张春华
- 作品数：9 被引量：19H指数：3
- 供职机构：云南省妇幼保健院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目云南省科技厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- NOX4敲减的A375稳转细胞株及其构建方法
- 本发明属于医学分子生物学领域。本发明所述的NOX4敲减的A375稳转细胞株是利用逆转录病毒载体pSuper.retro.puro将模板DNA双链中的F链5'-GATCCCCGGGCTAGGATTGTGTCTAAGCTTC...
- 朱月春张春华李波张正况应敏
- 文献传递
- G6PD通过细胞周期蛋白D1/D2调控人黑色素瘤细胞周期的进程被引量：4
- 2011年
- 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)在人皮肤黑色素瘤A375细胞中处于高表达与高活性状态,但G6PD在黑色素瘤发生发展过程中的作用及其具体机制尚不明确.本文在前期运用siRNA方法构建G6PD敲减的黑色素瘤A375稳转细胞(A375-G6PDΔ)基础上,构建表达载体pBabe-puro-G6PDWT在A375-G6PDΔ细胞中过表达野生型的G6PD基因,从而构建G6PD表达恢复的稳转细胞(A375-G6PDΔ-G6PDWT).3株细胞A375-WT、A375-G6PDΔ和A375-G6PDΔ-G6PDWT经G6PD酶活性测定、MTT测定、克隆形成实验、流式细胞仪分析细胞周期和Western印迹检测.结果显示,A375-G6PDΔ-G6PDWT细胞的G6PD蛋白表达量(0.847±0.080)及其活性(0.394±0.029)分别是A375-G6PDΔ的3.28倍(P<0.01)和7.34倍(P<0.01),分别是A375-WT细胞的91.57%和2.12倍(P<0.05).与A375-WT细胞相比,A375-G6PDΔ细胞G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,增殖指数PI降低了25.70%(P<0.05),细胞周期蛋白D1/D2、细胞周期蛋白E表达分别下降37.4%、54.3%(P<0.01)和17.3%;而A375-G6PDΔ-G6PDWT细胞呈现G1/S期阻滞解除,细胞周期蛋白D1/D2蛋白分别恢复到A375-WT细胞的89.5%和87.6%,细胞周期蛋白E表达未见恢复,呈现生长增殖和克隆形成率的恢复并接近于A375-WT细胞.结果提示,G6PD通过细胞周期蛋白D1/D2调控人皮肤黑色素瘤A375细胞G1期向S期转换的进程,这为黑色素瘤发病机制的研究提供了新的思路.
- 唐琼玲张春华胡滔陈龙杨银峰李治纲朱月春
- 关键词：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶黑色素瘤细胞周期细胞周期蛋白
- 敲减NADPH氧化酶4能降低STAT3活性抑制人黑色素瘤A375细胞的增殖被引量：1
- 2015年
- NADPH氧化酶参与细胞活性氧族(ROS)的生成过程,而ROS与肿瘤细胞增殖密切相关.为了阐明NADPH氧化酶影响黑色素瘤A375细胞增殖的分子机制,本文首先应用荧光定量PCR和Western印迹证实NOX4为人黑色素瘤A375细胞的NADPH氧化酶功能核心亚基;随后根据NOX4基因设计3条干扰序列和对照序列并连接到p Super-retro-puro载体,经鉴定后转化E.coli DH5α感受态细胞、筛选有效干扰序列并用于逆转录病毒包装,病毒液感染A375细胞并经嘌呤霉素筛选10d,构建了NOX4缺陷的A375稳转细胞珠(A375-NOX4Δ),其NOX4的mRNA和蛋白表达分别下降了66.02%和77.35%,伴随NADPH氧化酶活性和ROS水平分别下降了79.17%和64.16%;MTT、Ed U法检测显示,A375-NOX4Δ细胞的增殖能力比A375-WT细胞明显降低、倍增时间延长,增殖细胞数量下降了68.27%(P<0.01),呈现G1→S期阻滞;Western blot检测表明A375-NOX4Δ细胞的cyclin D1、CDK4分别下降了55.7%(P<0.01)和64.8%(P<0.01),而P53、P21分别增加了6.89倍(P<0.01)和3.27倍(P<0.01),STAT3、P-STAT3分别下降了51.80%(P<0.05)和82.58%(P<0.01);电泳迁移率变动分析(EMSA)表明,A375-NOX4Δ细胞的STAT3-DNA结合活性明显降低.上述结果提示,敲减A375细胞的NOX4表达可能通过减少ROS生成使得STAT3磷酸化水平及其结合DNA的活性下降,最终导致A375-NOX4Δ细胞增殖减少、呈现G1→S期阻滞,这为黑色素瘤发病机制研究提供了新思路及可能的药物作用靶点.
