付远辉
- 作品数：51 被引量：54H指数：4
- 供职机构：北京交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 抗人呼吸道合胞病毒融合糖蛋白单克隆抗体的制备及体外鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的:获得能稳定分泌抗人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)融合糖蛋白(fusion glycoprotein,F)单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株,以期用于RSV感染的早期诊断和被动免疫治疗研究。方法:通过杂交瘤技术制备可特异性识别RSV F的单抗,体外鉴定生物学特性。结果:获得了可分泌抗RSV F蛋白的杂交瘤细胞株F8,体外连续传代培养2个月,能稳定分泌抗体F8,培养上清效价为1∶1000,亲和常数(Ka)为6.8×108L/mol。F8属IgG1型抗体,可特异性识别RSV F1亚单位的AA 205-222。免疫酶法蚀斑减少中和实验证实F8具有体外中和活性及融合抑制活性。结论:获得具有中和活性的抗RSV F蛋白的单克隆抗体,为RSV感染的早期诊断及被动免疫治疗等奠定了基础。
- 张梅王小波付远辉方璇王鑫张莹何金生
- 关键词：人呼吸道合胞病毒单克隆抗体杂交瘤技术
- 靶向树突状细胞的呼吸道合胞病毒F重组蛋白的构建与体外活性分析
- 2016年
- 分析以人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,RSV)融合糖蛋白(fusion glycoprotein,F)为抗原靶向DEC205/CD205受体策略对重组F蛋白表达及活性的影响.F蛋白是RSV的重要中和抗原,克隆RSV F蛋白胞外区的编码基因至可识别鼠树突状细胞(Dendritic cells,DCs)DEC205受体的单链抗体(single chain antibody of anti-DEC205,scDEC)的C端,构建可表达重组F蛋白(scDECF)的质粒pVAX1/scDECF,Western blot方法检测scDECF的表达,免疫荧光法和流式细胞术检测表达的scDECF与DEC205受体的结合活性.经Western blot证实在pVAX1/scDECF转染的293T细胞成功表达了scDECF.将所获得的细胞培养上清与表达鼠DEC205受体的细胞CHOmDEC205孵育,用免疫荧光和流式细胞术证实:与作为对照的重组F蛋白scISOF相比,所获得的scDECF与CHOmDEC205细胞呈现明显的结合.本研究成功表达了重组蛋白scDECF,且所获得的重组蛋白scDECF具有与表达DEC205受体的细胞特异性结合的活性.
- 华颖彭向雷付远辉郑妍鹏洪涛何金生
- 关键词：呼吸道合胞病毒树突状细胞
- 抗呼吸道合胞病毒融合蛋白单链抗体的筛选及初步鉴定
- 2009年
- 目的:从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗呼吸道合胞病毒F蛋白的单链抗体。方法:以RSV F蛋白为靶抗原,通过"吸附-洗涤-洗脱-扩增"过程从天然人源性噬菌体抗体库中筛选特异性抗F蛋白单链抗体。5轮筛选后,单克隆经ELISA检测,阳性克隆进行核酸序列分析,并将阳性克隆噬菌体感染E.coliHB2151,经IPTG诱导,制备抗RSV F蛋白的可溶性单链抗体,并进行Western blot及Dot blot分析。结果:经过筛选,获得了18株能与F蛋白特异性结合的阳性克隆,取OD值最高的克隆E4经测序并检索Kabat数据库分析,显示其基因与人免疫球蛋白可变区基因具有高度同源性,Western blot及Dot blot分析表明为单链抗体。结论:利用天然人源性噬菌体抗体库技术制备出高特异性的人源性抗RSV F蛋白单链抗体。
- 魏薇包福祥何金生付远辉王小波郑娴娴张莹
- 关键词：人呼吸道合胞病毒F蛋白噬菌体抗体库单链抗体
- 呼吸道合胞病毒全长融合前融合糖蛋白核苷酸序列、重组腺病毒载体及其应用产品
- 本发明提供了一种呼吸道合胞病毒全长融合前融合糖蛋白核苷酸序列、重组腺病毒载体及其应用产品。该全长融合前融合糖蛋白核苷酸序列包括S155C、S190F、V207L和S290C四个突变位点，保留了融合糖蛋白的跨膜区及胞内区，...
