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基质辅助激光解析电离质谱和电喷雾质谱共同快速确证达托霉素结构: 2015年; 运用基质辅助激光解析电离-飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS)和电喷雾-四级杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF MS)快速确证环脂肽达托霉素的结构。首先,ESI检测达托霉素相对分子量为1619.7107,与理论值偏差0.0007。选择其双电荷峰m/z 809.848作为母离子进行ESI串联质谱(MS/MS)测定,成功匹配了达托霉素环外氨基酸序列C9H19CO-Trp-Asn-Asp。其次,优化Li OH裂解达托霉素的实验条件,以MALDITOF/TOF MS监测开环效果,获得95%以上的开环样本后,分别运用MALDI和ESI进行MS/MS测定,达托霉素开环产物的b+和y+全部被匹配,达托霉素全部氨基酸序列得到确证。最后,对开环产物的ESI-MS/MS条件进一步优化,获得了丰富的低端碎片离子,解析了脂肪酸链结构,并绘制了脂肪酸链的裂解图。本方法快速、简便、准确,是确证环脂肽类化合物结构的可靠方法。; 黄亚娟张拓韩治国孟晓光宋纯艳刘曙晨郑俊杰魏开华; 关键词：达托霉素串联质谱电喷雾质谱

联合UV及SDS-PAGE监测并优化碳二亚胺偶联法制备多肽免疫原被引量：3: 2013年; 建立了一种多肽免疫抗原偶联的双监测法,获得一种操作简便、成功率高、适用范围广的碳二亚胺偶联法,并应用于多种肿瘤相关多肽标志物的免疫抗原制备。以合成多肽SP0104为标准品,牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,碳二亚胺(EDC)为偶联剂,对加样顺序、投料比、偶联时间等关键条件进行考察,采用UV和SDS-PAGE对反应产物进行联合监测,以偶联比和偶联率联合评价反应条件。加样顺序为多肽和载体蛋白先混合再加到碳二亚胺中,三者质量比为1∶1∶1,偶联时间为12 h,偶联比在4∶1～12∶1之间,偶联率在9%～20%之间,所得SP0104多抗效价达到1∶80 000,MALDI-TOF质谱分析证实该抗体准确捕获目标抗原。用优化的偶联方法制备多肽SPC09、SPC15、SPG01、SPG03、SPG04的免疫抗原,所得免疫血清效价均在1∶1万以上,最高可达1∶51.2万。所建碳二亚胺多肽偶联联合监测法简便实用,可提高多肽抗体制备的成功率。; 侯利平傅海媛陶亚岚黄亚娟孙云波宋纯艳夏云飞杨保安韩治国肖汉族郑俊杰甄蓓魏开华; 关键词：抗体

血清多肽SPG01、SPG03、SPG04检测鼻咽癌放疗敏感性的初步研究: 2014年; 应用血清多肽SPG01、SPG03、SPG04的多抗（PcAb）酶联免疫吸附方法（ELISA）,用于鼻咽癌放疗敏感性的检测。以碳二亚胺偶联法制备多肽免疫抗原,免疫动物制备兔血清多抗,用Protein A亲和层析法纯化多抗,选择3种多抗的工作滴度,应用多抗ELISA法检测63份鼻咽癌血清样本。紫外（UV）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）联合监测表明多肽偶联到BSA（牛血清白蛋白）上;动物免疫获得3种兔血清多克隆抗体各40 mL;纯化后的多抗纯度在90%以上,效价均在1∶100 000以上;3种多抗的检测滴度分别为1∶20 000,1∶100 000,1∶10 000;间接ELISA最低检测限为0.03μg/mL,相对标准偏差（RSD）为5.6%。t检验分析3种多肽区分鼻咽癌放疗敏感组与不敏感组,均呈显著差异（P〈0.000 1）。ROC曲线表明,3种多肽检测鼻咽癌放疗敏感性的特异性在90%以上,灵敏度为73%~93%。3种多肽标志物均能显著区分鼻咽癌放疗敏感组与不敏感组,所应用的多抗ELISA方法检测鼻咽癌放疗敏感性特异性好,灵敏度高,可用于鼻咽癌个体化治疗的放疗敏感性辅助诊断。; 侯利平宋纯艳孙云波陶亚岚傅海媛杨保安郑俊杰夏云飞甄蓓魏开华; 关键词：鼻咽癌多抗放疗敏感性