- 蔡天池王艳玲张春华张正陈龙李玉倩朱月春
- 关键词：NADPH氧化酶黑色素瘤
- G6PD缺陷通过Caspase-3和PARP-1诱导人黑色素瘤细胞凋亡被引量：3
- 2010年
- 葡糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)在许多肿瘤细胞中高表达,但其发生的作用机理目前仍然不明确.以正常人表皮黑色素细胞(HEM)、野生型人黑色素瘤A375细胞(A375-WT)和G6PD缺陷的A375细胞(A375-G6PDΔ)为对象,经real-time PCR、Western印迹和紫外分光光度法分析显示,A375-WT细胞的mRNA、G6PD蛋白和G6PD活性分别是HEM细胞的1.89倍(P<0.05)、6.86倍(P<0.01)和2.30倍(P<0.05).Annexin V/PI流式细胞仪和Western印迹测定表明,A375-G6PDΔ的凋亡率是A375-WT的5.10倍(P<0.01),活化半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)增高1.84倍(P<0.01)以及89 kD多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)生成增加2.87倍(P<0.01).分光光度法分析显示,A375-G6PDΔ的NADPH和GSH分别降低了72.30%(P<0.01)和27.39%(P<0.05),并伴有75.43%的H2O2增高(P<0.01).结果提示,G6PD在黑色素瘤细胞中高表达和高活性,而敲减G6PD表达通过caspase-3和PARP-1信号诱发人黑色素瘤细胞凋亡,这为深入揭示黑色素瘤的发生机理提供了新思路。
- 郝晓培任娜唐琼玲张春华胡滔陈龙朱月春
- 关键词：黑色素瘤细胞凋亡
- G6PD缺陷抑制人黑色素瘤细胞裸鼠移植瘤的生长被引量：1
- 2012年
- 敲减葡糖6-磷酸脱氢酶(G6PD)表达的人黑色素瘤A375细胞(A375-G6PDΔ)呈现生长增殖抑制和凋亡率升高.为明确G6PD缺陷对裸鼠体内成瘤的影响及其可能机制,用A375-WT与A375-G6PDΔ细胞制作裸鼠荷瘤模型,观察体内瘤体生长,real-time PCR、免疫组织化学染色与紫外分光光度法分别检测瘤体组织G6PD mRNA、G6PD蛋白及酶活性,Western印迹分析凋亡相关蛋白,分光光度法测定NADPH和GSH/GSSG水平.结果显示,A375-G6PDΔ细胞注射组的裸鼠成瘤时间延长,瘤体生长明显减慢,瘤体的体积与质量显著低于A375-WT细胞注射组(P<0.01);与A375-WT细胞注射组相比,A375-G6PDΔ细胞注射组的裸鼠瘤体组织中G6PD mRNA表达、G6PD阳性细胞数与G6PD活性分别降低了87.10%、77.20%与75.77%(P<0.01),G6PD、p53和Bcl-2的表达分别降低了67.92%、65.54%和62.32%(P<0.01),Fas升高了86.38%(P<0.01),NADPH和GSH/GSSG分别降低了74.37%和86.02%(P<0.01).结果提示,G6PD缺陷可能通过减少核酸等合成的原料、改变细胞内氧化还原状态及凋亡相关蛋白表达抑制裸鼠瘤体生长与增殖,这为黑色素瘤发生和治疗研究提供了新的线索.
- 胡滔陈龙张春华唐琼玲李波张正蔡天池朱月春
- 关键词：黑色素瘤裸鼠凋亡蛋白
- NOX4敲减的A375稳转细胞株及其构建方法
- 本发明属于医学分子生物学领域。本发明所述的NOX4敲减的A375稳转细胞株是利用逆转录病毒载体pSuper.retro.puro将模板DNA双链中的F链5'-GATCCCCGGGCTAGGATTGTGTCTAAGCTTC...
