彭宜
- 作品数：64 被引量：331H指数：11
- 供职机构：广西兽医研究所更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划广西特聘专家专项经费资助项目国家百千万人才工程更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒RT-LAMP检测方法的建立被引量：34
- 2010年
- 目的:建立牛病毒性腹泻病毒(BVDv)的环介导体外等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法:根据BVDv的5'端非编码区序列,在保守区的8个位点设计LAMP特异性引物(2对特异性引物和1对环引物),对反应条件和试剂浓度进行优化,建立恒温(63.5℃)、快速(65min)的检测方法。结果:建立的方法特异性好,检测其他对照病毒均为阴性;灵敏度高,最低可检测到1个拷贝的阳性质粒,可通过观察浑浊度或加入染料后直接判定扩增结果。结论:建立了用于检测BVDv的LAMP方法,该方法简便、快速、特异性好、灵敏度高,适合基层和现场检测。
- 范晴谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基彭宜
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒
- Ⅰ群禽腺病毒33K基因的原核表达与鉴定被引量：1
- 2012年
- 33K蛋白是Ⅰ群禽腺病毒(fowl adenovirus groupⅠ,FAVⅠ)的非结构蛋白,在感染的过程中起重要作用。为了构建原核表达载体pGEX-33K作为诊断抗原,本研究根据GenBank中FAVⅠ33K基因序列,设计1对特异性引物。用PCR方法扩增目的片段,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组质粒pGEX-33K。将其转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,pGEX-33K表达的分子量为36.7KD,表达产物主要以可溶性的形式存在于菌体中;最佳IPTG诱导浓度为0.75mmol/L,最佳诱导时间为4h;经Western Blot鉴定,pGEX-33K重组蛋白可与FAVⅠ阳性血清发生特异性反应,为FAVⅠ抗体ELISA鉴别诊断试剂盒的研究奠定基础。
- 罗思思谢芝勋刘加波谢丽基庞耀珊邓显文谢志勤范晴彭宜
- 关键词：原核表达
- 2002—2009年中国华东地区家禽低致病性禽流感的病原学检测与分析被引量：34
- 2011年
- 【目的】为确定中国华东地区家禽中禽低致病性禽流感(Low pathogenic avian influenza,LPAI)的流行和分布状况。【方法】2002年7月至2009年9月在江苏省扬州市活禽市场(live poultry markets,LPMs)采集来自不同省份的家禽泄殖腔拭子11 645个,用鸡胚尿囊腔传代接种法分离病毒,进行了长达8年的LPAI的病毒学监测。【结果】禽流感阳性样品1 158个,总分离率9.94%。所分离到的亚型及各亚型分离率从高到低依次为H3、H6、H11、H1、H4、H9、H10、H8。【结论】禽流感的分布季节性非常明显,以冬、春为高,各亚型又有其不同分布特点。到目前为止,已经从家鸭中分离到8种HA亚型,依次为H1、H3、H4、H6、H8、H9、H10、H11;7种NA亚型,包括N1、N2、N3、N4、N5、N6、N8,两者之间有17种组合,与野鸭的带毒情况十分相似。家鸭还很容易发生混合感染,2007年以来以H6亚型为主,H3、H11、H4、H9等很多亚型都可与其混合感染,这为禽流感病毒(avian influenza viruses,AIVs)基因重组产生新的亚型及毒力的变异提供了很好的载体。
- 赵国刘晓文钱忠明薛峰彭宜彭大新刘秀梵
- 关键词：低致病性禽流感流行病学家禽
- 牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：20
- 2010年
- 根据GenBank公布的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）5′端非编码区核苷酸序列,设计引物和TaqMan荧光探针,建立了BVDV的实时荧光定量PCR检测方法。建立的方法只能检测到BVDV,而与CSFV、BRV、MT及IBRV没有交叉反应,具有高度的特异性,在1010~102模板范围内具有良好的线性关系,所制作的标准曲线相关系数为0.991,最低可检测到100个拷贝的阳性质粒。所建立的BVDV实时荧光定量PCR检测方法具有快速、特异、灵敏等特点。
- 范晴谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基彭宜
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR
- Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定及hexon基因的序列分析被引量：26
- 2012年
- 为调查禽腺病毒的感染状况,2008—2010年从广西南宁市活禽市场采集样品259份,通过SPF鸡胚传代增殖,经PCR鉴定,92份为禽腺病毒阳性,阳性率为35.5%(92/259)。选取不同年份的8株进行免疫琼脂扩散、血凝性、致细胞病变、形态学和鸡胚致病性试验。结果:8株均与Ⅰ群禽腺病毒阳性血清反应,不能凝集鸡红细胞,病毒粒子具有腺病毒典型特征,可致鸡胚肝细胞变圆、折光性增强,使鸡胚发育不良。将克隆的8株hexon基因进行序列比对及遗传进化分析,显示均与Ⅰ群禽腺病毒同源性最高,亲缘关系最近。结果表明,8株分离株均为Ⅰ群禽腺病毒。
