宋慧文
- 作品数：8 被引量：15H指数：3
- 供职机构：深圳市宝安区人民医院更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PTPN1基因siRNA表达载体的构建和鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的构建可沉默PTPN1基因的siRNA(siRNA)表达载体,并鉴定它对大鼠心肌细胞PTPN1基因的沉默率。方法合成3对发夹siRNA模版寡核苷酸链,退火形成双链后插入pSilencer载体,构建成可沉默PTPN1基因的siRNA表达载体,通过酶切和测序鉴定构建的siRNA表达载体,并导入培养的大鼠心肌细胞,通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹分析导入了siRNA表达载体的大鼠心肌细胞PTP1B的表达水平。结果酶切鉴定和测序结果证实构建的3个siRNA表达载体构建正确。实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测显示构建的3个siRNA表达载体的干扰率分别为73.2%、84.7%及32.5%。它们的干扰效果被免疫印迹分析所证实。结论干扰率为84.7%的表达载体为构建成功的siRNA表达载体,可用于心肌细胞PTPN1基因的功能研究。
- 宋慧文凌文革李大志
- 关键词：SIRNA
- 人CAPN3基因在骨骼肌和白细胞中存在不同的剪切
- 2010年
- 目的 比较CAPN3基因在外周血白细胞和骨骼肌组织中的剪切变异,探讨用外周血白细胞CAPN3 mRNA进行基因诊断的可行性.方法 抽提正常人外周血和骨骼肌组织中总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应和DNA测序确定CAPN3基因的cDNA序列,比较外周血白细胞和骨骼肌组织中CAPN3cDNA序列.结果 由骨骼肌组织抽提的RNA进行逆转录合成cDNA为CAPN3基因全长cDNA,包含全部24个外显子;而由外周血白细胞抽提的RNA进行逆转录合成cDNA为CAPN3基因非全长cDNA,包含23个外显子,缺失了第15外显子.结论 人的CAPN3基因在骨骼肌和外周血自细胞中存在着不同的剪切方式,若用外周血抽提RNA进行CAPN3基因的编码序列分析时会漏检第15外显子的突变.这提示从cDNA水平分析CAPN3基因突变时应采用患者肌肉组织,而非外周血白细胞.
- 孙顺昌彭运生宋慧文林志坚贺敬波
- 关键词：骨骼肌白细胞
- 轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因（ AC）n（AT）x Ty多态性分析被引量：2
- 2012年
- 目的 探讨轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因（AC）n（AT）xTy多态性与其基因突变的相关性.方法 选取2009年2月至2010年7月深圳市宝安区人民医院89例已知基因突变类型的轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者和110名中国汉族人群健康对照者.抽取所有个体外周静脉血,抽提基因组DNA,通过聚合酶链反应扩增β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区序列,经DNA测序确定（AC）n（AT）xTy序列的多态性,分析（AC）n（AT）xTy多态性与其基因突变的关系.轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者和健康对照者间（AC）n（AT）xTy多态性单倍型频率的比较,以及同一单倍型患者的不同突变类型发生率间的比较采用x2检验.结果 在轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区存在9种（AC）n（AT）xTy多态性序列,分别是（AC）2（AT）7T7、（AC）2 （AT）8T5、（AC）3 （AT）7T5、（AC）2 （AT）9T5、（AC）2 （AT）8T9、（AC）3 （AT）8T5、（AC）2（AT）10T3、（AC）2（AT）7T5和（AC）2（AT） 11T3,其中（AC）2 （AT）7T7和（AC）2（AT）8T5是常见单倍型.轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的（AC）2（AT）7T7、（AC）3 （AT）7T5和（AC）2（AT）8T9单倍型频率分别为38.8％（ 69/178）、11.8％（ 21/178）、9.0％（ 16/178）,显著高于健康对照组的24.1％（53/220）、5.4％ （12/220）、3.2％ （7/220）,差异有统计学意义（x2=9.966、4.371、6.093,P＜0.05）；（AC）2 （AT）9T5单倍型频率为10.1％（18/178）,显著低于健康对照组的33.2％ （73/220）,差异有统计学意义（x2=29.691,P＜0.01）；而（AC）2 （AT）8T5单倍型频率在患者组和健康对照组分别为25.3％ （45/178）和29.1％ （64/220）,差异无统计学意义（x2 =0.718,P＞0.05）.在（AC）2 （AT）7T7单倍型患者中,codon41/42（-TTCT）和IVS-II-654（C→T）的突变率分别为59％（ 10/17）和29％（5/17）,�
- 孙顺昌周指明宋慧文彭运生贺敬波莫宝妹
- 关键词：Β地中海贫血珠蛋白类多态现象
- BCL11A基因对γ-珠蛋白基因转录的影响被引量：3
- 2013年
