张兆山
- 作品数：205 被引量：602H指数：13
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金海南省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- CFA／Ⅰ重组克隆定居因子菌毛抗原的纯化及形态学观察
- 1994年
- 用基因重组技术获得的高效表达肠毒素大肠杆菌定居日子抗原Ⅰ（ＣＦＡ／Ⅰ）的重组克隆，通过匀浆破碎、硫酸铵分级盐析部分纯化，再经超速离心及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０柱层析，得到了ＣＰＡ／Ⅰ的纯化样品，得率约为０．９ｍｇ／ｇ湿菌。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示一条蛋白质带，其分子量为１５ｋＤａ，与天然ＣＦＡ／Ⅰ相同。免疫扩散和蛋白质印迹试验证明，纯化的重组克隆ＣＦＡ／Ⅰ与天然ＣＦＡ／Ⅰ具有相同的抗原性及免疫原性。并在电镜下观察了ＣＦＡ／Ⅰ的菌毛形态。
- 李淑琴张兆山王飞夏志平
- 关键词：纯化ETEC
- 酵母双杂交系统: 探寻与内皮素受体相互作用的蛋白质被引量：1
- 1997年
- 酵母双杂交系统：探寻与内皮素受体相互作用的蛋白质文立民张兆山黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京１０００７１内皮素是近年来新发现的一种血管活性多肽。它是迄今所知体内最强烈、最持久的血管收缩因子，不仅可促进血管收缩，而且可刺激心血管系统的细胞增生及肥...
- 文立民张兆山黄翠芬
- 关键词：酵母双杂交系统内皮素受体蛋白质相互作用
- 蛇毒类凝血酶Calobin cDNA的设计合成与克隆被引量：11
- 2003年
- 人工合成了朝鲜蝮蛇(Agkistrodoncaliginosus)类凝血酶Calobin的编码序列。在设计引物时选择大肠杆菌和酵母菌的偏爱密码子,通过相互搭桥的方式,将全长为789bp的编码序列分成14个片段,每个片段长度为78个碱基左右,采用“核心模板法”并加以改进,通过4次PCR延伸反应,得到了全长基因。经扩增后回收目的片段,双酶切后连接到克隆载体,将得到的转化子酶切鉴定后,任意选择6个克隆进行双向测序,得到了全序列正确的3个克隆。本工作为类凝血酶在大肠杆菌和酵母系统中的高效表达奠定了基础,也为长度为700～900bp片段的合成提供了帮助。
- 袁盛凌段海清张兆山
- 关键词：蛇毒类凝血酶基因合成聚合酶链式反应
- 心肌缺血/再灌注期间硒拮抗自由基损伤机理的研究
- 黄益民刘燕霞张兆山韩玲
- 该项目为国家自然科学基金(39270199)、北京市自然科学基金(7942013)联合支持项目的延续研究，属医学基础与临床治疗学理论综合研究领域。其研究结果既可应用于指导临床防治自由基损伤时的用药选择，又可应用于指导抗自...
- 关键词：
- 关键词：心肌缺血再灌注谷胱甘肽过氧化物酶脂质过氧化损伤自由基损伤硒
- 大肠杆菌热敏肠毒素和耐热肠毒素基因融合及其免疫原性研究被引量：6
- 2000年
- 采用基因工程技术将编码大肠杆菌热敏肠毒素亚单位(LTB)基因和耐热肠毒素(ST)基因进行体外重组,得到的融合基因能在大肠杆菌中表达。重组菌株免疫动物后,均能诱发产生抗LT和抗ST抗体。实验结果表明,LT/ST融合蛋白不仅保持了LTB的免疫原性和与神经节苷酯GM1的结合能力,而且也赋予本来没有免疫原性的ST免疫原性,并极大地降低了ST的生物毒性,为构建理想的致腹泻大肠菌苗奠定了基础。
- 张兆山徐兵李淑琴舒东俞守义黄翠芬
- 关键词：大肠杆菌肠毒素基因融合免疫原性基因重组
- 幽门螺杆菌AlpA基因中四种黏附素基因保守区的克隆、表达、纯化及鉴定被引量：12
- 2002年
- 幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病因 ,与胃腺癌、胃黏膜相关淋巴样组织 (MALT)淋巴瘤的发生亦密切相关 .鉴于Hp已证实的四种粘附素保守区 (AB)是外膜蛋白 (OMP)和膜孔素 (porin)样成分 ,而外膜蛋白和膜孔素样成分是优秀的疫苗候选抗原 .用PCR技术扩增AB基因 ,将其定向插入 pET 2 2b (+)载体 ,在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达 .测序显示AB基因长 5 88bp ,编码 195个氨基酸 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶扫描分析 ,AB基因表达的蛋白质分子质量约为 2 2 5ku ,其重组蛋白质表达量占菌体总蛋白质的 2 9% ,表达产物经亲和层析纯化后蛋白质纯度达 96 % .经免疫印迹证实该重组蛋白可以被AlpA免疫兔血清所识别 .
