汪志军
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人XAF1基因启动子的克隆及其在人肝癌细胞株中活性的测定被引量：1
- 2009年
- 目的分析XAF1基因启动子在肝癌细胞株中的活性,为研究XAF1基因转录调控的基本机制奠定基础。方法从肝癌细胞株中扩增XAF1基因的1 395 bp启动区域片段并分别克隆到报告基因载体pGL3-basic和pEGFP-1中,分别将含有XAF1基因启动子的报告基因载体pGL3-basic和pEGFP-1转染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721,检测萤火虫荧光素酶的活性并观察绿色荧光蛋白的表达。通过转染细胞、荧光素酶活性测定及观察绿色荧光蛋白的表达,检测其启动子活性。结果重组的质粒经双酶切和测序结果证实克隆的XAF1启动子片段序列正确;转染后的HepG2、SMMC7721荧光素酶相对发光强度分别是6.97±0.74、6.12±0.59。其绿色荧光蛋白强度明显低于对照组。结论本实验构建的含XAF1启动子的报告基因质粒为研究XAF1基因的转录调控提供实验依据。
- 陈琼余琴汪志军里进胡晓文王晶常莹林菊生
- 关键词：基因XAF1启动区转录调控
- 遗传印记基因PEG10转基因小鼠的建立及其皮下移植瘤生长和转移的变化被引量：1
- 2009年
- 目的 建立PEG10转基因小鼠模型，研究PEG10对小鼠皮下移植瘤的生长和转移的影响。方法PCR阳性转基因鼠经RT—PCR、Westernblot鉴定后，皮下注射H22细胞，连续测量肿瘤体积。12d后取肿瘤和肝脏组织进行HE染色，肝脏组织进行SP染色，检测PEG10蛋白的表达。计量资料采用独立样本的f检验。结果阳性首建鼠的肝脏中检测到目的基因和蛋白的表达。转基因小鼠皮下瘤的体积（4．08、4．23cm3）及质量（6．89、6．48g）均显著高于野生型小鼠（1．61cm。及1．63g，P〈0．05），均向周围组织侵袭并出现肝转移，肝脏中检测到PEG10蛋白；野生型小鼠的肿瘤组织有包膜，未出现肝转移。结论构建的PEG10转基因小鼠模型可促进皮下移植瘤的生长、侵袭和转移。
- 刘瑶林菊生郑新民谭锦泉汪志军张强吴伟常莹
- 关键词：肝肿瘤转基因小鼠皮下移植瘤模型
- β2-spectrin的siRNA对AML-12肝细胞增殖特性的影响被引量：1
- 2013年
- 目的应用特异性siRNA干扰小鼠肝细胞株AML-12中β2-spectrin表达,检测AML-12细胞增殖凋亡以及细胞周期的改变。方法化学合成β2-spectrin特异性siRNA,分别转染AML-12细胞,荧光定量PCR和Western blot确定其抑制效果。AML-12细胞经TGF-β细胞因子处理4h后,转染β2-spectrin特异性siRNA,48h后,BrdU标记法以及流式细胞术检测β2-spectrin沉默前后AML-12细胞增殖、凋亡以及周期变化;共聚焦技术检测干扰β2-spectrin表达对TGF-β/Smad信号通路中Smad3、Smad4核定位的影响。结果 siRNA可以高效特异沉默β2-spectrin的表达。流式细胞术检测显示,β2-spectrin沉默促进AML-12细胞增殖,抑制凋亡,S期细胞比例显著升高。免疫荧光结果显示,TGF-β处理后,Smad3、Smad4表达定位于细胞核,沉默β2-spectrin干扰Smad3、Smad4细胞核内定位。结论沉默β2-spectrin的表达促进AML-12增殖,抑制凋亡,促进细胞向S期转化。其机制可能是通过干扰Smad3、Smad4核定位而抑制TGF-β/Smad信号通路,进而发挥诱导凋亡效应。
- 汪志军涂炜刘芳
- 关键词：细胞增殖细胞周期
- ELF3多克隆抗体的制备及其免疫定位被引量：2
- 2010年
- 目的制备并鉴定兔抗小鼠胚肝血影蛋白3(embryonic liver fodrin 3,ELF3)的多克隆抗体,并探讨其在部分小鼠组织中的免疫定位。方法合成ELF3氨基端特异性多肽片段,连接载体蛋白钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemo-cyanin,KLH),免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,用ELISA方法检测抗体效价,Western blot和免疫组织化学方法检测抗体特异性及在小鼠组织中的表达情况。结果合成ELF3特异性多肽,并连接KLH后免疫实验兔,制备得到兔抗小鼠ELF3多克隆抗体,ELISA及Western blot检测结果显示此抗体效价及特异性高;Western blot和免疫组织化学检测结果显示ELF3在心、肝、肾组织中表达,尤其是细胞膜上表达明显。结论本实验成功制备ELF3多克隆抗体,并证实ELF3在小鼠心、肝、肾组织细胞膜表达明显,这将为ELF3功能研究提供有力的工具。
- 汪志军常莹吴伟姚津剑何星星林菊生宋宇虎
- 关键词：抗体制备免疫定位
