高晗
- 作品数：10 被引量：65H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院特产研究所更多>>
- 发文基金：科技部科研院所社会公益研究专项吉林省科技发展计划基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 狐、貉和水貂犬瘟热病毒受体SLAM的基因克隆及其真核表达被引量：9
- 2010年
- 信号淋巴激活分子(SLAM)为犬瘟热病毒(CDV)感染其宿主动物识别的细胞受体。本试验应用RT-PCR从狐狸、貉和水貂的外周血淋巴细胞中克隆到其相应SLAM基因。基因测序比较发现,狐狸、貉与同科的犬SLAM基因编码区长度均为1029bp,核苷酸同源性高于98.6%;而水貂SLAM基因编码区长度为1020bp,与以上三种动物遗传关系较远(核苷酸同源性<83.7%),但与海豹SLAM基因遗传关系较近(核苷酸同源性为91.4%)。基于不同动物SLAM基因序列的系统进化树分析显示,犬、狐狸、貉、水貂和海豹在进化树上构成了以CDV为感染宿主的遗传分支。氨基酸序列比较显示,该5种动物SLAM分子上均存在一个长度为26个氨基酸的信号肽序列,且在空间结构上影响宿主——病毒特异性的8个关键氨基酸均完全保守。通过构建表达该狐狸、貉、水貂SLAM基因的三种真核表达质粒,分别转染CRFK细胞后,应用CDV强毒感染试验证实,CDV均能在三种转染细胞上产生明显的细胞病变效应(CPE),而未转染CRFK细胞对照无CPE产生,由此证实作为CDV细胞受体的狐、貉和水貂的SLAM,体外表达后能明显增强犬瘟热强毒株对非敏感细胞的感染能力。
- 赵建军张海玲高晗赵春霏柴秀丽陈涛闫喜军吴威
- 关键词：犬瘟热病毒细胞受体SLAM真核表达
- 犬瘟热病毒强毒株HBF-1株的培育及致病性研究被引量：6
- 2010年
- 为研究从北极狐病料样品中分离的一株强毒的致病性,本实验采用病例复制、RT-PCR检测、间接免疫荧光检测(IFA)和电镜观察等方法证实分离得到犬瘟热病毒(CDV),并命名为HBF-1。对该分离株H基因的核苷酸序列比对显示,HBF-1与疫苗株的同源性为91.0%～91.5%,与国内外分离株的同源性为93.5%～99.9%。病毒传代培育试验结果显示HBF-1已适应在北极狐、貉、水貂和犬体内繁殖,具有较广的感染范围。但各种动物的临床症状和剖检病理变化存在不同程度的差异,表明HBF-1分离株对北极狐、貉、水貂和犬的致病力不同;毒力测定结果显示其半数感染量分别为102.46 ID50/mL、102.95 ID50/mL、102.46 ID50/mL和102.58 ID50/mL,表明HBF-1为一株CDV强毒株,可以在不同的经济动物间进行水平传播。本研究结果为开发新的CDV疫苗提供了实验基础。
- 高晗闫喜军柴秀丽白雪张蕾徐磊赵建军张海玲韶西群罗国良
- 关键词：犬瘟热病毒
- 狐、貉源犬瘟热病毒H和F基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2012年
- 为研究我国圈养狐、貉流行犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)的基因分型与遗传变异情况,通过RT-PCR方法扩增与测序分析了2009年来源于山东省和河北省病料中的CDV H与F基因,并分别与GenBank CDV野毒株和疫苗株的基因序列比对,构建了核苷酸序列的系统发生树。H基因系统发生分析显示,6株毒株归属为Asia-1型。H蛋白氨基酸序列比较表明,除HeB(09)3株有8个潜在N-连接的糖基化位点外,其余毒株N-连接的糖基化位点均为9个。以往的研究结果显示,日本和中国台湾分离株的潜在N-连接糖基化位点为8～9个。6株野毒F蛋白编码区氨基酸的同源性为98.0%～99.5%,与CDV3(登录号EU726268)和Onderstepoort(登录号AF305419)疫苗株的同源性为89.1%～90.6%,F蛋白的前导区(1～135位氨基酸)与疫苗株相比的同源性为62.2%～66.7%;野毒株F蛋白氨基酸在108～110处比疫苗株CDV3多1个潜在N-连接的糖基化位点,HeB(09)3的F蛋白还在366～369位多1个潜在的N-连接的糖基化位点。目前在山东省和河北省2地狐狸和貉中流行的犬瘟热野毒株为Asia-1型,HeB(09)3株H蛋白和F蛋白在N-连接糖基化方面与其他5株野毒株有明显的不同。
- 闫如勋赵建军柴秀丽闫喜军倪佳张海玲高晗白雪张蕾陈立志吴威
- 关键词：狐狸犬瘟热病毒融合蛋白基因
- 水貂阿留申病毒VP2基因的原核表达及初步应用被引量：9
- 2010年
- 将水貂阿留申病毒ADV-G株VP2基因中主要抗原表位区的2个片段,分别克隆至原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,鉴定后得到重组质粒pET-VP2a和pET-VP2b,将重组质粒转化到宿主菌BL21中,用IPTG分别以不同浓度,不同诱导时间进行诱导表达,采集样品做SDS-PAGE、Western-blot分析,并以此蛋白作为包被抗原进行ELISA检测。结果发现以终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导,4h后表达可达到高峰,其大小分别约为23kD和28kD,该蛋白与ADV阳性血清能发生特异性反应。将此表达产物应用Ni-NTAHis-Bind纯化系统进行纯化,其纯度可达到91%,纯化后的蛋白以60μg/孔包被96孔板,检测不同地区水貂血清,同时以对流免疫电泳法(CIEP)为对照,结果发现二者的符合率高达93%,而应用该蛋白进行检测其反应更为安全,背景低,制备简单,这为今后应用该蛋白作诊断抗原检测水貂阿留申病奠定了基础。
