黄伟民
- 作品数：9 被引量：52H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺生物反应器的研究被引量：2
- 2004年
- 目的构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)乳腺定位表达载体,使其在牛乳汁中高效表达,从而建立牛乳腺生物反应器。方法RT-TD-PCR法克隆目的基因,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含t-PA-cDAN的乳腺定位表达载体;采用显微注射法和乳腺注射法将融合基因转入小鼠的受精卵和小鼠及牛的乳腺组织中。结果显微注射法和乳腺注射法转基因后,t-PA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论所构建的乳腺定位表达载体可有效地使t-PA基因在小鼠和牛乳汁中表达,t-PA基因的表达不受转基因方法的影响,但t-PA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异,可能受着不同的因素或调控系统的影响。
- 安靓李振林黄伟民黄吴键李进
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂乳腺生物反应器转基因动物
- 小鼠输精管内转染法建立人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)乳腺定位表达生物反应器的研究被引量：12
- 1999年
- 外源基因受精卵内显微注射目前仍然是种常用的建立转基因动物的方法,但此方法操作复杂,成本高。因此利用精子作为载体将外源基因带入卵细胞内建立转基因动物成了极具吸引力的方法,并且已有一些成功的报道。虽然该方法简单,但总体来说可重复性较差。我们在建立乳腺定位表达人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)小鼠模型中,对此方法做了改进,即将脂质体包裹的外源基因在小鼠输精管及附睾管内转染精子,而非以往的在体外转染,结果:(1)五只转染小鼠,术后10天内共使10只正常母鼠受精;(2)共繁殖出79只首建者小鼠,存活42只;(3)用PCR检测首建者小鼠外源基因的整合,阳性率为7/42(16.67%);(4)用凝胶平板溶圈试验检测5只PCR阳性的雌性首建者小鼠泌乳期乳汁中的活性tPA,3/5表达,表达量在12—20IU/ml之间(约相当于48—80ng/ml);(5)PCR检测4只子一代小鼠外源基因的遗传情况,阳性率为2/4。
- 黄伟民赖良学乔桂林岳军明安靓王凯付殿国殷震李进
- 关键词：TPA乳腺转基因
- 乳腺注射法表达人组织型纤溶酶原激活剂的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 :构建tPA乳腺定位表达载体 ,使其在牛乳汁中高效表达 ,观察目的基因表达的规律及其影响因素 ,为建立新型牛乳腺生物反应器提供理论基础。方法 :RT PCR法克隆目的基因 ,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含tPA cDNA的乳腺定位表达载体 ;采用乳腺注射法将融合基因转入小鼠及牛的乳腺组织中。结果 :乳腺注射外源基因后 ,tPA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论 :乳腺注射法可使目的基因在乳腺组织中稳定地表达较长的时间 ,其表达量与显微注射法没有明显的差异 ,表明外源基因的表达不受转基因方法的影响。但tPA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量 ,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异 ,可能受着不同的因素或调控系统的影响。
- 安靓李振林黄伟民黄吴建李进
- 关键词：乳腺组织乳汁注射法RT-PCR法人组织型纤溶酶原激活剂外源基因
- hEPO乳腺定位表达载体的构建及其在大鼠和家兔乳腺中的暂时表达被引量：21
- 1999年
