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登革病毒2型prM蛋白的表达及其抗体的ADE作用研究被引量：3: 2013年; 目的建立登革病毒2型(DENV-2)前膜蛋白(prM)的原核稳定表达系统,并制备prM多克隆抗体,研究登革病毒特异性prM抗体的中和作用及抗体依赖性感染增强作用(ADE)。方法应用大肠杆菌表达系统表达全长DENV-2 prM蛋白,经电洗脱法纯化重组蛋白,免疫家兔,制备兔抗prM蛋白多抗;应用空斑减数中和试验(PRNT)和流式细胞术(FCM)分别检测prM兔多克隆抗体的中和作用和ADE效应。结果重组prM蛋白在原核系统可获得高效表达,prM蛋白的表达量占大肠杆菌全菌蛋白的15%左右;其免疫血清经Western blotting法证实为登革病毒特异性prM多克隆抗体,用ELISA法检测效价为1:800 000。PRNT表明,prM抗体对成熟和不成熟DENV-2感染C6/36细胞中和作用有限,最大中和程度分别为49.84%和50.22%;FCM结果表明,prM抗体能在较大的抗体稀释度范围(10-2～10-6)增强成熟和不成熟DENV-2感染,且在10-3稀释度时达到最高峰。结论重组DENV-2 prM蛋白有很强的免疫原性,其诱生的prM抗体对登革病毒仅有较弱的中和活性,但却呈现出较强的ADE作用,揭示prM抗体是一种感染增强性抗体。; 冯俊杰罗雅艳周俊梅方丹云曾谷城晏辉钧江丽芳; 关键词：登革病毒2型

登革病毒TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：10: 2012年; 目的建立登革病毒TaqMan实时荧光定量PCR快速检测方法及应用于临床。方法根据1～4型登革病毒3'端非编码区的一段高度保守序列,设计一套型通用的引物和TaqMan MGB探针,以4个血清型登革病毒标准株为标准,以日本乙脑病毒和丙肝病毒作阴性对照,以包含登革病毒2型标准株(DENV-2NGC株)3'非编码区349bp片段的质粒DNA作标准品,对引物和TaqMan MGB探针的特异性、灵敏度进行分析,从而建立登革病毒实时荧光定量PCR检测方法。用该法对登革病毒野毒株和10份登革病毒患者血清进行检测。结果 TaqMan实时荧光定量PCR检测的1～4型登革病毒标准株及野毒株均为阳性,日本乙脑病毒和丙肝病毒均为阴性;检测灵敏度可达到每反应2个基因拷贝;检测的10份登革患者血清样本中,8份检测结果为阳性。结论 TaqMan MGB实时荧光定量PCR方法是一个快速、特异性强、敏感性高的检测登革病毒的方法,适用于登革病毒的临床早期诊断。; 罗雅艳冯俊杰方丹云江丽芳; 关键词：登革病毒 TAQMAN MGB 实时定量RT-PCR

型通用登革病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测试剂盒: 本发明公开了型通用登革病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测试剂盒，通用引物序列包括正向引物序列GCATATTGACGCTGGGAGAGA和反向引物序列GCGTTCTGTGCCTGGAATG，探针序列为AGATCCTGC...; 江丽芳罗雅艳刘岩; 文献传递

登革2型病毒prM蛋白B细胞表位的筛选与鉴定: 目的:分析登革病毒prM蛋白的抗原优势表位,研究其免疫原性,免疫保护性;并研究prM型交叉单抗和该单抗对应的表位肽抗血清对DENV1～4型成熟病毒颗粒及登革病毒2型不成熟病毒颗粒(immature DENV2,imDEN...; 罗雅艳冯俊杰周俊梅喻治准方丹云晏辉钧曾谷城江丽芳; 关键词：登革病毒表位噬菌体肽库; 文献传递

我国主要养殖罗非鱼遗传多样性与遗传关系的SSR与AFLP分析: 罗非鱼具有生长快、繁殖力强、食性杂、病害少、抗病力强、适应性强等特点，是我国重要的水产养殖品种。但近年来，由于罗非鱼种间易自然交配繁殖，加之不合理引种、遗传渐渗、近亲繁殖等原因，我国现有罗非鱼种质状况出现退化和混杂，表现...; 罗雅艳; 关键词：罗非鱼; 文献传递

