：四川大学华西医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 3篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 2篇真核
  • 2篇真核表达
  • 2篇基因
  • 2篇核表达
  • 2篇肺癌
  • 1篇蛋白
  • 1篇点突变
  • 1篇定点突变
  • 1篇端粒
  • 1篇端粒酶
  • 1篇端粒酶催化亚...
  • 1篇亚单位
  • 1篇抑制基因
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光蛋白
  • 1篇真核表达载体
  • 1篇启动子
  • 1篇启动子驱动
  • 1篇全长
  • 1篇人端粒酶

机构

  • 4篇四川大学华西...
  • 3篇天津医科大学...
  • 1篇第三军医大学...

作者

  • 4篇肖文
  • 3篇周清华
  • 3篇朱文
  • 2篇杨雪琴
  • 2篇王艳萍
  • 2篇陈晓禾
  • 2篇朱大兴
  • 1篇姚毅冰
  • 1篇张芷旋
  • 1篇陈军
  • 1篇马家宝
  • 1篇刘红雨
  • 1篇范羽
  • 1篇朱圣明
  • 1篇李永文
  • 1篇李昌林
  • 1篇万海粟
  • 1篇孙丽亚
  • 1篇高利伟
  • 1篇王燕萍

传媒

  • 3篇中国肺癌杂志
  • 1篇医学研究生学...

年份

  • 2篇2008
  • 2篇2007
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
人端粒酶催化亚单位启动子驱动的EGFP真核表达载体的构建及在肺癌细胞的表达被引量：11
2007年
目的:构建人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达载体,研究其调控EGFP在肿瘤细胞中的靶向表达。方法:从含hTERT启动子序列的重组质粒pGL3-hTERTp上,酶切获取约1100bp的启动子片段,克隆至无启动子的EGFP质粒载体pEGFP-1的多克隆位点中,构建pEGFP-hTERTp真核表达载体。用含有巨细胞病毒(CMV)启动子的质粒pEGFP-N1作为阳性对照,pEGFP-1作为阴性对照,脂质体转染法分别转染人肺癌细胞95D,NCI-H446,A2,A549,LTEP-a-2,YTMLC和人正常细胞MRC-5,荧光显微镜下观察各细胞中EGFP转录表达情况。结果:双酶切和单酶切均显示载体pEGFP-hTERTp构建成功。细胞转染结果显示:在转染了pEGFP-hTERTp质粒的肺癌细胞中EGFP都有不同程度的表达,而在MRC-5中无EGFP表达;转染pEGFP-N1的肺癌细胞和正常细胞中均可清晰地观察到EGFP强荧光表达。结论:hTERT启动子能调控EGFP在肺癌细胞中靶向性转录表达。CMV启动子调控的EGFP在肺癌细胞和正常细胞中的表达不具有特异性。hTERT启动子有可能作为肿瘤靶向性基因治疗的调控元件。
朱圣明王艳萍陈晓禾唐小军肖文
关键词：人端粒酶催化亚单位启动子肺癌靶向表达绿色荧光蛋白
Ras激酶抑制子KSR定点突变、表达和鉴定
2007年
背景与目的Ras to MAPK通路在生长、发育信号传递中起关键的作用。Ras激酶抑制基因(KSR)是该通路中的一个重要组分,其功能主要是作为一个支架蛋白协调装配包含有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)及其上游调控子的多蛋白复合体。已有的研究表明KSR有许多磷酸化位点,这些位点磷酸化状态的改变与外界信号刺激有着极为密切的关系。利用定点突变技术可以准确地改变基因特定碱基序列,获得突变蛋白质。本研究的目的是应用定点突变技术构建突变型KSR,并将其瞬时转染293T细胞所表达蛋白纯化和鉴定,为进一步研究KSR生化作用机制提供理论和实验依据。方法以本实验室自己构建的pCMV-Tag2b-KSR质粒为模板,应用本实验室改进的QuikChangtm定点突变方法,引入KSR12个突变位点,构建突变型pCMV-Tag2b-KSR,并将其瞬时转染293T细胞进行蛋白表达,亲和胶纯化并经SDS-PAGE和蛋白质印迹鉴定。结果成功构建了2个突变型KSR基因,经DNA序列分析突变碱基,证实位点正确,并经过瞬时转染293T细胞表达出突变体蛋白,纯化蛋白经SDS-PAGE和蛋白质印迹鉴定与实验设计完全一致。结论成功构建了2个具有不同突变位点的突变型KSR,为以后进行蛋白功能研究提供实验基础。
肖文周清华王燕萍朱文陈晓禾杨雪琴朱大兴
关键词：定点突变真核表达纯化
转移抑制基因nm23-H1参与肺癌Ras信号传导机理研究被引量：2
2008年
背景与目的nm23-H1基因已被证实为一种肿瘤转移抑制基因,但其作用机理尚不明了,本研究探讨nm23-H1参与肺癌Ras信号传导的机理。方法应用脂质体法将pEGFP-nm23-H1野生型和突变型质粒(WT,H118F,S120G,P96S,S44A)转染人大细胞肺癌细胞株L9981,采用免疫共沉淀与Western blot方法检测野生型和突变型nm23-H1蛋白与Ras支架蛋白KSR的关系。结果在转染了野生型和突变型质粒的五个细胞株中,鼠抗nm23-H1免疫沉淀物在86KDa处可检测到KSR的阳性条带,而各组KSR的量应用单因素方差分析比较无显著性差异(F=0.190,P=0.938)。结论本研究结果表明nm23-H1与KSR存在相互作用,但这种相互作用与nm23-H1有无突变及突变位点无关,nm23-H1可能是通过KSR参与肺癌Ras信号传导的。
杨雪琴姚毅冰周清华马力朱大兴肖文李昌林马家宝张芷旋高利伟朱文王艳萍
关键词：NM23-H1肺肿瘤
Raf全长及氨基端、羧基端真核表达载体的构建和表达
2008年
背景与目的Raf是Ras-Raf-MEK-ERK信号转导通路中的关键分子,在多种人类肿瘤中存在高度活化,然而其生物学功能和详细调节机理目前尚未完全明了。本研究旨在构建人Raf基因全长(Raf-1),氨基端(N-Raf)及羧基端(C-Raf)真核表达载体,并观察其在293T细胞中的表达情况。方法通过PCR方法扩增Raf-1,N-Raf和C-Raf目的片段,利用基因重组技术构建pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体,并进行酶切和测序鉴定。鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞,Western blot检测目的蛋白的表达。结果酶切和测序结果均证实pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体的序列和编码框均正确无误,转染后的293T细胞经Western Blot检测可正确表达目的蛋白。结论本研究成功构建了pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体并可在293T细胞中表达,为今后进一步研究Raf基因的生物学机理奠定了基础。
王卓敏陈军万海粟刘红雨朱文肖文范羽李永文孙丽亚周清华
关键词：RAF基因重组真核表达
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