- 本研究旨在探讨B细胞淋巴瘤/白血病11A(B-cell lymphoma/leukemia 11A,BCL11A)基因对γ-珠蛋白基因转录的影响。通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术沉默人红白血病细胞(K562细胞)的BCL11A基因的表达,用实时荧光定量RT-PCR法定量细胞内γ-珠蛋白基因mRNA水平,分析BCL11A基因对γ-珠蛋白基因转录的调控作用。结果表明,所构建的4个siRNA表达载体对BCL11A基因表达的沉默率分别为49.7%、55.4%、78.2%和84.1%。将沉默率为84.1%的siRNA表达载体转导K562细胞,K562细胞的γ-珠蛋白基因的转录水平较转导对照载体质粒升高了2.4倍。结论:BCL11A基因表达被沉默后γ-珠蛋白基因mRNA水平升高显示BCL11A基因对γ-珠蛋白基因表达可能存在负调控。
- 孙顺昌周指明涂传清彭运生宋慧文
- 关键词：转录
- PTP-1B小干扰RNA对缺氧/复氧诱发的大鼠心肌细胞凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 目的探讨蛋白质酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)小干扰RNA对缺氧/复氧诱发的大鼠心肌细胞凋亡的影响及其分子机制。方法分离的大鼠心肌细胞在PTP-1B小干扰RNA转染后培养24h,然后缺氧处理4h,再复氧6h(4H/6R)。心肌细胞的凋亡用TUNEL染色法测定;Western blot检测心肌细胞PTP-1B和磷酸化Akt的表达水平;比色法衡量凋亡酶Caspase3和Caspase8的活性;共免疫沉降法检测与Fas受体结合的PTP-1B的数量。结果缺氧/复氧的处理不仅严重损伤了培养的大鼠心肌细胞,同时也上调了心肌细胞PTP-1B蛋白的表达水平;PTP-1B小干扰RNA显著地减少了缺氧/复氧诱发的心肌细胞凋亡,PTP-1B小干扰RNA组与阴性对照组的凋亡指数分别为:(12.1±1.4)%和(23.2±1.6)%,P<0.05;与阴性对照组比较,PTP-1B小干扰RNA显著增加了Akt的磷酸化水平,抑制了Caspase3和Caspase8的酶活性,同时降低了PTP-1B与Fas受体的结合。结论PTP-1B是一个缺氧/复氧(4H/6R)诱发的心肌细胞凋亡的关键调节因子,针对PTP-1B的小干扰RNA可有效地抑制心肌细胞的损伤。其机制可能与增加的Akt磷酸化水平,凋亡酶Caspase3和Caspase8的酶活性被抑制,以及PTP-1B与Fas受体结合的减少相关联。
- 宋慧文
- 关键词：细胞凋亡
- 苦参素防治兔心房颤动心肌纤维化的实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨苦参素防治心肌纤维化的效果。方法实验兔30只分为正常对照组、模型组及苦参素治疗组,每组10只,通过置于与脉冲发生器相连的电极建立兔心房颤动心肌纤维化模型。用图像分析系统测定兔左心房胶原分数、标准化血管周胶原面积及肌间动脉平均中膜厚度,采用RT-PCR法定量兔心肌组织转化生长因子β1mRNA的表达。结果经苦参素治疗后心房颤动心肌纤维化兔的左心房胶原分数、标准化血管周胶原面积及肌间动脉平均中膜厚度分别为0.057±0.029、0.82±0.33和(9.96±0.97)μm,低于模型组的0.112±0.047、1.75±0.48和(15.49±1.51)μm。兔心肌血管周围胶原及间质纤维化明显减少,心肌组织表达的转化生长因子β1mRNA降低了54.4%。结论苦参素具有一定的抗兔心肌纤维化作用,可能具有防治心肌纤维化的效果。
- 宋慧文
- 关键词：心肌纤维化心房颤动
- 苦参素对实验性兔心房颤动左房纤维化细胞间黏附分子-1表达的影响被引量：4
- 2009年
- 目的:观察苦参素对实验性兔心房颤动左房纤维化心肌细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨其抗心肌纤维化的作用机制。方法:通过建立肺静脉源性房颤心肌纤维化动物模型,同时用苦参素进行防治,观察血清C反应蛋白(CRP)、透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)水平及心肌组织病理学变化,用免疫组织化学方法观察心肌组织中ICAM-1的表达。结果:苦参素防治组血清CRP、HA、LN水平显著低于模型组(P<0.05),心肌组织纤维化程度及炎症活动度明显降低,心肌组织ICAM-1表达水平下降。结论:苦参素可降低心肌组织ICAM-1的表达水平,减轻心脏炎症活动度,可能与其抗心肌纤维化作用相关。
- 宋慧文王琳
- 关键词：苦参碱细胞间黏附分子心内膜心肌纤维化症
- 苦参素对兔实验性左房纤维化的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:观察苦参素对实验性兔心房颤动左房纤维化心肌组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ),Ⅳ型胶原(CⅣ)表达的影响,探讨苦参素对心房颤动左房纤维化的干预作用及可能的机制。方法:通过建立肺静脉源性房颤心肌纤维化动物模型,同时用苦参素进行干预,用免疫组织化学方法和放射免疫法检测心肌组织中TIMP-1和PCⅢ、CⅣ的表达,并作网状纤维及HE染色,观察心肌胶原及组织病理学变化。结果:苦参素防治组的心肌胶原表达量显著低于模型组,且苦参素防治组TIMP-1表达量较模型组显著下降(P<0.05)。结论:苦参素具有抗心肌纤维化作用,其机制可能是通过抑制TIMP-1、PCⅢ和CIV的合成而实现。
- 宋慧文
- 关键词：纤维化心房苦参素基质金属蛋白酶抑制因子-1
