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孔繁琪

作品数：10 被引量：58H指数：4
供职机构：宁夏医科大学基础医学院更多>>
发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金宁夏回族自治区科技厅科技攻关项目更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 10篇医药卫生

主题

  • 9篇氨酸
  • 8篇同型半胱氨酸
  • 8篇半胱氨酸
  • 6篇细胞
  • 5篇甲基化
  • 5篇DNA甲基化
  • 3篇动脉
  • 3篇动脉粥样硬化
  • 3篇APOE
  • 2篇凋亡
  • 2篇血症
  • 2篇氧化应激
  • 2篇酸血症
  • 2篇同型半胱氨酸...
  • 2篇巨噬细胞
  • 2篇肝细胞
  • 2篇高同型
  • 2篇高同型半胱氨...
  • 2篇高同型半胱氨...
  • 2篇半胱氨酸血症

机构

  • 10篇宁夏医科大学
  • 3篇四川大学

作者

  • 10篇姜怡邓
  • 10篇孔繁琪
  • 7篇杨晓玲
  • 7篇赵丽
  • 5篇周龙霞
  • 4篇张鸣号
  • 4篇曹成建
  • 4篇田珏
  • 3篇贾月霞
  • 3篇焦运
  • 3篇马胜超
  • 3篇王艳华
  • 3篇金少举
  • 3篇张辉
  • 2篇韩学波
  • 2篇马文斌
  • 2篇杨安宁
  • 1篇曹军
  • 1篇张慧萍
  • 1篇马文斌

传媒

  • 3篇中国药理学通...
  • 2篇中国动脉硬化...
  • 1篇世界华人消化...
  • 1篇医学信息（医...
  • 1篇生理学报
  • 1篇实用医学杂志
  • 1篇宁夏医科大学...

