韩广东
- 作品数：65 被引量：282H指数：9
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- 山东省基本消灭疟疾后5年来的监测被引量：1
- 1994年
- 山东省基本消灭疟疾后５年来的监测山东省寄生虫病防治研究所（２７２１３３）傅兆义，杨宝金，张诒鲁，李继民，赵长磊，付斌，韩广东，宋宏宇，张红花山东仅有以中华按蚊为传播媒介的间日疟流行，６０年代和７０年代初曾先后出现两次大面积暴发流行，年发病率高达１０％...
- 傅兆义杨宝金张诒鲁李继民赵长磊付斌韩广东宋宏宇张红花
- 关键词：疟疾
- 全文增补中
- 弓形虫ROP2基因的克隆与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的体外扩增弓形虫棒状体分泌抗原2(ROP2)靶基因,构建真核表达载体pc-DNA3-ROP2。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据基因库ROP2基因序列设计合成1对引物,应用PCR扩增ROP2基因片段,回收纯化后克隆入TA载体质粒pUCm-T;用限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ双酶切该重组子,将切下的ROP2基因在T4DNA连接酶作用下插入真核细胞表达载体质粒pc-DNA3,并进一步作双酶切、PCR及测序鉴定。结果以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出1.7kbROP2基因片段,克隆于pUCm-T载体中,再将ROP2基因亚克隆于真核表达载体质粒pc-DNA3,经筛选鉴定,构建pc-DNA3-ROP2重组质粒;测序结果显示,重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP2的抗原蛋白。结论弓形虫ROP2基因片段,经TA克隆及亚克隆,构建弓形虫pc-DNA3-ROP2重组质粒。
- 魏庆宽张佃波李瑾李桂萍王洪法崔勇柏雪莲付斌刘玉冰宰德富黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：弓形虫克隆基因重组
- ELISA IFAT和PCR/生物素探针检测中枢神经系统疾病中弓形虫感染被引量：2
- 2002年
- 目的 比较 ELISA、IFAT和 PCR/生物素探针检测弓形虫感染的效果 ,了解中枢神经系统疾病中弓形虫感染的情况。方法 应用 EL ISA、IFAT和 PCR/生物素探针 (PCR-BP)对 164例脑囊虫病、10 8例疑似脑囊虫病、88例原发性癫痫患者和 115例健康人群进行了血清弓形虫抗体及血液中弓形虫特异序列 DNA检测和比较。结果 ELISA和 IFAT检测各组人群抗弓形虫抗体阳性率分别为 15 .85 %、14 .81%、13 .64 %和 6.0 9% ,14 .0 2 %、14 .81%、14 .77%和 6.0 9%。PCR-BP检测各组弓形虫特异性 DNA阳性率分别为 2 .44 % (4 /164 )、3 .70 % (4 /10 8)、3 .41% (3 /88)、0 (0 /115 )。结论 PCR/生物素探针适合诊断现症弓形虫感染 ,而 EL ISA和 IFAT可作为弓形虫感染的筛选方法。脑囊虫病。
- 张洪花王昌源汪照国韩广东魏庆宽李玉娥
- 关键词：弓形虫PCR脑囊虫病原发性癫痫
- PCR/DNA探针检测系统用于间日疟原虫检出及基因型检测的研究被引量：4
- 1999年
- 根据间日疟原虫环子孢子表面蛋白（ＣＳＰ）基因序列研制了ＰＣＲ／ＤＮＡ探针检测系统。试验证明该检测方法对间日疟原虫特异，检出原虫密度为０．２个／μｌ，病人阳性检出率为９６．２％。试验中对不同ＰＣＲ操作过程及试验样本不同处理方法的检测结果进行了比较。在样本的原虫基因型检测分析中，基因优势型ＰＶ２１０阳性率为８８．５％，基因变异型ＰＶ２４７阳性率为１１．５％，混合型阳性率为３．８％。
- 韩广东张洪花黄炳成陈锡欣刘凤梅张晓静杨宝金程义亮
- 关键词：间日疟原虫基因型鉴定
- 微小隐孢子虫表面抗原CP23基因的克隆及表达被引量：7
- 2006年
- 目的构建微小隐孢子虫表面抗原CP23基因表达载体并获得重组表达蛋白。方法用微小隐孢子虫卵囊感染免疫抑制BALB/c小鼠,用不连续蔗糖密度梯度离心法纯化微小隐孢子虫卵囊,用酚-氯仿抽提法提取微小隐孢子虫基因组DNA,PCR扩增CP23基因片段,然后克隆至TA载体;通过酶切、测序鉴定后,将CP23基因片段用限制性内切酶切下克隆至pET-30a(+)载体,构建pET-30a-23质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达蛋白用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。结果扩增出约340bp的微小隐孢子虫CP23基因片段并成功构建pET-30a-23质粒,表达出分子质量单位为27ku的融合蛋白,Western blot显示该蛋白能被抗微小隐孢子虫血清识别。结论成功构建pET-30a-23质粒,表达产物具有免疫反应性,为微小隐孢子虫的免疫学诊断及疫苗研制打下了基础。
- 宰德富张佃波魏庆宽韩广东李瑾刘克义
- 关键词：微小隐孢子虫克隆WESTERNBLOT
- 寡核苷酸SD_(92)探针用于蚊体内马来丝虫幼虫的检测被引量：2
- 1997年
- 寡核苷酸ＳＤ９２探针用于蚊体内马来丝虫幼虫的检测山东省寄生虫病防治研究所＊（济宁２７２１３３）陈锡欣黄炳成刘克义杨宝金韩广东蚊媒体内丝虫幼虫的检测是丝虫病监测的重要内容。传统的蚊虫解剖查幼丝虫费时费力，不适应当前形势的需要。我们以合成寡核苷酸ＳＤ９２...