- 将人红细胞生成素（ｈＥＰＯ）基因组ＤＮＡ（ｇＤＮＡ）与大鼠乳清酸蛋白（ＷＡＰ）基因的上游调控序列融合，分别构建了ｐＷＡＰ－ＥＰＯ－ＷＡＰ３′ＵＴＲ（ｐＷＥ３′）和ｐＣＭＶ－ＷＡＰ－ＥＰＯ－ＢＧＨｐｏｌｙＡ（ｐＣＷＥＡ）２个乳腺定位表达载体。表达载体经脂质体包裹后，以显微外科方法，经乳腺导管注入妊娠中后期大鼠和家兔乳腺内，进行暂时表达。分别于大鼠分娩后４８、７２ｈ，家兔分娩后１～１０ｄ采奶，ＥＬＩＳＡ方法检测乳汁中ＥＰＯ含量。ｐＷＥ３′和ｐＣＷＥＡ在大鼠乳汁中的含量分别为０．４０～０．４５μｇ／Ｌ和０．４５～０．７１μｇ／Ｌ；在家兔乳汁中的含量分别为０．３００～０．３６９μｇ／Ｌ和０．６８６～０．７１０μｇ／Ｌ。
- 乔贵林阎喜军岳军明梅柱中赖良学黄伟民贾补年殷震
- 关键词：人红细胞生成素乳腺基因转移
- 人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺表达的研究
- 2004年
- 目的：采用基因工程和转基因技术，以牛乳腺作为生物发酵器，生产天然高活性的人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)，探索生物制药的新方法。方法：RT-PCR法克隆人tPA cDNA，经体外扩增、测序和酶切鉴定后，装入含酪蛋白基因β-casein启动子的乳腺特异性表达载体上，扩增、酶切、纯化。采用脂质体介导法，
- 安靓李振林黄伟民李进
- 关键词：乳腺表达RT-PCR法体外扩增特异性表达人组织型纤溶酶原激活剂克隆人
- 乳腺定位表达载体在小鼠乳腺中的活性检测被引量：1
- 2000年
- 目的 检测乳腺定位表达载体在动物乳腺中的表达活力。方法与结果 将乳腺定位表达载体乳清酸蛋白(人组织型纤溶酶原激活剂（WAP-tPA）通过乳腺导管直接注入妊娠后期小鼠的乳腺中，待小鼠产子、泌乳后，检测出小鼠乳汁中tPA的表达量为80 ng/ml。结论 此方法可以作为从动物整体水平上检测乳腺定位表达载体表达效力的一种简便而有效的方法。
- 黄伟民赖良学乔桂林岳军明安靓王凯付殿国殷震李进
- 关键词：基因转染乳腺小鼠
- 建立转基因动物或生物反应器的方法
- 本发明涉及一种建立转基因动物或生物反应器的方法。克服现有方法中使精子带上外源基因操作复杂,操作过程缓慢,精子的成活率低,数量小的缺点。将通过不同方法处理的外源基因置入雄性动物的输精管或附睾管或睾丸网或储精池内,在输精管或...
- 黄伟民
- 文献传递
- 人红细胞生成素转基因小鼠乳腺生物反应器的建立被引量：2
- 1999年
- 将 ２．４ ｋｂ 的人红细胞生成素（ｈ Ｅ Ｐ Ｏ）基因组基因（ｇ Ｄ Ｎ Ａ）ｍ ｉｎｉｇｅｎｅ 克隆于 ０．９７７ ｋｂ 大鼠乳清酸蛋白（ Ｗ Ａ Ｐ）５′调控序列下游和 ０．８５ ｋｂ Ｗ Ａ Ｐ３′侧翼序列上游，构建了 ｈ Ｅ Ｐ Ｏ 乳腺定位表达载体 ｐ Ｗ Ａ Ｐ Ｅ Ｐ Ｏ Ｗ Ａ Ｐ３′ Ｕ Ｔ Ｒ（ｐ Ｗ Ｅ３′）。载体经 Ｓａｃ Ｉ Ｉ酶切、回收并纯化后作为目的基因，通过显微注射方法导入小鼠受精卵的雄原核，共注射 ５００ 枚卵，移植 ３００ 枚卵至 ２９ 只假孕母鼠输卵管内，获得仔鼠 ５５ 只。采取鼠尾，提取基因组。经 Ｐ Ｃ Ｒ 检测，阳性鼠 ２２ 只； Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 检测，阳性鼠 １６ 只，其中 ９ 只母鼠，７ 只公鼠。将 １６ 只首建者小鼠分别与非转基因鼠交配，共获得 Ｆ１ 代仔鼠 １５７ 只。应用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法对 Ｆ１ 代小鼠进行检测，结果首建者１ 号母鼠所生的 ６ 只仔鼠中有 ３ 只为阳性。与此同时，于 ９ 只雌性首建者分娩后第 １０ 天采奶，应用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法对乳汁中的 Ｅ Ｐ Ｏ 进行检测，结果 ６ 只母鼠获得表达，表达量为 ０．１２～１．５９ μｇ／ Ｌ。
- 乔贵林岳军明梅柱中阎喜军赖良学黄伟民赵君殷震
- 关键词：人红细胞生成素转基因小鼠乳腺
- 脂质体介导外源基因体外转染精子的研究被引量：16
- 2000年
- 目的 为探索精子作为外源基因的载体建立转基因小鼠的可行性。 方法 我们从性成熟小鼠的输精管及部分附睾管中取出精子，与阳离子脂质体包裹的DNA混合孵育之后将其注入超排卵小鼠的阴道内，48 h后收集II细胞期胚胎细胞。结果 (1) 精子可转染上外源DNA，转染率达53%；(2) 转染有外源DNA的精子可使II细胞期胚胎携带上外源基因，携带率为11.5%。结论 小鼠输精管及附睾管内的精子可被脂质体包裹的外源DNA转染并可作为载体将此外源DNA带入早期胚胎。
- 黄伟民赖良学乔桂林岳军明安靓王凯付殿国殷震李进
- 关键词：脂质体精子转基因动物基因转染