年份

  • 1篇2017
  • 1篇2016
  • 5篇2015
  • 3篇2014
共 10 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
miR-125b甲基化在同型半胱氨酸促进血管平滑肌细胞增殖中的作用被引量：8
2015年
目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促进血管平滑肌细胞增殖中miR-125b甲基化的作用。方法原代培养人脐静脉平滑肌细胞(VSMCs),并分为空白对照组(0μmol·L-1Hcy),不同浓度Hcy干预组(50、100、200及500μmol·L-1Hcy),以荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-125b的表达变化;利用miR-125b前体和抑制剂转染VSMCs后MTT法检测细胞增殖活性;生物信息学分析miR-125b启动子区Cp G岛分布情况,巢式降落式甲基特异性PCR(nt-MSP)法检测miR-125b甲基化状态的变化;并利用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷(AZC)干预细胞后再次检测miR-125b的表达。结果与对照组相比,100,200及500μmol·L-1Hcy可使miR-125b的表达水平降低,差异有显著性(P<0.01);miR-125b前体可以抑制VSMCs增殖,而miR-125b抑制剂可以促进VSMCs增殖(P<0.01);以miR-125b基因上游3 700 bp作为研究对象,生物信息学分析发现miR-125b启动子区含有一个长度为792bp(1881-2672区域)的CpG岛,且在Hcy干预下miR-125b的甲基化水平增强(P<0.01);而用AZC干预后,发现miR-125b表达上调,差异有显著性(P<0.05)。结论 Hcy可能通过下调miR-125b表达从而促进VSMCs增殖,可能通过上调miR-125b基因甲基化水平从而下调miR-125b表达。
刘现梅曹成建田珏赵丽孔繁琪周龙霞陈久凯王艳华杨晓玲贾月霞姜怡邓
关键词：同型半胱氨酸DNA甲基化血管平滑肌细胞动脉粥样硬化
EC-SOD在同型半胱氨酸致单核细胞源性巨噬细胞氧化应激中的作用研究被引量：2
2017年
目的探讨细胞外超氧化物岐化酶(EC-SOD)在同型半胱氨酸(Hcy)致巨噬细胞氧化应激中的作用及机制。方法将THP-1单核细胞用佛波酯刺激48 h后演变成巨噬细胞,用0、50、100、200、500μmol/L Hcy作用细胞72 h,并加设叶酸+维生素B12(Vit B12)干预组(100μmol/L Hcy+30μmol/L叶酸+30μmol/L Vit B12)。微板法检测氧化应激指标(H_2O_2、O_2^-、OH-)的变化;实时荧光定量PCR检测巨噬细胞中EC-SOD的mRNA表达水平;Western blot检测巨噬细胞中EC-SOD的蛋白表达水平;EC-SOD测定试剂盒检测EC-SOD活性。分别构建EC-SOD重组质粒和干扰质粒转染细胞,检测EC-SOD的mRNA及蛋白的表达水平以及超氧阴离子的表达。结果与对照组相比,100、200、500μmol/L Hcy组H_2O_2、OH-活性显著增高(P<0.01),EC-SOD mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01)。与对照组相比,100、200、500μmol/L Hcy组EC-SOD活性分别下降了13.92%、8.62%、10.32%(P<0.05,P<0.01)。与100μmol/L Hcy组相比,叶酸+Vit B12干预组EC-SOD mRNA的表达升高了47%。分别转染EC-SOD重组质粒和干扰质粒后,与100μmol/L Hcy组相比,EC-SOD重组组O_2^-含量降低了63.89%,干扰片段-596组O_2^-含量则增加了33.59%(P<0.05,P<0.01)。结论 EC-SOD参与了Hcy导致的单核细胞源性巨噬细胞的氧化应激。在抑制Hcy诱导动脉粥样硬化的过程中,EC-SOD可能发挥着重要的作用。
和杨杨马胜超刘现梅孔繁琪郭伟王楠贾月霞杨晓明金少举姜怡邓曹军
关键词：同型半胱氨酸巨噬细胞氧化应激
MMP-9/TIMP-1在HHcy致ApoE^(-/-)小鼠肾脏损伤中的作用机制被引量：6
2015年
