于倩
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠pEGFP-Hoxa11真核表达载体的构建及表达
- 2011年
- 目的 构建和鉴定Hoxa11和EGFP双基因共表达真核载体.方法 采用DNA重组技术,将目的 基因Hoxa11克隆至含有报告基因EGFP的pEGFP-N1真核表达载体中,构建的真核表达载体pEGFP-Hoxa11经PCR,双酶切及基因测序鉴定;转染至CHO细胞,荧光显微镜下观察重组质粒的表达,提取细胞蛋白Western印迹检测蛋白表达.结果 pEGFP-Hoxa11重组质粒构建成功.构建的真核表达载体pEGFP-Hoxa11能在CHO细胞中有效表达.结论 成功构建了共表达Hoxa11和EGFP的真核表达载体,并能在CHO细胞中有效表达.为进一步研究Hoxa11的功能提供实验基础.
- 熊敏于倩崔爱娜张力朱桂金
- 关键词：重组质粒真核表达
- HLA-DR1二聚体的构建及其在昆虫细胞中的表达和纯化
- 2010年
- 目的构建HLA-DR1(由DRA和DRB1*01基因编码)杆状病毒表达载体,并使其在昆虫细胞内得到表达。方法采用RT-PCR方法从721.221细胞中扩增DRα和DRβ的信号肽及胞外序列,运用重叠PCR将DRα和DRβ片段分别与Fos和Jun的亮氨酸拉链序列相连,成为DRα-Fos和DRβ-Jun,DRα和DRβ可凭借Fos和Jun的亮氨酸拉链结合形成DR1分子,再通过EcoRⅠ酶切位点将DRα-Fos和人IgG1的Fc段相连,形成DRα-Fos-Fc重组序列,2个同源的DR1分子可通过IgG1的Fc段的二硫键结合形成二聚体。分别将DRα-Fos-Fc及DRβ-Jun插入杆状病毒表达载体pFastBacTMDual的2个多克隆位点处,构建出重组载体pFastBacTMDual+[DR1/Fc]。对构建的载体进行PCR及限制性内切酶酶切鉴定和测序。采用脂质体转染方法将表达载体转入昆虫细胞系Sf9中,通过双抗夹心ELISA及Westernblot检测HLA-DR1的表达。结果 PCR及酶切鉴定和测序证实目的基因插入正确且序列与GenBank一致。ELISA和Westernblot检测表明DR1杆状病毒感染的Sf9细胞培养上清HLA-DR1表达呈阳性,且表达的HLA-DR1分子具有正确的构象。结论成功构建出杆状病毒表达载体pFastBacTMDual+[DR1/Fc],并在Sf9细胞中得到表达,为研究HLA-DR1限制性的T细胞应答奠定了基础。
- 宋银宏刘燕牛力翁秀芳孙伟于倩吴雄文
- 关键词：二聚体杆状病毒载体昆虫细胞基因表达
- 病毒肽/HLA-A2与单链抗体融合蛋白介导病毒特异性CTL杀伤肿瘤细胞
- 2011年
- 目的 研究人工构建的病毒肽/HLA-A2复合物与抗转铁蛋白受体（CD71）单链抗体融合蛋白（HBC-A2/scFv）介导病毒特异性CTL杀伤肿瘤细胞的作用.方法 将HBC-A2/scFv融合蛋白结合到高表达CD71的肿瘤细胞表面,利用加载HBC抗原肽的 T2细胞在体外诱导产生抗原特异性CTL,用乳酸脱氢酶释放法检测CTL对肿瘤细胞的特异性杀伤作用.结果 HBC-A2/scFv融合蛋白可结合于CD71阳性的肿瘤细胞K562、HepG2及U937表面,结合率分别为：37.30%±8.25%、27.20%±3.88%和21.80%±6.49%.体外诱导产生的CTL/HBC能杀伤结合有HBC-A2/scFv的K562、HepG2及U937细胞,杀伤率明显高于未结合HBC-A2/scFv的对照组（K562：42.08%±1.14%vs 8.07%±1.39% HepG2：49.72%±1.59%vs12.46%±1.26% U937：39.72%±3.26%vs 7.13%±1.48%）.结论 HBC-A2/scFv融合蛋白能介导病毒特异性CTL杀伤肿瘤细胞,为肿瘤细胞免疫治疗提供了新的思路和实验依据.
- 李佳楠于倩吴雄文
- 关键词：融合蛋白肿瘤细胞
