崔勇
- 作品数：63 被引量：149H指数：7
- 供职机构：山东省寄生虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省医药卫生科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学核科学技术更多>>
- pEGFP-N1-HBsAg-ROP2多基因重组表达质粒的构建及表达鉴定
- 2018年
- 目的构建p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2重组质粒,并转染HEK293T细胞进行表达鉴定,为弓形虫病核酸疫苗的研制奠定基础。方法根据HBs Ag基因序列和pc DNA3-p30-ROP2重组质粒酶切位点设计引物,PCR扩增HBs Ag基因,经酶切、连接、转化,利用HBs Ag基因替换p30基因,构建pc DNA3-HBs Ag-ROP2重组质粒;经HindⅢ和KpnⅠ双酶切,将HBs Ag-ROP2片段与p EGFP-N1真核表达载体相连,构建p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞,观察其蛋白表达水平。结果 HBs Ag片段PCR产物约700 bp,与理论值相符;构建pc DNA3-HBs Ag-ROP2重组质粒,双酶切电泳后得到约5.4 kb和1.9 kb的两条带,与预期结果相符。p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2双酶切后产生约4.7 kb和1.9 kb的条带,经测序鉴定,与Gen Bank发表的序列同源性为99.84%。目的基因已成功转染入HEK293T细胞中,且正确表达,蛋白浓度为3.08 mg/ml。结论成功构建p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞能正确表达。
- 马荣肖婷李瑾孙慧徐超徐超尹昆尹昆赵桂华崔勇朱嵩刘功振魏庆宽
- 关键词：乙型肝炎PEGFP-N1质粒构建
- 弓形虫ROP2基因的克隆与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的体外扩增弓形虫棒状体分泌抗原2(ROP2)靶基因,构建真核表达载体pc-DNA3-ROP2。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据基因库ROP2基因序列设计合成1对引物,应用PCR扩增ROP2基因片段,回收纯化后克隆入TA载体质粒pUCm-T;用限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ双酶切该重组子,将切下的ROP2基因在T4DNA连接酶作用下插入真核细胞表达载体质粒pc-DNA3,并进一步作双酶切、PCR及测序鉴定。结果以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出1.7kbROP2基因片段,克隆于pUCm-T载体中,再将ROP2基因亚克隆于真核表达载体质粒pc-DNA3,经筛选鉴定,构建pc-DNA3-ROP2重组质粒;测序结果显示,重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP2的抗原蛋白。结论弓形虫ROP2基因片段,经TA克隆及亚克隆,构建弓形虫pc-DNA3-ROP2重组质粒。
- 魏庆宽张佃波李瑾李桂萍王洪法崔勇柏雪莲付斌刘玉冰宰德富黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：弓形虫克隆基因重组
- 弓形虫棒状体蛋白ROP16的研究进展
- 棒状体蛋白16(ROP16)是弓形虫棒状体蛋白家族成员,这类蛋白结构存在丝氨酸、苏氨酸激酶区,是弓形虫入侵过程中重要毒力因子.ROP16可分泌到宿主细胞核,能磷酸化宿主细胞的转录活化因子STAT,干扰宿主细胞信号通路传导...
- 刘功振崔勇李瑾魏庆宽黄炳成尹昆赵桂华徐超王洪法
- 关键词：弓形虫磷酸化
- 新疆喀什地区人群利什曼原虫感染检测被引量：1
- 2010年
- 目的了解新疆喀什地区人群利什曼原虫感染现状,为制定防治规划提供依据,并比较PCR和ELISA检测利什曼原虫无症状感染的效能。方法选取2009年9月新疆喀什地区黑热病流行严重的1县3乡4个调查点,采集黑热病患者及其家属和邻居的血液样品(每份血样分抗凝血和非抗凝血),采用ELISA检测血清中利什曼原虫特异性抗体;以RV1、RV2和KI3A、KI3B为引物,用PCR检测血样中利什曼原虫特异DNA片段。结果 PCR检测利什曼原虫特异DNA片段的阳性率为82.67%(62/75),ELISA检测利什曼原虫特异性抗体的阳性率为69.33%(52/75)。结论现阶段新疆喀什地区人群利什曼原虫感染率仍然颇高,尤其表现在与患者密切接触的患者家属和邻居;PCR是检测无症状利什曼原虫感染较敏感的方法 。
- 屈金辉王洪法赵桂华仲维霞凯赛尔窦海平崔勇李瑾孔凡红
- 关键词：黑热病感染率ELISAPCR
- 弓形虫棒状体蛋白ROP38的原核表达与鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的原核表达弓形虫棒状体蛋白ROP38,并对重组蛋白rROP38的反应原性进行鉴定。方法根据已发表的ROP38基因序列设计引物,通过RT-PCR方法扩增弓形虫RH株的ROP38基因。将ROP38部分基因克隆到原核表达载体p ET-28a(+)后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS-PAGE分析表达情况,并通过Western blot鉴定其反应原性。结果 SDS-PAGE显示在上清和包涵体均有rROP38表达,分子量约为43k D。Western blot结果显示,rROP38蛋白能被His标签抗体和感染弓形虫的人阳性血清识别,说明ROP38具有良好的反应原性,可以作为潜在的血清学诊断抗原。结论本研究成功获得了具有良好反应原性的弓形虫重组蛋白rROP38。