目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)导致Apo E-/-小鼠肾脏损伤的作用机制,为HHcy所致肾脏疾病的预防和治疗提供理论和实验依据,为肾病患者的疾病监测提供新的指标。方法将5周龄雄性纯合子Apo E-/-小鼠随机分组:Apo E-/-对照组饲以普通饮食,Apo E-/-高蛋氨酸组饲以高蛋氨酸饮食,Apo E-/-干预组饲以加叶酸和维生素B12的高蛋氨酸饮食,5周龄SPF级C57BL/6J雄鼠饲以普通饮食作为正常对照组,喂养14周后,生化分析仪测定血清同型半胱氨酸(Hcy)、肌酐及尿素浓度,透射电镜和PAS染色检测小鼠肾脏损伤情况,荧光定量PCR检测肾脏基质金属蛋白酶9(MMP-9)和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)m RNA表达水平,并以免疫组织化学染色法分析肾脏MMP-9蛋白表达,ELISA检测TIMP-1蛋白表达。结果与正常对照组相比,Apo E-/-高蛋氨酸组血清Hcy、肌酐及尿素浓度分别升高了3.66倍、1.1倍和1.6倍(P<0.01);透射电镜和PAS染色结果显示,Apo E-/-高蛋氨酸组较正常对照组肾脏损伤明显,荧光定量PCR结果显示MMP-9及TIMP-1 m RNA表达则分别升高了5.25倍和1.38倍(P<0.01);免疫组织化学结果显示Apo E-/-高蛋氨酸组MMP-9表达较正常对照组明显升高(P<0.01);ELISA结果显示Apo E-/-高蛋氨酸组TIMP-1蛋白表达比正常对照组明显升高(P<0.01)。与Apo E-/-高蛋氨酸组相比,Apo E-/-干预组血清Hcy浓度下降,且肌酐和尿素浓度均降低(P<0.01);透射电镜和PAS染色结果显示,Apo E-/-干预组肾脏损伤较Apo E-/-高蛋氨酸组减轻。血清Hcy浓度与其肌酐及尿素浓度呈正相关(r2=0.4344,P<0.0001;r2=0.4478,P<0.0001),与MMP-9/TIMP-1比值也呈正相关(r2=0.39309,P<0.001),且小鼠肾脏MMP-9/TIMP-1比值与肌酐及尿素浓度也成正相关(r2=0.1464,P<0.05;r2=0.3027,P<0.01)。结论 HHcy可能是经MMP-9/TIMP-1比例上调致细胞外基质降解,继而导致肾脏损伤。
孔繁琪马胜超张辉和杨杨赵丽孙炜炜曹成建王艳华田珏杨晓玲姜怡邓
关键词：高同型半胱氨酸血症基质金属蛋白酶9肾脏损伤
MST1在同型半胱氨酸促肝细胞凋亡过程中的表达及意义被引量：4
2015年
目的:探讨MST1(mammalian sterile 20-like kinase 1)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促肝细胞凋亡中的作用.方法:动物水平:实验分为4组,每组12只小鼠.正常对照组:5周龄♂鼠(SPF级C57BL/6J)饲以普通饮食;Apo E-/-对照组:5周龄♂纯合子Apo E-/-鼠饲以普通饮食;Apo E-/-高蛋氨酸组:5周龄♂纯合子Apo E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食(普通饮食中加入1.7%蛋氨酸);Apo E-/-叶酸和维生素B12干预组:5周龄♂纯合子A p o E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食加0.006%叶酸和0.0004%维生素B12.喂养14 wk后,全自动生化分析仪测定血清Hcy水平;透射电镜、DAPI染色观察肝组织凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)及Western blot分别检测MST1 m RNA和蛋白表达水平.细胞水平:分为3组:正常对照组(0μmol/L Hcy);高同型半胱氨酸(hyperhomocysteinemia,HHcy)组(100μmol/L Hcy);干预组(100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12);干预肝细胞48 h.Annexin VFITC/PI双标记流式细胞术检测肝细胞凋亡水平的变化;实时定量聚合酶链反应(q RTPCR)及Western blot分别检测MST1 m RNA和蛋白表达水平.结果:动物水平:(1)各组小鼠喂养20 wk后,测定血清Hcy水平,Apo E-/-高蛋氨酸组血清H c y水平分别是正常对照组和A p o E-/-对照组的2.3倍和1.9倍(P<0.01).干预组血清Hcy水平较Apo E-/-高蛋氨酸组降低28%(P<0.01),提示造HHcy模型成功;(2)电镜结果显示,A p o E-/-高蛋氨酸组小鼠肝细胞出现凋亡的倾向,染色质凝聚浓缩或边缘化,线粒体肿胀或浓缩、嵴断裂或变短,粗面内质网和滑面内质网明显肿胀、断裂、连贯性破坏、核糖体脱落,糖原溶解;(3)DAPI染色后观察,正常对照组和Apo E-/-对照组中细胞核大小均一、核圆,核膜光滑;Apo E-/-高蛋氨酸饮食组一些细胞出现核膜皱缩、细胞核呈现出各种不规则形状,提示可能存在凋亡;Apo E-/-干预组较Apo E-/-高蛋氨酸组细胞核损伤有所减轻;(4)与正常对照组和Apo E-/-对照组相比,Apo E-/-高蛋氨
孔繁琪马胜超赵丽和杨杨刘现梅周龙霞张辉张鸣号金少举姜怡邓
关键词：同型半胱氨酸肝细胞凋亡叶酸维生素B12
ABCA1甲基化及表达水平在回汉族AS人群中的变化及其诊断价值
2015年