- 白杨但汉雷王继德张兆山S.ODENBREIT周殿元张亚历
- 关键词：幽门螺杆菌克隆纯化
- 毒素源性大肠杆菌CFA/Ⅰ、CS3重组菌株粘附力、免疫原性和保护性研究
- 1995年
- 采用可逆性肠结扎成兔腹泻(RITARD)动物模型检测了毒素源性大肠杆菌(ETEC)定居因子抗原Ⅰ(CFA/I)和表面抗原3(CS3)重组菌各1株的肠道粘附力,免疫原性和保护性。经肠道及口服接种重组菌株对肠道均有较强的粘附力,与CFAs阴性宿主菌相比P<0.0025。口服免疫家兔时,第4周血清抗体滴度达到高峰,滴度分别为1:9000和1:80000;肠道免疫家兔后血清效价在第2周达到高峰,滴度分别为1:8000和1:60000。在抗体滴度高峰时进行ETEC野生株攻毒,结果显示口服组抗腹泻保护率为66.7％～75％,肠道组为50.1％～71.4％。攻毒后免疫家兔的排菌天数较对照组明显减少。
- 张蓓宁张兆山董自正汪江段海清黄翠芬
- 关键词：免疫原性腹泻
- 幽门螺杆菌热休克蛋白60基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2002年
- 目的 获取人幽门螺杆菌热休克蛋白60基因（Hsp60），并将它克隆到质粒 pET－22b（+）中进行核苷酸序列分析。方法 利用 PCR技术扩增 Hsp60，并将其定向插入 pET－22b（＋）载体中，通过 DNA序列分析仪进行核苷酸分析。结果DNA序列分析表明，所克隆的Hsp60基因序列与GeneBank公布的一致。结论 获得了序列正确的Hsp60基因，为其重组表达及相关研究奠定了基础。
- 白杨张亚历王继德李淑琴张兆山
- 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白60克隆免疫防治
- 幽门螺杆菌粘附素AlpA基因克隆、表达及免疫原性研究被引量：8
- 2003年
- 目的 构建表达幽门螺杆菌 (Hp)黏附素AlpA的候选菌株并研究其免疫原性。 方法 利用PCR技术扩增粘附素AlpA基因 ,将其定向插入 pET 2 2b(+)载体 ,在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达并通过免疫印迹实验研究其免疫原性。结果 克隆的粘附素AlpA基因序列与基因库公布的基本一致 ,粘附素AlpA重组蛋白表达量占菌体总蛋白的 31.9% ,经免疫印迹证实该重组蛋白可被AlpA免疫兔血清和Hp感染患者血清所识别。 结论 AlpA克隆、高效表达及其免疫原性的初步证实 ,为Hp基因工程疫苗的研制和粘附机制的研究打下了基础。
- 白杨陈烨王继德杨云生张兆山Odenbreit S周殿元张亚历
- 关键词：幽门螺杆菌粘附素免疫原性
- 抑瘤素-M(OSM)在GST融合表达系统中的表达、纯化和活性测定被引量：2
- 1999年
- 抑瘤素Ｍ是一种具有多种生物活性的细胞因子，具有重要的研究价值和潜在的应用前景。基于ＧＳＴ融合表达载体，构建了一个ＯＳＭ的高效表达系统，诱导表达后融合蛋白占全菌蛋白的５０％以上，在低温诱导的条件下，可溶性蛋白中融合蛋白的含量可达１５％。在对包涵体形式的融合蛋白变复性的基础上，通过亲和层析一步纯化达到９０％左右的纯度。对融合蛋白进行了活性测定，结果提示了Ｎ端的头两个氨基酸对ＯＳＭ的生物活性是重要的。
- 曹勇张兆山文立民李淑琴
- 关键词：活性测定GST
