韩苇
- 作品数：79 被引量：389H指数：10
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程经济管理更多>>
- Bruton酪氨酸激酶在昆虫细胞中表达的初步研究
- 1998年
- 用杆状病毒表达载体系统表达小鼠Ｂｒｕｔｏｎ酪氨酸激酶（Ｂｒｕｔｏｎｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ，Ｂｔｋ）．构建重组转染载体时，于Ｂｔｋ起始码的上游插入了一段Ｈ９０２序列．用重组转染载体、苜蓿夜蛾核型多角体病毒线性ＤＮＡ和质脂体共转染Ｓｆ９昆虫细胞，经过对重组杆状病毒三轮扩增后，用Ｈ９０２抗体检测表明，昆虫细胞中Ｂｔｋ的表达已达最高水平．对表达后Ｂｔｋ自身磷酸化检测表明，该激酶具有自身磷酸化活性．
- 韩苇药立波T.Kawakami
- 关键词：酪氨酸激酶昆虫细胞
- EPO模拟肽基因4串联体的构建和表达被引量：13
- 2001年
- 目的 克隆和表达 EPO模拟肽基因 4串联体 .方法 设计了特殊的基因串联方案 ,在人工合成 EPO模拟肽全基因的基础上 ,将 EPO模拟肽基因由单体逐步地连接成 4串联体 .继而将获得的正确 EPO模拟肽 4串联体插入 p BV2 2 0表达载体诱导表达 .结果 构建的 EPO模拟肽基因 4串联体经酶切和 DNA测序分析 ,结果表明该基因串联体的序列与设计的序列完全相同 .EPO模拟肽 4串联体插入 p BV2 2 0载体后 ,重组菌经 42℃诱导 4h,SDS- PAGE分析结果显示 ,该串联体得到较高水平的表达 .凝胶扫描结果表明 ,其表达量约占菌体蛋白总量的 2 0 % .结论 EPO模拟肽基因
- 韩苇颜真王俊楼赵永同石继红张英起
- 关键词：模拟肽大肠杆菌质粒构建
- 重组人胸腺素β_4基因的克隆、表达、纯化、鉴定及活性检测被引量：5
- 2008年
- 目的:利用基因工程的方法原核表达重组人胸腺素β4(Tβ4)并对其进行纯化和鉴定.方法:使用大肠杆菌偏爱密码子合成人Tβ4全长基因,构建了Tβ4的二串联体基因(Tβ4②),将其克隆入表达载体pET-22b(+)中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,IPTG诱导表达后,经盐析、疏水层析和离子交换层析纯化重组蛋白,采用免疫印迹和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对重组蛋白进行鉴定.结果:获得了纯化的重组Tβ4②蛋白,并具有生物学活性.结论:成功构建、表达和纯化了Tβ4②,为其功能研究奠定基础.
- 张珍游颜杰李维娜薛晓畅赵宁包春杰韩苇张英起
- 关键词：胸腺素Β4串联重复序列基因表达
- MUC1在甲状腺癌及甲状腺良性病变组织中的表达及意义被引量：7
- 2003年
- 目的检测多态性上皮粘蛋白 (polymorphicepithelialmucin ,PEM ,又名MUC1)在甲状腺癌及甲状腺良性病变组织 (结节性甲状腺肿 ,甲状腺腺瘤 )中的表达 ,探讨其在甲状腺癌诊断和免疫治疗中的意义。方法采用免疫组化方法检测 6 8例甲状腺癌及 18例甲状腺良性病变组织、10例甲状腺正常组织中MUC1的表达。结果甲状腺癌组织中MUC1阳性表达 5 1例 ,免疫组化染色表现为胞浆内深棕色或棕黄色颗粒 ;结节性甲状腺肿 ,甲状腺腺瘤MUC1阳性表达 4例 ,甲状腺滤泡上皮腺腔缘为黄色或棕黄色颗粒 ;正常甲状腺组织中阳性表达 1例。MUC1在甲状腺癌组织中的阳性表达率与甲状腺良性病变组织及甲状腺正常组织相比 ,差异有显著性 (χ2 =17 2 0 ,P <0 0 1)。MUC1在甲状腺癌组织中阳性表达与甲状腺癌的病理类型和颈淋巴结有无转移无关 (χ2 =0 72 ,P >0 0 5 )。结论MUC1在甲状腺癌组织中的表达及其分布特点可作为甲状腺癌的鉴别诊断指标。
- 袁时芳王岭李开宗窦科峰颜真韩苇张英起
- 关键词：MUC1甲状腺癌
- 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)cDNA的克隆、表达和活性测定被引量：8
- 2002年
- 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL)能选择性诱导肿瘤细胞凋亡 .为利用基因工程技术获得重组TRAIL蛋白可溶性片段 (sTRAIL) ,设计 1对引物 .利用PCR技术特异性扩增出sTRAIL的cDNA ,克隆于质粒pGEM 3Zf( )的EcoRⅠ和PstⅠ位点 .经测序证明序列正确后克隆于表达质粒pBV2 2 0的EcoRⅠ和PstⅠ位点 ,转化大肠杆菌DH5α .转化菌株经温度诱导 ,SDS PAGE检测和Western印迹鉴定 ,获得重组sTRAIL的高水平非融合表达菌株 .表达量占菌体总蛋白的 2 0 % .对其表达产物进行了初步纯化 ,SDS PAGE结果显示纯度可达 90 %以上 .用L92 9细胞测定其生物学活性表明 。