目的本研究探讨宁夏回汉族动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)患者外周血ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)基因表达水平及其甲基化状态,并探讨其在AS发生、发展中的意义及诊断价值。方法选择经颈动脉多普勒超声确诊的回族AS组50例,回族对照组53例,汉族AS组55例,汉族对照组44例;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外周血ABCA1 mRNA的表达,巢式降落式甲基化特异性PCR(nt-MSP)检测外周血ABCA1基因DNA启动子区甲基化程度。结果 ABCA1 mRNA相对表达水平,回族AS组比汉族AS组低13.21%(P<0.05),回族AS组比回族对照组低14.81%(P<0.05),汉族AS组比汉族对照组低20.89%(P<0.05);ABCA1基因甲基化水平,回族AS组高于汉族AS组(P<0.05),汉族AS组高于汉族对照组(P<0.05),回族AS组高于回族对照组(P<0.05),回族对照组高于汉族对照组(P<0.05)。ROC分析结果,ABCA1甲基化水平在回族AS组和汉族AS组中的最佳诊断点分别为0.498、0.428,ROC曲线下面积分别为0.649、0.665,灵敏度和特异度分别为91.7%、88.9%。结论回汉族AS患者外周血中ABCA1基因甲基化水平存在差异,回族人群ABCA1基因甲基化基础水平比汉族高,ABCA1 mRNA的表达水平比汉族低,ABCA1甲基化在诊断AS中有较好的价值。
陈久凯张鸣号周龙霞赵丽刘现梅孔繁琪王艳华马文斌姜怡邓
关键词：DNA甲基化动脉粥样硬化
同型半胱氨酸对巨噬细胞中Line-1 DNA甲基化标准曲线的影响
2014年
目的寻找简单、可靠、经济准确的检测巨噬细胞中Line-1甲基化水平的实验方法。方法体外培养单核细胞源性巨噬细胞,不同浓度Hcy作用后以甲基化特异性PCR检测Line-1 DNA甲基化水平变化后,分别克隆扩增相应的片段,将不同浓度稀释的甲基化和非甲基化样品分别加入到荧光PCR体系中,按照荧光PCR体系进行操作,检测其荧光表达,根据相应的稀释倍数与扩增数做出相应的标准曲线。结果各Hcy浓度组的Line-1 DNA甲基化程度随Hcy浓度的增高甲基化程度升高,Line-1 DNA甲基化程度与对照组比较,分别上升了1.30、1.52、1.61、2.18倍,差异有统计学意义(<0.05);分别得到Line-1 DNA甲基化标准曲线:Y=-4.3448x+51.512;非甲基化标准曲线:Y=-2.7406x+36.208。结论 Line-1 DNA甲基化与Hcy介导的动脉粥样硬化关系密切,荧光定量PCR法建立的标准曲线是检测Line-1 DNA甲基化水平的一种方便且准确的方法。
蒲雅洁孔繁琪张辉王艳华杨晓玲韩学波田珏贾月霞姜怡邓
关键词：巨噬细胞同型半胱氨酸DNA甲基化荧光定量PCR
CFTR抑制ApoE^(-/-)鼠高同型半胱氨酸血症诱导的肝损伤被引量：3
2016年
目的:探讨囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)在高同型半胱氨酸血症(HHcy)致ApoE^(-/-)鼠肝损伤中的作用。方法:5周龄雄性ApoE^(-/-)鼠36只随机分为模型对照组、模型组和治疗组,分别给予普通、高蛋氨酸、高蛋氨酸加叶酸饮食,C57BL/6J雄鼠12只,普通饮食,为正常对照组。检测小鼠血清Hcy、ALT和AST变化,Hcy(100μmol/L)及100 Hcy+F(100μmol/L Hcy+叶酸)干预肝细胞后,检测肝组织和细胞内CFTR m RNA和蛋白水平,分析CFTR激动剂(VX-770)与抑制剂[CFTR(inh)-17]干预细胞后对CFTR表达及ALT和AST含量的影响。结果:模型组ApoE^(-/-)鼠血清Hcy、ALT和AST显著升高,CFTR表达下降(P<0.05),而治疗组可拮抗Hcy、ALT、AST、CFTR的改变(P<0.05);Hcy(100μmol/L)引起肝细胞CFTR表达降低而ALT和AST升高(P<0.05),叶酸对这一改变起缓解作用。VX-770和CFTR(inh)-17干预后可改变肝细胞内ALT和AST含量。结论 :CFTR通过调控ALT和AST抑制HHcy致肝细胞损伤过程。
焦运杨安宁孙岳孔繁琪杨晓玲张鸣号金少举姜怡邓
关键词：高同型半胱氨酸血症肝损伤
ERO1α及其 DNA 甲基化在同型半胱氨酸抑制肝细胞增殖中的作用被引量：4
2014年
目的探讨内质网氧化还原酶-1α(endoplasmic reticulum oxidoreductin 1-α,ERO1α)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)抑制肝细胞增殖中的作用。方法以0μmol·L-1Hcy为正常对照组(NC group),以100μmol·L-1Hcy为干预组(Hcy group),干预肝细胞48h后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测肝细胞增殖活力的变化;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot分别检测ERO1αmRNA和蛋白表达水平;构建ERO1α真核表达质粒,转染肝细胞后,荧光显微镜下观察转染效率并以qRTPCR及Western blot验证ERO1α是否过表达,后用MTT法检测肝细胞增殖活力的变化;巢式降落式甲基化特异性PCR(nt MS-PCR)检测ERO1αDNA甲基化水平。结果与正常对照组相比,Hcy干预组肝细胞内ERO1αmRNA及蛋白表达水平降低,且细胞增殖活力减弱(P<0.01)。测序结果证明ERO1α重组质粒构建成功,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白大量表达,qRT-PCR及Western blot验证结果显示ERO1α过表达(P<0.01),而MTT法结果表明ERO1α过表达可缓解Hcy导致的肝细胞增殖抑制(P<0.01)。Hcy刺激后ERO1αDNA甲基化水平升高(P<0.05)。结论 Hcy通过下调ERO1α表达抑制肝细胞增殖,而ERO1α启动子区DNA甲基化是其重要的调控机制。