溶菌酶活性测定方法的改进及其在重组人溶菌酶质量标准建立中的应用: 2014年; 获得一种趋于均相反应体系的比浊法,用于重组人溶菌酶活性的研究,并建立相关操作规程和质量标准.通过显微计数法进行底物菌液质控,改进酶与菌液的混合方式和最佳酶用量,采用“双直线法”优化反应计时区间,并精确测定重组人溶菌酶含量.显微镜菌体计数法确定0.3 mg/mL底物菌液中菌体数保持在1.1 ×108个/mL左右;酶与菌液在样品池内经吸排法快速混合可趋近均相体系;酶的最佳用量为3μg;确定反应计时区间为0～60s;依据所制定的酶活性操作规程,确定重组人溶菌酶活性质量标准为45 000～ 65 000U/mg,日内、日间相对标准偏差均小于5％;优选Lowry法并精确测定蛋白含量为（1.0±0.1）mg/mL.改进后的方法稳定性得到明显提高,且操作简便、结果可靠,已被3家研究单位、企业验证并接受.建立的重组人溶菌酶活性和含量测定质量标准及操作规程具有实际参考价值.; 宋纯艳张拓侯利平原剑黄亚娟韩治国刘曙晨甄蓓魏开华; 关键词：比浊法

新型肝损伤血清标志物Pep5定量检测方法的建立及临床应用被引量：1: 2013年; 目的建立定量检测血清多肽Pep5的酶联免疫吸附方法(ELISA),用于判定肝损伤进程的研究。方法以待测血清样本稀释液包被酶联板,5%脱脂奶粉封闭,辣根过氧化物酶标记的抗Pep5单克隆抗体作为标记抗体,建立定量检测人血清多肽Pep5的ELISA,并用于临床检测690例肝损伤及健康血清样本。结果灵敏度为1.25ng/mL;线性范围(0～24ng/mL)内相关系数为0.998 7;与乙酰胆碱酯酶、层黏连蛋白、透明质酸、三型前胶原交叉反应率小于1.00%;添加回收率在99.09%～107.08%;批内、批间变异系数(CV)分别为5.62%～7.32%、6.21%～6.45%。与其他肝损伤指标乙酰胆碱酯酶试剂盒进行对比试验,表明两种检测方法有一定的相关性(r=0.68)。临床检测结果表明血清多肽Pep5水平随着肝损伤程度加重而升高,与正常血清差异有统计学意义(P<0.01)。结论多肽Pep5可用于肝损伤进程定量血清学检测,检测方法简便、可靠,为后续深入研究多肽Pep5的功能及相关诊断试剂盒的研制和开发提供了科学依据。; 傅海媛侯利平周晓明黄亚娟宋纯艳孙云波汪洋杨保安肖汉族甄蓓魏开华王海滨; 关键词：酶联免疫吸附法肝损伤血清学诊断

免疫质谱法检测肝癌血清多肽标志物被引量：4: 2012年; 建立免疫亲和富集分离与质谱分析相结合的免疫质谱法用于血清多肽标志物pep5的检测。多克隆抗体与蛋白A琼脂糖颗粒偶联用于捕获pep5,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测标志物。本方法的线性范围为1～48 nmol/L,检出限0.2 nmol/L;回收率为93.0%～103.1%,相对标准偏差(RSD)为6.4%～11.8%;反复冻融3次pep5,检测结果稳定;检测临床肝癌/正常血清样本灵敏度为78.0%、特异度为90%。该方法方便、快速、准确,适用于临床样本中低浓度标志物的检测研究,对于癌症的早期诊断具有重要意义。; 傅海媛原剑周晓明孙云波黄亚娟侯利平宋纯艳杨保安甄蓓高蓉貌盼勇林利忠徐淑芳肖汉族魏开华; 关键词：多肽抗体质谱

血清多肽Pep4及相关肽联合检测肿瘤的初步研究: 摘要：目的：开发高灵敏度、高特异性的血清多肽标志物及其检测技术,联合检测多种多肽类标志物,对肿瘤等重大疾病的早期筛查均具有非常重要的意义。Pep4及相关肽/(Pep9、Pep15/)是前期筛选出的肿瘤候选血清多肽标志物,...; 宋纯艳; 关键词：单克隆抗体 ELISA 肿瘤; 文献传递

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宋纯艳