- 徐磊闫喜军张蕾柴秀丽赵建军张海玲高晗白雪
- 关键词：水貂阿留申病毒VP2基因原核表达
- 我国犬瘟热病毒强毒株培育取得新突破被引量：1
- 2009年
- 犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的，包括犬科、鼬科、猫科、熊科等十几个科属、70多种动物共患的烈性传染病。在犬瘟热病毒的研究中，由于缺乏毒力稳定的犬瘟热病毒强毒株，使国内犬瘟热研究一直无法深入。
- 闫喜军高晗
- 关键词：犬瘟热病毒强毒株烈性传染病毒力
- 犬瘟热病毒N基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及应用被引量：2
- 2012年
- 目的:为检测犬瘟热抗体提供诊断抗原,应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)N蛋白。方法:采用RT-PCR克隆CDV-N基因,构建重组杆粒BacmidCDV-N,并将其转染Sf9昆虫细胞。通过Western blot和间接免疫荧光检测N蛋白的表达。以表达的CDV N蛋白为包被抗原,建立了检测犬瘟热抗体的间接ELISA方法。结果:成功表达了CDV N蛋白。间接ELISA(iELISA)方法中,犬血清最佳稀释度1∶80,N蛋白稀释度1∶40(6.3μg/100μl)。应用该方法共检测了36份犬血清,与中和试验检测方法相比较,其特异性为81.8%,灵敏度为96.0%,符合率为91.7%。结论:表达的CDV-N蛋白具有良好反应原性,建立了快速检测CDV阳性血清的iELISA方法。
- 冯佩平张蕾柴秀丽张海玲赵建军胡博白雪高晗邵西群闫喜军赵权徐磊
- 关键词：杆状病毒表达系统IELISA
- 水貂肠炎病毒VP2基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达被引量：5
- 2011年
- 利用昆虫杆状病毒表达系统表达水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)VP2基因,表达的蛋白能够形成病毒样粒子,具有反应原性,为研究MEV新型疫苗奠定基础。采用PCR方法扩增MEVVP2基因,将PCR产物连接到pMD18-T载体,目的基因定向克隆到pFast-BacⅠ载体中,构建重组转座载体后转化DH10Bac感受态细胞,获得重组Bacmid质粒后转染Sf9昆虫细胞,传毒3代,对表达蛋白进行Western blotting鉴定。结果成功克隆MEVVP2基因。Western blotting结果证实,表达蛋白能够被MEV单克隆抗体识别。在Bac-To-Bac杆状病毒表达系统中成功的表达了MEV VP2蛋白,目的蛋白具有较好的反应原性。
- 倪佳张蕾柴秀丽高晗张海玲赵建军白雪邵西群闫喜军
- 关键词：水貂肠炎病毒VP2基因杆状病毒表达系统
- 犬瘟热病毒水貂分离株F1基因的克隆表达被引量：1
- 2011年
- 本研究旨在利用基因工程的方法,制备犬瘟热(canine distemper,CD)疾病诊断用抗原。提取犬瘟热病毒基因组,RT-PCR扩增犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)F1基因序列,克隆并测序。将F1基因定向克隆到原核表达载体pET28a多克隆位点,阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达产物,并用Ni柱亲和层析纯化目的蛋白。结果显示表达的F1重组蛋白能与犬瘟热标准阳性血清发生反应,具有良好的反应原性,可以作为犬瘟热疾病的诊断用抗原。
- 张蕾柴秀丽张大鹏张海玲赵建军高晗白雪徐磊闫喜军
- 关键词：犬瘟热病毒
- 水貂、狐、貉、犬Ⅰ型和Ⅱ型干扰素基因多态性分析及生物学活性鉴定
- 闫喜军张海玲柴秀丽赵建军罗国良邵西群张蕾白雪高晗王凤雪易立程世鹏吴威
- 任务来源和背景:“水貂、狐、貉、犬Ⅰ型和Ⅱ型干扰素基因多态性分析及生物学活性鉴定”为中国农业科学院特产研究所在吉林省科技厅项目“狐α、γ-干扰素基因克隆、高效表达及抗病毒活性分析(项目编号20060550)”资助下，经科...
- 关键词：
- 关键词：毛皮动物基因工程
- 水貂绿脓杆菌分离株的生物学特性和血清型分析被引量：32
- 2011年
- 为了解国内水貂出血性肺炎病原绿脓杆菌的生物学特性和血清型分布,2002—2010年间从国内5个省水貂养殖场暴发出血性肺炎的水貂肺中分离获得45株绿脓杆菌,测定了分离株的生化特性、血清型、抗生素敏感性和对小鼠和水貂的半数致死量(LD50)。结果表明:分离菌株的主要生化指标除甘露醇和ONPG与人医临床分离株的不同外,其余均与绿脓杆菌的生理生化特性相同。45株菌共分为3种血清型:G型(42/45),B型(2/45)和I型(1/45),此结果与国外近几十年流行的水貂出血性肺炎和人医临床分离的绿脓杆菌主要流行血清型相同。45株菌对5种抗生素均较敏感,敏感性与分离的年份和菌株的血清型无关系。经动物试验证明,所选的4株菌毒力均不同,2株B型菌株毒力均较G型弱,4菌株对水貂的毒力均强于对小鼠的毒力,说明菌株对水貂较易感。
- 白雪柴秀丽闫喜军高晗张海玲赵建军张蕾邵西群罗国良王长凤
- 关键词：水貂绿脓杆菌生物学特性血清分型
