王湛
- 作品数：33 被引量：51H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 过氧化物还原酶3在宫颈上皮转染人乳头瘤病毒16型之后的表达变化
- 2015年
- 目的 检测过氧化物还原酶3（peroxiredoxin 3,PRX3）在宫颈上皮转染人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV） 16型之后的表达变化,以探讨PRX3在宫颈癌发生中的作用.方法 切取正常宫颈转化区的上皮组织进行贴壁培养,用含有HPV16 E6/E7基因的重组pcDNA3.1载体转染宫颈上皮细胞.待建立稳定表达HPV16 E6/E7的细胞系以后,通过实时定量PCR和蛋白质印迹法检测转染前后PRX3表达水平的变化.结果 在稳定表达HPV16 E6/E7基因的宫颈上皮细胞中,PRX3的表达水平（包括mRNA和蛋白）显著降低.结论 高危型HPV16与宫颈上皮细胞发生整合之后,通过诱导包括PRX3在内的一系列基因的表达变化,导致宫颈上皮的恶性转化及宫颈癌的发生.
- 李连芹张永岗陈春玲王湛詹少兵
- 关键词：过氧化物酶类宫颈肿瘤
- 自噬受体蛋白p62的表达及功能研究被引量：3
- 2022年
- 目的:构建人自噬受体蛋白p62的真核表达质粒,初步探索p62在氧化应激中的功能。方法:从HeLa细胞系中扩增SQSTM1基因,插入真核表达载体nFLAG/pRK5,构建p62的重组表达质粒nFLAG-SQSTM1/pRK5。采用HEK293T细胞表达带有FLAG标签的重组p62蛋白,免疫共沉淀法观察p62和核因子E2相关因子2(Nrf2)相互作用。结果:重组表达质粒nFLAG-SQSTM1/pRK5经琼脂糖凝胶电泳和测序对比均与预期结果一致,Western blot实验中p62蛋白可正常表达,且大小与预期结果一致。免疫共沉淀和蛋白质谱证明p62与氧化应激转录调控蛋白Nrf2可相互作用。结论:采用真核表达系统成功表达p62蛋白,并发现其与Nrf2可相互作用,为进一步研究p62与Keap1-Nrf2通路关系提供依据。
- 王娇张莉李颖王慧王湛刘宏图
- 关键词：自噬真核表达
- EB病毒感染与胃癌患者临床病理特征相关性的Meta分析被引量：5
- 2009年
- EB病毒(EPstein-Barr virus,EBV)感染与多种恶性肿瘤的发生相关.大约10%的胃癌组织细胞中可以检测到EB病毒编码的小RNA(EBERs),表明EBV感染与部分胃癌的发生相关.为研究EBV感染与胃癌临床病理特征的相关性,本研究汇总了EBV相关胃癌的研究论文,对采用原位杂交方法检测EBV的22篇论文进行了Meta分析.22篇入选的论文中收集的胃癌病例5475例,检测到EBV阳性病例411例,EBV阳性率为7.5%.在EBV阳性胃癌中,男性检出率为11.1%,女性检出率为3.0%,男性检出率相当于女性检出率3倍多;EBV阳性胃癌与阴性胃癌相比具有较少的淋巴结转移;EBV阳性胃癌与癌组织发生部位相关,并且残胃癌中EBV感染率较高.依据组织学分型,EBV阳性胃癌弥漫型为8.1%,肠型为8.0%.统计分析显示,EBV感染与组织学分型无显著相关性(P>0.05);被检标本类型包括存档蜡块和新鲜手术切除组织标本:EBV阳性率分别为7.9%,6.5%.统计分析表明,EBV相关胃癌与标本类型无显著相关性(P>0.05);在地域分布方面,EBV阳性胃癌检出率美洲为9.4%,亚洲为6.1%,欧洲为9.1%,统计分析显示,EBV相关胃癌与地域分布显著相关(P<0.05).Meta分析表明,EBV感染仅发生在胃癌组织细胞中,并且与患者性别、淋巴结转移、肿瘤组织发生部位及地域分布显著相关(P<0.05),与患者肿瘤组织学分型、标本类型无显著相关性(P>0.05).结果提示,EBV阳性胃癌具有独特的临床病理学特征.
