袁铸
- 作品数：13 被引量：58H指数：4
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 小鼠凋亡相关新基因PNAS-4真核表达载体的构建、表达及体外抗肿瘤作用被引量：3
- 2007年
- 目的:对小鼠凋亡相关新基因PNAS-4(mPNAS-4)进行克隆,构建其真核表达载体,并在小鼠Lewis肺癌细胞系LL2中转染表达;探讨mPNAS-4基因转染LL2细胞过表达所诱导的体外肿瘤细胞凋亡情况。方法:用RT-PCR从小鼠肝脏组织中克隆mPNAS-4编码区cDNA,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4;用脂质体将pcDNA3.1(+)-mPNAS-4转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞;用RT-PCR检测转染细胞中mPNAS-4的过表达情况;通过MTT、流式细胞术(FCM)及DNALadder分别检测转染细胞的增殖与凋亡情况。结果:从小鼠肝脏组织中克隆到mPNAS-4全长cDNA并成功构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4,转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞可使其mRNA表达明显上调。mPNAS-4过表达能抑制LL2细胞增殖并诱导其凋亡。结论:mPNAS-4过表达对小鼠Lewis肺癌LL2细胞的生长有明显的抑制和诱导凋亡作用。
- 袁铸严飞赵新宇邓洪新李炯
- 关键词：基因转染真核表达凋亡
- 产胶原酶地衣芽孢杆菌菌种的分离、筛选及发酵条件研究被引量：15
- 2000年
- 从成都皮革厂等处采集的样品中 ,分离筛选到一株胶原酶的产生菌J 4 8,菌种鉴定为地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis) .该菌产酶的最适碳源为蔗糖 ,氮源为明胶 ,起始 pH为7.5,容瓶装量为 10mL ,种龄是 2 4h ,接种量为 6 % .在此条件下 ,摇瓶振荡发酵后 ,酶活达 2 5U/mL发酵液 ,较原发酵培养基发酵后的酶活提高 35% .
- 金敏王忠彦胡承袁铸胡永松
- 关键词：胶原酶地衣芽孢杆菌菌种发酵药物
- 地衣芽孢杆菌JF-20菌原生质体的形成及其再生的最佳条件被引量：4
- 2001年
- 以地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis)JF 2 0菌为出发菌株 ,对原生质体制备及再生的各种影响因素进行了研究 .在原生质体形成及再生的最佳条件下制备原生质体 ,结果发现 :JF 2 0菌的原生质体形成率及再生率分别达到 86 .9%和 38.4% .并通过光学显微镜技术 。
- 袁铸王忠彦胡承金敏胡永松
- 关键词：地衣芽孢杆菌原生质体
- UPLC/MS/MS法同时测定人血浆中人参皂苷Re和Rg1含量及对参附冻干粉针剂的药代动力学评价被引量：10
- 2009年
- 目的在人血浆中建立一种快速灵敏的同时测定人参皂苷Re和Rg1含量的超高效液相色谱串联质谱(UPLC/MS/MS)检测方法。方法采用Acquity UPLCTM BEHC18分析柱(1.7μm,2.1×100mm),三重四级杆质谱检测器,在多反应检测模式(MRM)下分别选择质荷比(m/z)969.6→789.3、m/z823.5→643.2和m/z803.5→387.1对Re、Rg1和内标地高辛进行检测。18名健康志愿者提供的324份血浆样品用该方法进行检测,并进行参附冻干粉针剂的药代动力学研究。结果每个样品仅需要50μL的血浆,洗脱时间仅需4min。Re和Rg1的最低检测限均为0.025ng/mL。在0.1～200ng/mL内线性关系良好(r2>0.999)。人参皂苷Re及Rg1在人血浆中的药动学参数均符合三室开放模型。结论本法具有灵敏、快速的特点,适用于人参皂苷Re、Rg1血药浓度的同时测定以及静脉滴注参附冻干粉针剂药代动力学的研究。
