冯俊杰
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中山大学中山医学院微生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 登革病毒2型prM蛋白的表达及其抗体的ADE作用研究被引量：3
- 2013年
- 目的建立登革病毒2型(DENV-2)前膜蛋白(prM)的原核稳定表达系统,并制备prM多克隆抗体,研究登革病毒特异性prM抗体的中和作用及抗体依赖性感染增强作用(ADE)。方法应用大肠杆菌表达系统表达全长DENV-2 prM蛋白,经电洗脱法纯化重组蛋白,免疫家兔,制备兔抗prM蛋白多抗;应用空斑减数中和试验(PRNT)和流式细胞术(FCM)分别检测prM兔多克隆抗体的中和作用和ADE效应。结果重组prM蛋白在原核系统可获得高效表达,prM蛋白的表达量占大肠杆菌全菌蛋白的15%左右;其免疫血清经Western blotting法证实为登革病毒特异性prM多克隆抗体,用ELISA法检测效价为1:800 000。PRNT表明,prM抗体对成熟和不成熟DENV-2感染C6/36细胞中和作用有限,最大中和程度分别为49.84%和50.22%;FCM结果表明,prM抗体能在较大的抗体稀释度范围(10-2～10-6)增强成熟和不成熟DENV-2感染,且在10-3稀释度时达到最高峰。结论重组DENV-2 prM蛋白有很强的免疫原性,其诱生的prM抗体对登革病毒仅有较弱的中和活性,但却呈现出较强的ADE作用,揭示prM抗体是一种感染增强性抗体。
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- 关键词：登革病毒2型
- 登革2型病毒prM蛋白B细胞表位的筛选与鉴定
- 目的:分析登革病毒prM蛋白的抗原优势表位,研究其免疫原性,免疫保护性;并研究prM型交叉单抗和该单抗对应的表位肽抗血清对DENV1～4型成熟病毒颗粒及登革病毒2型不成熟病毒颗粒(immature DENV2,imDEN...
- 罗雅艳冯俊杰周俊梅喻治准方丹云晏辉钧曾谷城江丽芳
- 关键词：登革病毒表位噬菌体肽库
- 文献传递
- 登革病毒TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：9
- 2012年
- 目的建立登革病毒TaqMan实时荧光定量PCR快速检测方法及应用于临床。方法根据1～4型登革病毒3'端非编码区的一段高度保守序列,设计一套型通用的引物和TaqMan MGB探针,以4个血清型登革病毒标准株为标准,以日本乙脑病毒和丙肝病毒作阴性对照,以包含登革病毒2型标准株(DENV-2NGC株)3'非编码区349bp片段的质粒DNA作标准品,对引物和TaqMan MGB探针的特异性、灵敏度进行分析,从而建立登革病毒实时荧光定量PCR检测方法。用该法对登革病毒野毒株和10份登革病毒患者血清进行检测。结果 TaqMan实时荧光定量PCR检测的1～4型登革病毒标准株及野毒株均为阳性,日本乙脑病毒和丙肝病毒均为阴性;检测灵敏度可达到每反应2个基因拷贝;检测的10份登革患者血清样本中,8份检测结果为阳性。结论 TaqMan MGB实时荧光定量PCR方法是一个快速、特异性强、敏感性高的检测登革病毒的方法,适用于登革病毒的临床早期诊断。
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- 关键词：登革病毒TAQMANMGB实时定量RT-PCR
- 登革2型病毒prM蛋白的分泌表达及B细胞表位的筛选与鉴定
- 罗雅艳冯俊杰周俊梅喻治准方丹云江丽芳