赵丽曹成建刘现梅孔繁琪马文斌周龙霞陈久凯张鸣号焦运杨晓玲姜怡邓
关键词：同型半胱氨酸肝细胞增殖DNA甲基化
miR-124及其启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致动脉粥样硬化中的作用被引量：23
2015年
本文旨在探讨mi R-124在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致动脉粥样硬化中的作用及其启动子区DNA甲基化调控机制。Apo E-/-小鼠给予高蛋氨酸饮食16周复制高同型半胱氨酸血症动物模型,并设正常对照组(C57BL/6J小鼠正常饮食)及Apo E-/-对照组(Apo E-/-小鼠正常饮食)。HE及油红O染色后观察各组小鼠主动脉粥样硬化程度;生化分析仪检测各组小鼠血清Hcy及血脂水平;复制泡沫细胞模型,油红O染色确定模型是否复制成功;分别以0、50、100、200、500μmol/L Hcy及50μmol/L Hcy+10μmol/L 5-氮杂胞苷(AZC)干预细胞。实时定量PCR(RT-q PCR)检测各组小鼠主动脉及泡沫细胞中mi R-124的表达变化;巢式降落式甲基化特异性PCR(n MS-PCR)检测各组小鼠主动脉及泡沫细胞中mi R-124启动子区DNA甲基化水平,同时在细胞水平观察DNA甲基化抑制剂AZC对mi R-124启动子区DNA甲基化水平及其表达的影响;泡沫细胞油红O染色观察mi R-124甲基化改变对细胞脂质蓄积的影响。结果显示,与Apo E-/-对照组相比,高蛋氨酸组小鼠血清Hcy水平显著升高(P<0.01),且主动脉发生明显粥样变,mi R-124的表达水平显著降低(P<0.01),而mi R-124启动子区DNA甲基化水平显著升高(P<0.01)。给予不同浓度Hcy刺激泡沫细胞后,mi R-124的表达水平呈下降趋势,而mi R-124启动子区DNA甲基化水平逐渐升高,且随Hcy浓度增加改变越明显,呈剂量依赖关系(P<0.05,P<0.01),给予AZC干预后可逆转上述变化(P<0.05)。以上结果提示,mi R-124表达下调可能在Hcy致动脉粥样硬化过程中发挥重要作用,而mi R-124启动子区高甲基化改变可能是其表达下调的重要机制。
赵丽焦运杨安宁曹成建孔繁琪刘现梅杨晓玲姜怡邓
关键词：同型半胱氨酸泡沫细胞DNA甲基化
NO水平下降通过氧化应激引起人胎盘滋养细胞凋亡被引量：10
2014年
目的探讨一氧化氮(NO)水平下降诱导人胎盘滋养细胞凋亡的可能机制。方法体外培养人胎盘滋养细胞株(HTR-8),分别加入10、100、500、1 000μmol·L-1L-NAME,并设置对照组(0μmol·L-1L-NAME),孵育48 h;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测L-NAME对细胞存活率的影响;采用硝酸还原酶法测定细胞中NO的含量;利用透射电镜、流式细胞术和Annexin-V FITC染色检测L-NAME对HTR-8细胞凋亡的影响;Fe3+还原比色法检测总抗氧化能力(T-AOC)、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量。结果与对照组比较,100、500、1 000μmol·L-1L-NAME组细胞存活率及NO水平明显降低(P<0.05,P<0.01);Annexin-V FITC染色和流式分析均显示L-NAME能诱导细胞凋亡,并且呈剂量依赖性;NO水平与细胞凋亡数呈负相关(r=-0.5210);透射电镜结果显示:与对照组比较,实验组细胞核形态不规则,核膜固缩呈不规则状,染色质凝集或边集,线粒体肿胀或浓缩、嵴断裂或溶解,甚至消失,形成空泡,尤其在100μmol·L-1L-NAME组可见凋亡小体;同时,HTR-8细胞内T-AOC、SOD水平明显降低(P<0.05),MDA的含量明显升高(P<0.05);细胞凋亡数与T-AOC(r=-0.3212)、SOD(r=-0.2779)水平均呈负相关,与MDA(r=0.2807)含量呈正相关。结论氧化应激在NO水平降低引起的人胎盘滋养细胞凋亡中起重要作用。
王艳华张慧萍田珏周龙霞陈久凯马文斌孔繁琪赵丽刘现梅韩学波杨晓玲姜怡邓
关键词：一氧化氮N-硝基-L-精氨酸甲酯凋亡氧化应激妊娠期高血压疾病
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