- 崔勇李瑾王洪法仲维霞孙慧赵桂华尹昆徐超肖婷张晓玉于泓刘学峰刘功振
- 关键词：弓形虫原核表达
- 弓形虫ROP21基因的原核表达与免疫学鉴定被引量：9
- 2016年
- 目的原核表达弓形虫棒状体ROP21基因,并对rROP21蛋白进行免疫学鉴定。方法根据已发表的ROP21基因序列设计引物,通过RT-PCR方法扩增弓形虫RH株的ROP21基因。将ROP21基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)后转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达目的蛋白,纯化后进行SDS-PAGE分析、Western blot及IFA分析。结果经PCR和酶切鉴定,成功构建重组表达载体。重组质粒转化BL21(DE3)后经IPTG诱导,重组蛋白(rROP21)以包涵体形式高效表达,分子质量单位约为45ku。Western blot显示重组rROP21蛋白能被his标签抗体及弓形虫病患者血清识别。用rROP21免疫小鼠,获得滴度为1∶104的抗体血清。IFA显示弓形虫速殖子体内存在ROP21蛋白。结论构建的重组质粒pET28a-ROP21表达的弓形虫rROP21具有抗性,可作为血清学诊断候选抗原,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 李瑾孙慧崔勇王洪法刘学峰于泓赵桂华尹昆仲维霞徐超肖婷魏庆宽黄炳成刘功振
- 关键词：弓形虫原核表达BLOT
- 敲除pck A基因的结核杆菌引起的免疫反应的研究被引量：4
- 2005年
- 研究结核杆菌pckA基因编码的磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(PEPCK)诱导机体产生的保护性免疫反应。用敲除pckA基因的牛结核杆菌BCG和野生型BCG分别感染小鼠,取肝、肺、脾进行病理分析,并进行脾细胞培养,检测CD4+、CD4+/CD8+、细胞因子IFNI-γI、L-12和TNF等。用敲除pckA基因的BCG感染的小鼠比野生型BCG感染的小鼠体内产生的结核结节少且不典型,炎性程度低。野生型BCG感染的小鼠脾脏内的CD4+T细胞和CD4+/CD8+、细胞因子IFN-γ、IL-12、TNF均明显高于敲除pckA基因BCG感染的小鼠。pckA基因为结核杆菌生长所必需,其编码产物PEPCK能够刺激机体产生免疫反应,是一种很好的疫苗候选分子。
- 柏雪莲刘克义于进芝李桂萍李瑾魏庆宽韩广东崔勇
- 关键词：结核杆菌细胞因子免疫反应
- 弓形虫TgMIC16多克隆抗体制备 纯化及其在亚细胞定位中的应用
- 2018年
- 目的制备并纯化弓形虫微线蛋白16(TgMIC16)兔源多克隆抗体,并利用制备的多克隆抗体对该蛋白进行亚细胞定位。方法利用原核表达、纯化的TgMIC16重组蛋白与等体积弗氏佐剂混合,背部皮下、多点注射免疫新西兰大白兔,于第3次加强免疫后的第14天收集兔血清,Protein A亲和纯化柱纯化,用ELISA和蛋白质印迹(Western blotting)分别检测抗体效价和抗体特异性。用弓形虫RH株速殖子感染人包皮成纤维(HFF)细胞,以制备的多克隆抗体为一抗,采用间接免疫荧光(IFA)检测TgMIC16在感染细胞中的定位。结果间接ELISA结果显示,制备的TgMIC16多克隆抗体滴度为1∶512 000;Western blotting结果显示,TgMIC16抗体特异性良好;IFA结果显示,TgMIC16定位在弓形虫微线体。结论本研究制备并纯化了抗弓形虫TgMIC16兔源多克隆抗体,并成功应用于TgMIC16在弓形虫微线体的免疫荧光定位。
- 魏冬冬王龙江李瑾崔勇尹昆黄炳成魏庆宽雷战孙慧
- 关键词：弓形虫多克隆抗体免疫荧光定位
- 抗弓形虫感染DNA疫苗的研究
- 目的:研究一廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治。方法:收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因的引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增RO...
- 魏庆宽张佃波李瑾傅婷霞柏雪莲崔勇王洪法付斌刘玉冰宰德福黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护作用
- 文献传递
- siRNA干扰DNALI1基因对HEK-293细胞增殖与迁移的影响
- 2019年
- 文章探讨了siRNA干扰DNALI1基因对HEK-293细胞增殖、迁移的影响。通过培养HEK-293细胞株,分别转染siRNA DNALI1组(DNALI1-homo-66组、DNALI1-homo-426组与DNALI1-homo-777组)和对照组。siRNA DNALI1组细胞中DNALI1 mRNA表达量均低于对照组,三个干扰组中DNALI1-homo-66组干扰效率最高,差异均具有统计学意义(P<0.05);与阳性对照组和阴性对照组相比,siRNA DNALI1组细胞转染24-48h细胞增殖能力明显减弱,差异均具有统计学意义(P<0.05)。在细胞水平可通过RNA干扰特异性抑制DNALI1基因来抑制细胞的增殖和迁移能力,为研究DNALI1基因在细胞中的作用机制奠定了基础。
- 崔勇刘功振
- 关键词：RNAI增殖