- 李淑英杜海军王湛周玲赵晓瑜曾毅
- 关键词：EB病毒胃癌META分析原位杂交
- DC—LMP2与rAd—LMP2所诱导的细胞免疫应答效果研究被引量：2
- 2013年
- 目的比较DC-LMP2与rAd—LMP2在BALB／c小鼠中的免疫效果。方法从BALB／c小鼠中分离骨髓细胞，在细胞因子作用下体外诱导培养获得小鼠树突状细胞（mDC），再以100MOI的含EB病潜伏膜蛋白2的重组腺病毒（rAd—LNP2）感染，获得DE—LNP2，免疫酶法确定LMP2在DC中表达。于0，2，4周，分别以PBS、DC-LMP2和rAd-LMP2肌肉免疫BALB／c小鼠，第5和8周检测小鼠体内LMP2特异性细胞应答水平。结果骨髓细胞体外成功诱导获得DC，LMP2在DC中表达。DC—LMP2和rAd—LMP2均可诱导LMP2特异性细胞免疫应答，随时间推移而减弱。rAd—LMP2诱导特异性细胞免疫应答水平高于DC—LMP2。结论肌肉免疫rAd—LMP2能够在BALB／c小鼠中诱导较强的LMP2特异性细胞免疫应答。
- 杜海军王湛尉秀霞周玲叶树清曾毅
- 关键词：树突细胞病毒包膜蛋白质类
- EBV-LMP2蛋白的表达和初步纯化
- 2010年
- 目的 应用杆状病毒表达载体表达并纯化EB病毒LMP2蛋白.方法 利用杆状病毒Bac-to-Bae杆状病毒表达系统,将EBV-LMP2基因插入到质粒pFastBacTMHT B中,获得携带EBV-LMP2基因的重组杆状病毒Bac-LMP2.重组病毒感染Sf-9细胞,表达N端携带6个组氨酸（6 X His）的LMP2融合蛋白His-LMP2.经镍离子亲和层析纯化,获得纯化蛋白.结果 SDS-PAGE及Western-Blot检测表达的蛋白相对分子质量大小与预计结果一致.HPLC分析纯化后蛋白的纯度可达86%.结论 利用杆状病毒表达系统表达EB病毒LMP2基因并经过初步纯化后,可以获得较好纯度的LMP2蛋白.
- 王湛马晶周玲张晓光杜海军杨松梅曾毅
- 关键词：基因表达
- EB病毒LMP2-LMP1Δ融合基因免疫效果的初步研究被引量：6
- 2011年
- 目的构建EBV LMP2-LMP1Δ融合基因,初步观察融合基因体内诱导EBV特异性细胞免疫应答的效果。方法 (1)应用PCR方法构建包含EBV-LMP2全长和去除致癌基因的EBV-LMP1Δ融合基因,并将融合基因插入到pcDNA3.1(+)-his真核表达载体中,构建重组表达质粒pcDNA-LMP2-LMP1Δ,Western blot和免疫荧光方法检测融合蛋白的表达。(2)使用pcDNA-LMP2-LMP1Δ及携带LMP1Δ和LMP2基因的重组腺病毒单独或联合免疫Balb/c小鼠,末次免疫1周后应用IFN-γELISPOT方法检测小鼠脾淋巴细胞中EBV特异性CTL水平。结果 (1)真核表达质粒pcDNA-LMP2-LMP1Δ能够在293细胞中表达LMP2-LMP1Δ融合蛋白,融合蛋白分子量大小正确,具有免疫原性。(2)重组质粒pcDNA-LMP2-LMP1Δ免疫小鼠能够诱导出EBV特异性的CTL,但诱导的CTL水平很低,1×106小鼠脾淋巴细胞中平均斑点数只有12个,远远低于LMP1Δ、LMP2重组腺病毒平均495个斑点数的免疫结果。但使用pcDNA-LMP2-LMP1Δ和重组腺病毒联合免疫,与只使用重组腺病毒相比,诱导的EBV特异性CTL水平能够显著提高,1×106小鼠脾淋巴细胞中平均斑点数可达1 001个(P<0.01)。结论构建的EBV LMP2-LMP1Δ融合基因能够有效表达LMP2-LMP1Δ融合蛋白,并能够在小鼠体内诱导出EBV特异性的CTL反应,与重组腺病毒联合使用,可以提高特异性CTL应答水平。
- 王湛尉秀霞周玲杜海军叶树清曾毅
- 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白1潜伏膜蛋白2融合基因
- 一株携带EB病毒潜伏膜抗原2基因的重组痘苗病毒及其应用
- 本发明提供一株携带EB病毒潜伏膜抗原2基因的重组痘苗病毒及其应用，所述重组病毒的制备方法为：构建携带EBV LMP2、绿色荧光蛋白外源基因的重组质粒与MVA共同感染BHK‑21细胞，通过同源重组获得只携带EBV LMP2...