- 朱月春张春华李波张正况应敏
- 文献传递
- 地特胰岛素治疗妊娠合并糖尿病的临床效果观察被引量：11
- 2019年
- 目的探讨地特胰岛素在妊娠合并糖尿病治疗中的疗效和安全性。方法确诊妊娠合并糖尿病后给予1～2周运动饮食治疗,其间监测血糖和尿酮;筛查出血糖控制效果不佳和饮食控制后出现饥饿性酮症增加热量血糖超标的孕妇,需胰岛素治疗的290例,按照知情同意的原则,分为地特胰岛素组147例和精蛋白胰岛素组143例,按照各自药物治疗方案观察至分娩。结果两组在年龄、孕前体质指数、孕期体质量增长及新生儿出生体质量上无统计学差异,具有可比性;地特组血糖达标时间短于精蛋白组,两组差异有统计学意义(P<0.01);地特组血糖达标所需胰岛素使用量少于精蛋白组,差异有统计学意义(P<0.01);两组孕妇不良妊娠结局发生率中,产后大出血、妊娠期高血压及产褥感染率比较,差异无统计学意义(P>0.05);精蛋白组孕妇发生巨大儿和大于/小于胎龄儿不良妊娠结局的比例高于地特组孕妇;地特组孕妇发生过敏的比例高于精蛋白组孕妇。结论地特胰岛素具有安全有效平稳的降糖效果,使用总量低,注射次数少,患者依从性好,值得临床推荐使用。
- 何春霖郑佳瑞张春华
- 关键词：妊娠合并糖尿病地特胰岛素
- G6PD缺陷诱发人黑色素瘤A375细胞凋亡机制研究被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺陷对A375细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:以A375-WT和A375-G6PDΔ细胞为模型,用Real-time PCR检测G6PD mRNA表达,蛋白质印迹法检测G6PD、Bcl-2、Bcl-xL、STAT5和P-STAT5蛋白的表达,紫外分光光度法测定G6PD酶活性,Heochst 33342/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组化观察STAT5蛋白核迁移。结果:A375-WT和A375-G6PDΔ细胞中G6PD mRNA分别为0.545±0.13和0.207±0.03,降低了62.02%,t=-5.854,P=0.028;G6PD蛋白分别为0.975±0.16和0.227±0.10,降低了76.72%,t=-21.593,P=0.002;G6PD酶的比活性分别为(0.088±0.023)和(0.024±0.008)U/mg;降低了72.23%,t=-7.390,P=0.018;A375-G6PDΔ细胞的凋亡率为(8.62±1.67)%,比A375-WT细胞的(2.37±0.78)%升高了3.64倍,t=-12.163,P=0.007;A375-G6PDΔ细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量为0.245±0.037,比A375-WT细胞的0.578±0.073降低了57.61%,t=-16.021,P=0.004;Bcl-xL的表达量为0.138±0.019,比A375-WT细胞的0.287±0.067降低了51.92%,t=-5.377,P=0.033;A375-G6PDΔ细胞的P-STAT5/STAT5比值为0.72±0.201,比A375-WT细胞的2.28±0.367降低了68.4%(P=0.004),细胞核内STAT5表达为0.051±0.012,比A375-WT细胞核的STAT5蛋白(0.093±0.018)降低了45%(P=0.007),STAT5核迁移减少。结论:转录因子STAT5磷酸化降低、活性下降是G6PD缺陷所诱发的人黑色素瘤A375细胞凋亡的重要因素之一,为黑色素瘤发生及治疗的研究提供了新的思路。
- 张正蔡天池王艳玲唐琼玲张春华陈龙朱月春
- 关键词：黑色素瘤G6PD缺陷STAT5A375细胞
- 基于16S核糖体RNA基因测序的苯丙酮尿症患儿肠道菌群分析
- 2023年
- 目的 基于16S核糖体核糖核酸(16S ribosomal ribonucleic acid,16S rRNA)基因高通量测序,探讨苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患儿与正常儿童肠道菌群的差异。方法 于2020年选取云南省新生儿疾病筛查中心管理的儿童为研究对象,根据儿童是否患有PKU进行分组,每入组1例PKU患儿(该组患儿均接受特殊饮食治疗),招募1~2例与PKU患儿具有相近年龄、相同居住地和户籍的正常儿童入组对照组。共纳入PKU组儿童11例,对照组儿童16例。采集两组儿童的新鲜粪便,并提取粪便DNA对16S rRNA基因V3~V4区进行高通量测序。利用BGI微生物扩增子分析平台对测序数据进行分析,并对两组儿童的肠道菌群情况进行比较。结果 PKU组和对照组儿童肠道菌群的α多样性的比较差异无统计学意义(P> 0.05),但β多样性的比较差异有统计学意义(R=0.084,P <0.05)。在门水平上,厚壁菌门和拟杆菌门为PKU组和对照组肠道菌群的优势菌门。在属水平上,拟杆菌属、粪杆菌属、毛螺菌属、芽殖菌属等菌属为PKU组和对照组肠道菌群的优势菌属。对照组中拟杆菌属和粪杆菌属的相对丰度均高于PKU组,且差异具有统计学意义(P=0.011,P=0.007)。PKU组中普氏菌属的相对丰度高于对照组(P=0.012)。结论 PKU患儿与正常儿童的肠道菌群的种类和相对丰度存在差异,该差异可能与PKU患儿接受特殊饮食治疗有很大关系,并可能影响PKU患儿的生长发育。
- 张春华杨静苏莹陈谦邹团标
- 关键词：苯丙酮尿症肠道菌群