- 何金生付远辉刘美琴彭向雷郑妍鹏黄蕾
- 反向遗传学在呼吸道合胞病毒减毒活疫苗研究中的应用被引量：4
- 2011年
- 人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)是引起婴幼儿下呼吸道感染的最重要的病毒病原,减毒RSV活疫苗能模拟自然感染充分活化机体固有免疫系统,并诱导产生体液免疫和细胞免疫,不会产生疾病增强作用,经黏膜途径应用,能突破母传抗体的干扰,因而受到广泛关注,反向遗传学(reverse genetics)在减轻野生型RSV毒力和增强其免疫原性等方面具有传统减毒技术不可比拟的优势,所以综述了反向遗传学在RSV减毒活疫苗研究中的应用。
- 付远辉何金生洪涛
- 关键词：呼吸道合胞病毒反向遗传学减毒活疫苗
- 两种表达水痘-带状疱疹病毒的gE蛋白的重组腺病毒及应用
- 本发明提供了两种表达水痘‑带状疱疹病毒的gE蛋白的重组腺病毒及应用，涉及生物医药技术领域。本发明提供了两种基于水痘‑带状疱疹病毒gE蛋白的核苷酸序列制备的重组腺病毒，以可表达水痘‑带状疱疹病毒gE蛋白的重组腺病毒同源或异...
- 付远辉何金生黄蕾虞结梅彭向雷郑妍鹏
- 辅助病毒依赖型腺病毒载体转基因的体外表达效率被引量：1
- 2010年
- 构建可表达增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(Helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和体外表达鉴定。荧光显微镜证实HDAd/EGFP可表达,电镜下观察到经CsCl纯化后的腺病毒的典型形态。分光光度计法测定病毒的浓度为4.0×1012颗粒数(Virus particle,vp)/mL。与可表达EGFP的第一代腺病毒载体(First generation adenoviral vector,FGAd)FGAd/EGFP进行了体外感染和转基因表达效率的比较研究,分别用约2000vp/细胞的HDAd/EGFP和FGAd/EGFP感染A549细胞,流式细胞仪检测EGFP的表达情况。通过相同时间点流式细胞仪分析EGFP的表达情况,可见HDAd/EGFP感染早期的A549细胞较FGAd/EGFP有更高的荧光表达率及更高的表达强度,显示HDAd载体具有转基因瞬时高表达的特性,是一种更有价值的疫苗载体。
- 郑娴娴何金生付远辉徐少华谢灿石长信张梅王小波洪涛
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白转基因表达
- 表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白的重组腺病毒的免疫保护作用
- 人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,RSV)广泛分布于世界各地,是导致婴幼儿严重下呼吸道感染的最重要的病毒病原之一,老年人和免疫缺陷病人也易遭受RSV引起的严重感染。RS...
- 付远辉
- 关键词：疫苗载体重组腺病毒辅助病毒博士学位论文滴鼻免疫
- 文献传递
- 呼吸道合胞病毒载体疫苗研究进展被引量：4
- 2012年
- 人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)是引起婴幼儿下呼吸道感染的最重要的病毒病原,RSV载体疫苗可在人细胞内从头合成,形成的蛋白质构象与RSV自然感染后表达的完全相同,不会导致抗原表位的丧失或变化,形成的免疫力更利于抵抗随后的自然感染;经黏膜途径免疫不会产生疾病增强作用,且能突破母传抗体的干扰,因而受到广泛关注。对近年来RSV载体疫苗的研究进展进行了综述。
- 付远辉何金生洪涛
- 关键词：呼吸道合胞病毒载体疫苗
- 呼吸道合胞病毒全长融合前融合糖蛋白核苷酸序列、重组腺病毒载体及其应用产品
- 本发明提供了一种呼吸道合胞病毒全长融合前融合糖蛋白核苷酸序列、重组腺病毒载体及其应用产品。该全长融合前融合糖蛋白核苷酸序列包括S155C、S190F、V207L和S290C四个突变位点，保留了融合糖蛋白的跨膜区及胞内区，...
- 何金生付远辉刘美琴彭向雷郑妍鹏黄蕾
- 文献传递
