- 快速分离和鉴别转基因单克隆细胞的改良方法
- 2016年
- 目的探索快速有效的从稳定转染后的悬浮多克隆细胞中分离、纯化并鉴定出单克隆的技术改良法。方法电穿孔法稳定转染后的T淋巴细胞系先在分离培养基中扩增成多克隆,用有限稀释法分离出单个细胞,一部分用丝裂霉素C处理的饲养细胞培养扩增单克隆,一部分进行无饲养细胞扩增,用未转染的T淋巴细胞系的新鲜培养上清换液,对比两法的单克隆得率。检测单克隆的靶基因整合则先用荧光素酶报告实验再结合引物PCR扩增法,筛选出表达标记蛋白并整合有完整特异基因片段的单克隆。结果两种方法在分离培养基中存活增殖的活细胞克隆数量比例分别为5.27%和4.55%,无显著差异,通过荧光素酶报告基因实验确定完整整合外源基因的靶克隆比率(0.80%和0.57%)也无显著差异。单克隆的报告荧光素酶表达强度显著高于多克隆和对照,比较直观快速。结论无饲养细胞法避免了饲养细胞复燃污染单克隆细胞,简化了步骤提高了效率,能保证单个细胞在选择培养基中成功扩增出单克隆。荧光素酶报告基因实验能快速、有效检测出外源整合基因的表达。
- 王亚婷李新娜张丽娜郭芳杜鹃赵溶冰张正银周晓娜汪晶冰李剑华刘敏方宏罡
- 关键词：饲养细胞单克隆培养上清丝裂霉素C
- 流式细胞术计数网织红细胞的参考值调查被引量：3
- 2002年
- 汪晶冰李迎春庞玉军杨金新马洪星荣俊梅
- 关键词：红细胞计数流式细胞术参考值
- 46,XY,t(7;20)生育脑膨出患儿1例
- 2011年
- 患者男,28岁,汉族.其妻怀孕4个月b超检查发现胎儿脑膨出,自述怀孕早期曾经服用左氧氟沙星.患者夫妇双方表型及智力正常,非近亲结婚,否认家族史.
- 汪晶冰吴晓棠马洪星
- 关键词：生育脑膨出近亲结婚怀孕早期家族史
- 染色体平衡易位两例
- 2007年
- 例1 女，23岁，结婚3年共孕3次，均在2个月左右无明显诱因自然流产。夫妻表型及智力正常，非近亲结婚，怀孕期间未接触放射性及有毒、有害物质。细胞遗传学检查：抽取夫妇外周血进行淋巴细胞培养，制片，G显带，计数30个分裂相。分析10个染色体核型，核型为46，XX，t（14；18）（14pter→14q24∷18q12→18qter；18pter→18q12∷14q24→14qter）。其夫染色体核型正常。
- 汪晶冰王成英曹秀华吴晓棠
- 关键词：染色体平衡易位染色体核型细胞遗传学检查淋巴细胞培养近亲结婚怀孕期间
- 51例14岁以下儿童的细胞遗传学分析
- 2009年
- 目的探讨染色体畸变与儿童智力和身体发育异常的关系。方法采集静脉血2mL，用RPMI1640培养液37℃培养72h，常规收获细胞，G显带，显微镜下计数30个中期分裂相，详细分析3—6个染色体核型。结果在51例14岁以下儿童中，发现异常核型24例，其中常染色体数目异常16例，常染色体结构异常4例，性染色体数目异常2例，性染色体结构异常2例。结论染色体异常是儿童智力和身体发育异常的重要原因。儿童不明原因智力或身体发育异常应进行染色体检查，明确的染色体疾病患儿有必要适时进行行为训练、手术治疗或激素替代治疗。同时，患儿父母再次妊娠时必须进行贵传咨询。
- 马洪星孙世平汪晶冰吴晓棠
- 关键词：染色体异常儿童
- 流式细胞术的原理及临床应用被引量：12
- 2003年
- 马洪星张春斌汪晶冰庞玉军张丽岩
- 关键词：流式细胞术免疫学
- 电穿孔转染法提高基因表达效率的电场强度优化探索被引量：1
- 2015年
- 目的采用监测荧光报告基因表达的策略,探索应用电穿孔法进行稳定转染的适合悬浮淋巴细胞的电场强度。基因转染技术广泛应用于基因表达调控,基因功能,信号转导和药物筛选研究,已经成为当前生命科学的基本操作之一。外源性DNA导入哺乳动物或人细胞有两种类型:瞬时转染和稳定转染。天生趋于悬浮的细胞非常难转染,多种方法都效率低下。而电穿孔法理论上可用于各种细胞,尤其对于悬浮细胞十分有效。本文就悬浮生长的T淋巴细胞的电穿孔法转染条件之一(电场强度)进行优化探讨。方法用荧光报告基因质粒转入急性白血病T淋巴细胞系,根据报告荧光活性单位值和蛋白浓度判断不同电场强度(250,270,290V/cm)对悬浮细胞的最佳电穿孔转染条件。结果随电压升高,原始荧光报告基因表达加强,270和290V无明显差异,存活细胞数量依次降低。相对荧光单位,表明相同细胞数量存活时,转染效率按照250,270,290V顺序依次升高。中等强度的270V电压,既保证了足够多的转染体存活,又可得到满意的高表达基因荧光信号。结论根据荧光蛋白表达和蛋白吸光度判断,950μF电容和0.4cm的放电杯中转染淋巴细胞,电场强度270 V/cm的效率最佳。
- 寇筱囡王亚婷郭芳娄晔郭其林刘胜全汪晶冰吴晓棠唐晓红
- 关键词：电场强度电穿孔稳定转染
- 46，XY，t（3；18）伴流产与死胎一例
- 2007年
- 患者男，29岁。其妻第1次怀孕在两个月时自然流产，第2次怀孕在40多天时阴道流血，B超显示胚胎停止发育。患者夫妻双方表型及智力正常，非近亲结婚，否认家族史，怀孕期间未接触有毒有害和放射性物质。
- 汪晶冰曹秀华王成英常纪
- 关键词：死胎胚胎停止发育怀孕期间阴道流血夫妻双方近亲结婚
- 93例原发闭经患者的染色体核型及临床分析被引量：4
- 2015年
- 原发闭经[1]是指年龄超过13周岁,第二性征未发育;或年龄超过15周岁,第二性征已发育,月经还未来潮,是妇产科较常见的疾病。其发病机理复杂多样,其中由于染色体异常而引起的原发闭经是常见的原因之一。所以,对患者进行染色体核型分析有助于疾病的诊断和治疗。为此,我们对2008年1月至2013年12月来我院妇产科就诊93例原发闭经患者进行了染色体核型分析。现报告如下。
- 汪晶冰马洪星王亚婷吴晓棠曹秀华
- 关键词：原发闭经染色体核型分析性别决定染色体结构异常性反转综合征
- 46,XX,5p-伴智力低下一例
- 2008年
- 王成英汪晶冰王亚婷吴晓棠
- 关键词：智力低下染色体检查