- 李夏汤明海张帆袁铸陈俐娟王先火
- 关键词：药代动力学
- 云杉种源间苹果酸脱氢酶同工酶变异的研究被引量：8
- 2002年
- 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ,研究了云杉不同种源的苹果酸脱氢酶 (MDH)同工酶的遗传变异。结果表明 :不同种源的MDH的酶带有较大的差异 ,不同的地理、生态气候因子如海拔、纬度、经度等均会影响云杉同工酶酶谱的某些复等位基因的分化 ,即弱带有差异而强带变化不大。不同种源的同工酶形成与不同生态环境相对应的特征谱带。
- 罗建勋林宏辉孙鹏李晓清袁铸晏婴才
- 关键词：云杉苹果酸脱氢酶同工酶
- 人凋亡相关新基因PNAS-4的克隆、原核表达与纯化
- 2012年
- 目的克隆人的凋亡相关新基因PNAS-4到原核表达载体,表达并纯化人的PNAS-4蛋白。方法用RT-PCR的方法从人肺腺癌A549细胞中扩增出人的PNAS-4基因。将其克隆到pGEX-6P-1载体,转化到大肠杆菌BL21。用IPTG诱导表达,并用亲和层析的方法纯化出人的PNAS-4蛋白;然后使用质谱分析鉴定纯化后的蛋白质。结果扩增出的人PNAS-4基因与GenBank上的序列完全一致。纯化的人PNAS-4融合蛋白在相对分子质量约50×103处可见特异性条带;经质谱鉴定证实所纯化的蛋白质为PNAS-4融合蛋白。结论成功表达和纯化了人PNAS-4蛋白,为今后对人PNAS-4基因的功能研究打下基础。
- 曹康林超戴谦李磊雷庭钧谢意汤明海袁铸
- 关键词：蛋白表达纯化
- 人DRR1真核表达载体和稳定转染HEK293细胞株的建立及鉴定
- 2011年
- 目的:构建人DRR1基因的真核表达载体,通过转染HEK293细胞建立稳定的DRR1表达细胞株。方法:通过改造质粒pIRES,在其MCS1和MCS2中分别引入串联亲和纯化标签和绿色荧光蛋白基因,形成一个新的表达质粒pFSIG。将PCR扩增的DRR1基因插入pFSIG中进行酶切和测序验证。用重组质粒pFSIG-DRR1转染HEK293细胞,通过G418和绿色荧光检测筛选DRR1稳定表达细胞株。通过W esternb lot鉴定FS-DRR1蛋白的表达。结果:酶切、PCR和测序证实成功构建了pFSIG-DRR1表达质粒;建立了稳定转染的HEK293细胞系,W estern b lot检测证明重组DRR1在该细胞系中成功表达。结论:融合有串联亲和纯化标签的DRR1真核表达载体的构建和稳定表达细胞HEK293株的建立为在生理条件下研究DRR1的相互作用蛋白奠定了基础。
- 赵新宇聂春来袁铸
- 关键词：肿瘤抑制基因肿瘤发生串联亲和纯化
- 小鼠PNAS-4基因的克隆、特征及其对顺铂与和厚朴酚抗肿瘤效果的增强作用
- 恶性肿瘤是一类常见的疾病，对人类的健康和生命威胁极大。尽管新型药物不断涌现，治疗方案不断更新，但化疗仍然是现代医学治疗肿瘤的主要方法。顺铂是广泛使用的细胞毒性化疗药物，其抗癌机制是通过形成DNA链间与链内交联而诱导细胞周...
- 袁铸
- 关键词：顺铂厚朴酚抗肿瘤效果肿瘤血管形成肿瘤化疗
- 纤维素酶的发酵及应用前景被引量：14
- 1999年
- 本文介绍了纤维素酶对纤维素的降解机理,并对其发酵生产及应用前景作了阐述。
- 袁铸邓小晨王忠彦胡永松
- 关键词：纤维素纤维素酶降解机理单细胞蛋白发酵
- 全文增补中
- hPNAS-4腺病毒载体的构建及其体外抗肿瘤作用
- 2009年
- 用RT-PCR从A293细胞中克隆hPNAS-4编码区cDNA,将其酶切后连接至pEN-TRll载体上,再通过同源重组作用将hPNAS-4基因片段重组至腺病毒骨架载体上,构建腺病毒重组质粒,最后经293细胞的包装扩增后得到携带hPNAS-4基因的重组腺病毒;将重组腺病毒体外感染人肺癌A549细胞;RT-PCR测得感染细胞中hPNAs-4表达明显上调,MTT测得细胞增殖受到明显抑制,流式细胞仪测得细胞凋亡率明显升高,琼脂糖凝胶电泳显示其基因组DNA有明显的梯状条带.以上结果表明hPNAS-4过表达对A549肿瘤细胞的生长有明显的抑制和诱导凋亡作用.
- 倪睿严飞袁铸李炯文艳君
- 关键词：基因治疗腺病毒肿瘤凋亡