基于DENV-prM/E基因构建DENV-VLP及其免疫学特性: 2014年; [目的]构建和表达登革病毒4型病毒样颗粒,初步研究其免疫学特性.[方法]用RT-PCR法扩增DENV4-prM/E基因,构建重组质粒pGAPZ-sprM/E-D4,转化X33酵母菌株,SDS-PAGE、Western Blot鉴定目的蛋白表达.切片电镜检测病毒样颗粒,蔗糖密度梯度离心纯化.免疫三组Balb/C小鼠,每组15只.采用间接ELISA检测抗原特异性抗体,间接免疫荧光法检测免疫血清与天然病毒粒子的结合,流式细胞术分析小鼠脾淋巴细胞表型,酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测脾分泌IFN-γ、TNF-α和IL-10的细胞.[结果]重组质粒在酵母中以病毒样颗粒形式表达,为直径20～ 30hm的球形颗粒,VLP免疫组刺激小鼠产生抗体与灭活病毒组相似,流式及ELISPOT结果提示DENV4-VLP与灭活病毒组相似,用登革病毒抗原刺激后,分泌IFN-γ,TNF-α的细胞数目明显增加,各组分泌IL-10细胞数目的整体水平均不高.[结论]应用毕赤酵母表达系统成功表达获得了DENV4-VLP,具有良好的免疫原性,可诱导Balb/C小鼠产生有效的体液免疫应答,并能诱导Th1型免疫应答而诱导Th2型免疫应答较弱.; 方丹云刘岩喻治准罗雅艳江丽芳周俊梅; 关键词：登革病毒病毒样颗粒免疫应答

登革病毒prM抗体的中和作用及ADE作用研究被引量：5: 2016年; 【目的】研究登革病毒(DENV)前膜蛋白(pr M)多克隆抗体对不同型别登革病毒的中和作用和抗体依赖性感染增强作用(ADE),为进一步阐明pr M蛋白在登革病毒致病与免疫过程中的重要作用提供依据。【方法】采用ELISA方法检测登革热患者血清中是否存在pr M抗体;用重组登革病毒2型(DENV-2)pr M蛋白免疫家兔,制备pr M蛋白多克隆抗体;采用空斑减数中和试验和流式细胞术检测pr M抗体对4种血清型登革病毒(DENV-1、DENV-2、DENV-3、DENV-4)的中和作用及ADE作用。【结果】登革热患者血清中存在特异性pr M抗体;pr M抗体对4种血清型登革病毒只有部分中和作用,但在一定浓度范围内对DENV1-4型均有明显的感染增强活性,且对异型DENV的感染增强作用强于同型,其中对登革病毒2型未成熟颗粒(im DENV-2)的感染增强作用最为明显。【结论】登革热患者血清存在pr M特异性抗体;pr M抗体对不同血清型DENV均只有较弱的中和活性,但却呈现出较强的ADE效应,证明登革病毒pr M抗体是一种感染增强性抗体。; 司露露郭晓兰郭鹏娟王颖罗雅艳崔国辉方丹云周俊梅晏辉钧江丽芳; 关键词：登革病毒多克隆抗体

登革病毒疫苗研究进展被引量：3: 2011年; 登革热是由登革病毒（DENV）引起的急性传染病,广泛流行于全球热带和亚热带地区,是世界上发病患者数最多、分布最广的虫媒病毒病。疫苗是预防登革热最有效的途径,然而,迄今仍没有安全有效的疫苗用于登革热的特异性预防。; 罗雅艳江丽芳; 关键词：亚热带地区急性传染病虫媒病毒病登革热

我国罗非鱼主要引进种的遗传多样性与亲缘关系的SSR,AFLP与RAPD分析: 运用SSR,AFLP和RAPD三种分子标记分析了我国8个主要引进罗非鱼品种的遗传多样性与亲缘关系。10条RAPD随机引物工产生147个位点,其中130个多态性位点（88.44%）。运用4对AFLP引物对共检测到197条带...; 罗雅艳蒙子宁王乐范斌刘晓春张勇林浩然; 关键词：亲缘关系罗非鱼 SSR AFLP; 文献传递

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