- 侯登勇颜真韩苇赵宁张英起
- 关键词：TRAIL克隆TNF肿瘤坏死因子活性测定
- 地龙胶囊（912）透析组分对MGc803胃癌细胞DNA合成的抑...被引量：6
- 1991年
- 用透析方法分离地龙胶囊并观察了可透析组分时MGc803胃癌细胞~3H-TdR参入的影响。实验结果如下:(1)该组分可抑制胃癌细胞的。~3H-TdR参入(实验组1776±217cpm,对照组2118±183cpm,P<0.005);(2)该组分经56℃加热0.5h,上述抑制作用仍然存在(加热组1808±407cpm,对照组2118±183cpm,P<0.05);(3)该组分加热与否对胃癌细胞~3H-TdR参入的抑制作用无显著差别(实验组1776±217cpm,加热组1808±407cpm,P>0.50)。这些结果表明,地龙胶囊透析组分具有直接抑制MGc803胃癌细胞的生长作用。该作用不因加热而消失,提示地龙胶囊透析组分具有一定的耐热性。
- 韩苇王克为
- 关键词：抑瘤作用脱氧核糖核酸
- 噬菌体随机十二肽库中VEGF模拟表位的筛选
- 目的从噬菌体随机十二肽库中筛选能与抗 VEGF 单克隆抗体 Avastin(bevacizumab)特异性结合的多肽。方法用 Avastin(bevacizumab)为靶分子,对噬菌体十二肽库进行三轮生物淘洗,随机挑取2...
- 冉永刚李萌韩苇张英起
- 关键词：VEGF
- 文献传递
- 冻干小鼠神经生长因子的研制
- 2001年
- 目的 研制小鼠神经生长因子 ( NGF) .方法 采用二次阳离子柱层析法 ,从雄性小鼠颌下腺分离提取 2 .5 S神经生长因子 ,建立了稳定的实验室与中试生产工艺 ,以及相应的质量鉴定规程 .结果 从体质量超过 2 5 g,鼠龄大于 60 d的雄性小鼠体内可获得高纯度、高产量、高活性的 2 .5 SNGF.纯度大于 95 % ,与抗 2 .5 S NGF抗体有特异结合能力 ,鸡胚背根神经节培养法测定的生物活性显示 ,其比活性达到 5× 10 8BU· g- 1 ( BU:生物活性单位 )以上 ,各项指标均符合质量鉴定标准 . 2 0 g· L- 1 人血白蛋白做冻干赋形剂 ,能有效保护 NGF的生物活性 .结论 研制了高质量的冻干小鼠神经生长因子 ,为 NGF的临床前和临床研究奠定了基础 .
- 颜真王俊楼王慧韩苇李波赵宁张英起
- 关键词：神经生长因子小鼠纯化生物活性
- 人MUC-1全长cDNA基因真核表达载体构建及在COS-7细胞中的表达被引量：12
- 2002年
- 目的 构建含人 MUC- 1全长 c DNA序列的真核表达载体 ,并观察其在 COS- 7细胞中的表达 .方法 将目的基因 MUC- 1克隆入 p GEM- 3zf(- )载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定 .亚克隆入真核质粒 pc DNA3.1(+) ,构建真核表达载体 pc DNA3.1(+) - MU C- 1.用电穿孔法将重组质粒转入 COS- 7细胞 ,以免疫荧光和流式细胞仪检测 MUC- 1的表达 .结果 酶切鉴定和序列分析证实 ,重组质粒含有人MU C- 1全长 c DNA编码序列 ,转染实验表明 MU C- 1基因能在 COS- 7细胞中表达 .结论 人 MU C- 1全长 c DNA基因真核表达载体构建及其在 COS- 7中的表达均获成功 。
- 袁时芳李开宗韩苇颜真张英起
- 关键词：真核表达COS-7细胞电穿孔法核酸疫苗
- 天然胸腺素α_1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：7
- 2003年
- 目的为降低CNBr裂解融合蛋白的毒副作用 ,改进利用基因重组技术制备胸腺素α1 (Tα1 )的流程工艺。方法按大肠杆菌惯用密码合成Tα1 基因 ,克隆于质粒pGEM 3Zf的EcoRⅠ和PstⅠ位点 ,裂解位点为羟胺裂解位点Asn Gly对应的核苷酸序列 ,测序正确后用BamHⅠ和BglⅡ位点串联为Tα1 4串体 (Tα1 ④ )和Tα1 8串体 (Tα1 ⑧ ) ,经再次测序确认后克隆入pThioHisA的EcoRⅠ和PstⅠ位点 ,转化大肠杆菌TOP1 0。结果经 1mmol LIPTG诱导4h获得了硫氧还蛋白 (thioredoxin)与Tα1 ④和Tα1 ⑧的融合表达 ,用离子交换色谱可纯化出融合蛋白 ,羟胺裂解融合蛋白 ,能够释放出Tα1 单体。结论羟胺能够裂解融合蛋白释放出天然Tα1 。
- 石继红韩苇颜真张英起
- 关键词：胸腺素Α1羟胺基因克隆