- 陈锡欣黄炳成刘克义杨宝金韩广东
- 关键词：丝虫病丝虫寡核苷酸探针
- 山东省动物弓形虫感染血清学调查被引量：1
- 1995年
- 赵玉强杨宝金付斌韩广东邵其峰
- 关键词：动物弓形虫感染血清学弓形虫病
- 弓形虫抗原的保护性研究被引量：34
- 2001年
- 目的 研究弓形虫抗原对免疫宿主的保护性。 方法 用 SDS- PAGE大胶板电泳对弓形虫抗原进行分离 ,选择 4组份特异抗原带 (P2 2～ 2 6、P30、P35、P6 7)洗脱获得抗原后 ,分别与福氏完全佐剂混匀免疫小鼠 (每组 10只 ) ,发现P30诱导的小鼠抗弓形虫 Ig G抗体出现最早 ,滴度最高 ,其次为 P35。以毒力减弱的 RH株弓形虫对免疫后的各组小鼠进行攻击。 结果 对照组、P2 2～ 2 6、P30、P35和 P6 7组小鼠的平均存活时间分别为 7.1、7.8、8.3、8.0和 7.3d。 结论P30对小鼠具有较强的保护力 (P<0 .0 5 ) ,次为 P35。
- 张洪花韩广东王昌源刘湘萍闫歌刘玉冰刘凤梅傅斌贾凤菊辛福敏岳继娥
- 关键词：弓形虫抗原保护性免疫力
- 弓形虫ROP2核酸疫苗免疫保护作用的研究被引量：22
- 2006年
- 目的研究ROP2核酸疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法42只BALB/c小鼠随机分为3组:实验组、空质粒组和PBS对照组,各组小鼠分别肌注pc-DNA3-ROP2重组质粒50μg、pc-DNA3空质粒50μg和PBS50μl,共免疫3次,每次间隔3周,末次接种量均加倍。末次免疫后2周,各组分别取4只小鼠的血清、脾和淋巴组织,检测CD4+、CD8+及各细胞因子。其余各组每鼠腹腔攻击感染RH株弓形虫速殖子500个,观察其存活时间等。结果ROP2核酸疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应,小鼠血清抗体滴度高并能识别由基因重组体外诱导表达的ROP2蛋白抗原;实验组小鼠的CD4+T细胞增殖明显(69.5±3.4)%、CD4+/CD8+比值显著升高(4.69±1.32)%(P<0.01);其脾、淋巴结细胞培养液及血清中白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-12、γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF)均有不同程度的升高,尤其是血清中升高最为显著。弓形虫攻击感染180h后,实验组小鼠免疫保护率为88.9%,与对照组相比,小鼠存活时间明显延长、初始死亡时间明显推迟(P<0.01)。结论ROP2核酸疫苗具有较强的免疫原性,能产生良好的免疫保护作用。
- 魏庆宽李瑾傅婷霞柏雪莲崔勇张佃波王洪法刘玉冰付斌宰德福黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护
- 微小隐孢子虫重组BCG-CP15/60-23疫苗免疫原性的研究被引量：5
- 2008年
- 目的探讨微小隐孢子虫重组BCG-CP15/60-23疫苗(rBCG-CP15/60-23)的免疫原性。方法用rBCG-CP15/60-23免疫BALB/c小鼠,免疫前后取血,用ELISA法检测IgG抗体,末次免疫后2周取淋巴细胞作体外培养,测定培养上清IFN-γ、IL-2和IL-12的水平。设实验组、BCG组、载体组和PBS对照组。结果rBCG-CP15/60-23免疫后2周开始小鼠IgG抗体水平逐渐升高,与BCG组和载体组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);免疫鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ和IL-2的含量与PBS对照组和BCG组比较差异有统计学意义(P均<0.05),IL-12水平组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论rBCG-CP15/60-23免疫小鼠后能刺激机体产生IgG抗体,IFN-γ和IL-2的分泌增加,具有较好的免疫原性。
- 黄炳成李瑾魏庆宽肖婷崔勇韩广东
- 关键词：微小隐孢子虫疫苗免疫原性