- 曾毅王湛孙立莹
- 文献传递
- Ad5F35-LMP2重组腺病毒免疫效果的研究被引量：2
- 2007年
- 目的了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒（Ad5F35-LMP2），免疫恒河猴的特异性细胞和体液免疫的效果。方法分别使用高剂量（1．5×10^10TCID50/只）、中剂量（1．5×10^9TCID50/只）、低剂量（1．5×10^8TCID50/只）Ad5F35-LMP2重组腺病毒，同时设对照组（PBS4．0 ml／只）。肌内注射免疫恒河猴，每个月一次，共免疫3次，第0、4、8、12周时使用Elispot方法检测猴外周血EBV—LMP2细胞毒性T细胞应答，同时应用免疫酶方法检测血清中LMP2抗体。结果3个剂量Ad5F35-LMP2腺病毒免疫恒河猴均可以诱导出有效的细胞免疫应答及一定的抗体应答，免疫应答水平的高低与病毒剂量的高低有一定的关系，较高剂量产生的细胞及体液免疫应答水平比低剂量的高。结论Ad5F35-LMP2非复制型重组腺病毒疫苗可以有效的诱导恒河猴产生EBV—LMP2特异性细胞和体液免疫反应。
- 莫武宁周玲吴小兵王湛唐安洲黄光武余双庆王琦叶树清杜海军曾毅
- 关键词：腺病毒疱疹病毒4型膜蛋白质类恒河猴
- IgA／EBV—VCA阳性人群和鼻咽癌患者的EB病毒潜伏膜蛋白2特异性细胞免疫及EBVDNA载量检测被引量：6
- 2016年
- 目的探讨IgA／VCA抗体滴度与EBVLMP2特异性细胞免疫水平和EBVDNA拷贝数关系。方法免疫酶法检测普查样本IgA／VCA抗体滴度；选取IgA／VCA抗体阳性人群和治疗前鼻咽癌患者，通过γ-干扰素Elispot和EBVDNA荧光定量试剂盒检测LMP2特异性细胞免疫水平和血浆中的EBVDNA载量。结果普查广西苍梧县城自然人群共1233人，其中80人IgA／VCA抗体阳性，阳性率为6．0％。对其中的72例IgA／VCA抗体阳性人群和20未治疗的鼻咽癌患者进行了LMP2特异性细胞免疫和EBVDNA检测，随着抗体滴度的升高，LMP2特异性细胞免疫反应水平降低，而血浆中EBVDNA拷贝数有随IgA／VCA抗体滴度升高而增加的趋势。结论EBV—LMP2特异性细胞免疫水平和EBVDNA拷贝数可能与IgA／VCA抗体滴度相关。
- 谭珍连王勇利麦稚平廖建王湛詹少兵杜海军
- 关键词：潜伏膜蛋白2细胞免疫EBV
- 携带EBV-LMP2基因的DNA疫苗、腺相关病毒疫苗和腺病毒疫苗免疫小鼠的特异性细胞免疫应答被引量：7
- 2009年
- 细胞免疫应答，尤其是CD3^＋CD8^＋细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL），在控制病毒感染中扮演着重要角色，鼻咽癌（nasopharyngenl carcinoma，NPC）与EB病毒（epstein-barr virus，EBV）持续感染密切相关，在鼻咽癌疫苗的研究中，人们将研究重点放在增强特异性抗病毒CTL应答上，本研究单独或联合使用表达EB病毒潜伏膜蛋白抗原2（epstein-barr virus latent membrane protein 2, EBV-LMP2）的DNA疫苗、腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）疫苗、非复制5型腺病毒疫苗（Ad5），分别于0，2，4周肌肉注射免疫4-6周龄的雌性Balb／C小鼠，IFN-γ，免疫斑点法检测EBV—LMP2特异性细胞免疫应答水平，疫苗诱导的特异性细胞应答水平与疫苗的免疫策略有关，其中，使用3种载体疫苗联合免疫的效果最好，其次则是先使用DNA疫苗免疫两次，再用腺病毒疫苗加强免疫一次的联合免疫方法，DNA疫苗和AAV疫苗单独免疫能够诱导出特异性的CTL，但与联合免疫相比诱导的应答水平很低，结果表明，使用DNA，AAV和腺病毒载体疫苗联合免疫，能够更好地诱导机体产生特异性细胞免疫应答，为鼻咽癌的防治提供了很好的疫苗策略。
- 杨松梅王湛周玲杜海军莫武宁曾毅
- 关键词：疫苗重组腺病毒疫苗联合免疫特异性细胞免疫应答