- 罗思思谢芝勋邓显文刘加波庞耀珊谢志勤谢丽基彭宜范晴
- 关键词：HEXON
- H4亚型家养水禽流感病毒分离株的表面膜蛋白基因的序列测定和遗传进化分析被引量：5
- 2006年
- 采用常规的血清学试验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行4年多的监测,分离鉴定出多株H4亚型禽流感病毒。对其中的A/Duck/Yangzhou/216/2002(简称Dk/YZ/216/02)、A/Duck/Yangzhou/526/2003(简称Dk/YZ/526/03)、A/Duck/Yangzhou/36/2004(简称Dk/YZ/36/04)的血凝素基因和Dk/YZ/526/03、Dk/YZ/36/04的神经氨酸酶基因进行了克隆测序,并与GenBank中收录的其它序列进行了比较,遗传进化结果表明Dk/YZ/216/02的血凝素基因(HA)与毒株Tk/Minnesota/833/80(H4N2)同源性最高,而Dk/YZ/526/03和Dk/YZ/36/04的血凝素基因(HA)均与Budgerigar/Hokkaido/1/77(H4N6)同源性最高;而神经氨酸酶基因(NA)遗传进化分析结果表明Dk/YZ/36/04(H4N6)的NA基因与毒株Pigeon/Nanchang/8-142/2000(H3N6)同源性最高,而Dk/YZ/526/03(H4N2)的NA基因与Dk/Hokkaido/13/00(H9N2)同源性最高,3株禽流感病毒的HA推导的氨基酸剪切位点序列均为P-E-K-A-S-R,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列,与对SPF鸡的致病力试验相吻合。
- 薛峰顾敏彭宜姚春峰张评浒钱忠明刘秀梵
- 关键词：HA剪切位点
- Ⅰ群禽腺病毒间接100K-ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 为了建立一种Ⅰ群禽腺病毒(FAVⅠ)感染的抗体间接ELISA检测方法,试验以FAVⅠ100K重组蛋白作为包被抗原,优化间接ELISA反应条件,建立了FAVⅠ感染产生抗体的间接100K-ELISA检测方法,检测FAVⅠ活病毒感染血清和灭活苗免疫血清各50份。结果表明:经优化筛选的最佳反应条件如下,包被抗原浓度为5.4μg/mL,包被条件为37℃作用1 h加4℃过夜,5%脱脂奶封闭1 h,血清稀释度为1∶100,作用时间为60 min,酶标二抗的最佳浓度为1∶3 000,作用时间为45 min。该方法的阴性、阳性临界值为0.345。96%感染动物血清检测结果为阳性,而98%灭活苗免疫动物血清检测结果为阴性。说明研究建立的100K-ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好。
- 罗思思谢芝勋邓显文谢丽基刘加波谢志勤庞耀珊范晴彭宜
- 关键词：ELISA方法
- 家鸭中H8N4亚型流感病毒株A/duck/Yangzhou/02/2005的全基因克隆和序列分析被引量：4
- 2006年
- 采用常规的血清学试验和特异性RT—PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行4年多的监测，分离鉴定出国内报道的第一株H8亚型禽流感病毒。应用流感病毒通用引物成功地扩增出H8N4亚型禽流感病毒A／duck／Yangzhou／02／2005株（简称Dk／YZ／02／05）的全基因序列。将Dk／YZ／02／05的基因组核苷酸全序列与网上公布的基因序列进行比较分析，结果表明：Dk／YZ／02／05（H8N4）的8个基因片段均含有相应病毒基因的完整开放阅读框；其推导的血凝素（Heamgglutinin，HA）氨基酸剪切位点序列为P-SV-E-P-R，为典型低致病性禽流感病毒的特征序列；神经氨酸酶（NA）在第48位氨基酸后无20个氨基酸的缺失；非结构蛋白（NS）79～84位也没有氨基酸的缺失。
- 薛峰彭宜张小荣姚春峰龙进学刘秀梵
- 关键词：全基因组
- 2006--2008年华东地区家禽不同HA亚型低致病性禽流感的病原学监测被引量：25
- 2009年
- 目的采用血清学试验和RT-PCR方法在2006-2008年5月期间从华东地区家禽中分离到473株禽流感病毒(AIVs),其中家鸭AIVs的分离率最高(14.7%),鸡AIVs分离率最低(2.92%)。共分离到H1、H3、H4、H6、H9、H10、H11七种HA亚型低致病性禽流感病毒(LPAIVs),其中H3亚型LPAIVs在家禽中的分布占优势。禽流感病毒的分离呈现一定的季节性,一般春秋冬三个季节分离率相对较高。
- 彭宜张伟薛峰汪文斌李彦芳孟春春张文俊刘秀梵
- 关键词：低致病性禽流感病毒分离率
- 鸡毒支原体强弱毒株LAMP鉴别检测方法的建立
- 为建立一种能鉴别鸡毒支原体(MG)强、弱毒株的快速检测方法，本研究根据GenBank中鸡毒支原体(MG)强弱毒株基因保守序列分别设计能区分强、弱毒株的2套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物，建立了能鉴别MG强、弱毒株的...
- 罗思思谢芝勋邓显文谢志勤庞耀珊谢丽基刘加波范晴彭宜
- 关键词：鸡毒支原体环介导等温扩增特异性敏感性
