马振宁
- 作品数：5 被引量：22H指数：4
- 供职机构：福州大学生物科学与工程学院药物生物技术研究所更多>>
- 发文基金：福建省科技计划重点项目福建省教育厅科技项目福建省教育厅A类人文社科/科技研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 基于单克隆抗体的多元弧菌流式细胞术检测技术的研究被引量：3
- 2012年
- 【目的】建立一种基于单克隆抗体的多元弧菌流式细胞仪检测技术。【方法】以副溶血弧菌表面蛋白r-OmpW的单克隆抗体(mAb)为基础,以细胞染色率为指标优化流式细胞仪检测副溶血弧菌时所需mAb的反应浓度和反应时间。通过菌落数对比评价在优化条件下流式细胞术方法的准确度、检出限和精密度。根据所建立的流式细胞术平台分析鉴定单抗对其它5种多元弧菌的特异性。【结果】流式细胞仪检测副溶血弧菌时所需r-OmpW单克隆抗体的优化反应浓度为20 mg/L,反应时间为60 min。当菌浓在104 107cells/mL范围时,检测值可信度较高,可特异性识别5种病原弧菌。对含不同菌体浓度的样品进行重复检测,变异系数均在7%以内。【结论】所建立的这种基于单克隆抗体的多元弧菌流式细胞仪检测技术可快速准确地检测多种病原弧菌。
- 林海英马振宁郑允权郭养浩唐凤翔
- 关键词：单克隆抗体流式细胞术
- 抗OmpW单克隆抗体的制备与特性鉴定被引量：4
- 2011年
- 目的:制备抗副溶血弧菌OmpW的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法:利用生物信息学方法分析多种病原弧菌的OmpW氨基酸序列,原核表达并纯化制备r-OmpW。以r-OmpW作为免疫抗原制备鼠mAb,以五种病原弧菌为筛选抗原。采用Western blot、流式细胞术(FCM)、间接ELISA法鉴定mAb的特性。结果:生物信息学分析表明OmpW是弧菌内高度保守的外膜蛋白。成功筛选到3株杂交瘤细胞株,其中,杂交瘤细胞株S5C10分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG3,腹水mAb效价达4.6×104。该mAb同时识别副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌和创伤弧菌,而与荧光假单胞菌、温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌及大肠杆菌无明显的交叉反应。结论:制备的mAb可特异性识别上述5种病原弧菌,为进一步建立广谱弧菌的免疫学检测方法提供了工具。
- 马振宁郑磊林海美郑允权唐凤翔石贤爱郭养浩
- 关键词：弧菌原核表达单克隆抗体流式细胞术
- 弧菌广谱性外膜蛋白抗原筛选及其单抗的交叉免疫原性研究被引量：4
- 2012年
- 采用生物信息学方法分析几种病原性弧菌OmpK、OmpU和OmpW蛋白种间和种内的同源性,筛选高保守性蛋白OmpW.成功构建具备稳定分泌抗体IgG3的细胞株S5C10,鉴定其对5种弧菌具有特异性交叉免疫反应,而对9种非弧菌无免疫反应.研究结果显示OmpW可作为广谱性疫苗成分,其单抗可特异性检测多元弧菌.
- 林海英马振宁郑允权郭养浩唐凤翔
- 关键词：弧菌广谱性外膜蛋白单抗
- 副溶血弧菌融合蛋白FlaA-OmpK疫苗的制备及免疫保护作用被引量：6
- 2012年
- 采用延伸PCR技术拼接副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus VpATCC17802)的外膜蛋白K基因ompK和鞭毛蛋白A基因flaA,获得融合基因flaA-ompK。制备高纯度的r-OmpK,r-FlaA及r-FlaA-OmpK蛋白。分别以所制备的OmpK、FlaA-OmpK和混合蛋白OmpK+FlaA作为免疫原,通过口服及注射的方法免疫黑石斑鱼(Centropristisstriata),研究其免疫原性及对野生副溶血弧菌(Vp89)感染的免疫保护作用。ELISA分析结果表明,注射FlaA-OmpK组抗体效价最高,是OmpK组的2倍,是混合蛋白组的4倍,注射FlaA-Ompk提供的免疫保护率达到80%。本工作制备了FlaA-Ompk肠溶口服微球疫苗,口服免疫组血清抗体效价低于注射组血清抗体效价,口服FlaA-Ompk提供的免疫保护率达到50%。研究结果显示融合蛋白FlaA-Ompk具有良好的免疫原性,可作为多元弧菌疫苗抗原成份。
- 郑磊郭养浩马振宁樊海平吴斌唐凤翔
- 关键词：副溶血弧菌免疫原性口服疫苗
- 美洲黑石斑鱼血清IgM纯化及其兔抗血清部分特性被引量：5
- 2011年
- 采用蛋白A亲和层析法对健康美洲黑石斑鱼血清中的免疫球蛋白(IgM)进行分离纯化。实验结果表明,蛋白A亲和层析法一步纯化即可得到电泳纯IgM,其重链和轻链的分子量约74.1 ku和26.0 ku。用纯化的黑石斑鱼IgM免疫实验兔,获得效价高达1∶128 000的兔抗黑石斑鱼IgM血清。Western-blot和间接ELISA检测证明,本工作制备的兔抗美洲黑石斑鱼IgM血清具有较高的特异性,为后续的黑石斑鱼免疫学研究奠定了基础。
- 郑磊马振宁吴斌樊海平唐凤翔郭养浩
